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鬼针草滴眼液对去势雄兔干眼症的治疗效果分析.docx

鬼针草滴眼液对去势雄兔干眼症的治疗效果分析.docx

上传者: 壹個人孤單落寞 2017-03-16 评分 0 0 0 0 0 0 暂无简介 简介 举报

简介:本文档为《鬼针草滴眼液对去势雄兔干眼症的治疗效果分析docx》,可适用于高等教育领域,主题内容包含鬼针草滴眼液对去势雄兔干眼症的治疗效果分析  干眼症是由于泪液的量或质的异常引起的泪膜不稳定和眼表面损害严重影响患者视力和生活且患病率逐年上升以下是符等。

鬼针草滴眼液对去势雄兔干眼症的治疗效果分析  干眼症是由于泪液的量或质的异常引起的泪膜不稳定和眼表面损害严重影响患者视力和生活且患病率逐年上升以下是搜集整理的一篇探究鬼针草滴眼液对去势雄兔干眼症治疗效果的供大家阅读参考。  眼部是性激素作用的重要靶器官之一雄激素、雌激素、孕激素和催乳素受体广泛存在于人、兔和鼠的泪腺、睑板腺及角膜等眼表组织,而性激素水平下降泪膜不稳定、局部炎症反应加重导致了干眼症的形成。对于雄激素水平下降导致的干眼症患者目前多以局部对症治疗而雄激素替代治疗副作用多患者不易接受。因此临床寻找一种新的激素替代药物成为了眼科急需解决的问题。鬼针草是一种天然植物雄激素既可补充人体雄激素不足也可与细胞表面雄激素受体结合发挥微弱雄激素效应在雄激素水平下降时可能具有独到效果我们前期已经报道了鬼针草叶水煎液能用于治疗更年期和绝经期女性干眼患者的症状和部分体征,为了进一步探讨鬼针草滴眼液对此类干眼症效果首先制作去势雄兔干眼症模型测定其给药前后基础泪液分泌量和泪液蛋白变化然后将其用于治疗去势雄兔干眼症的动物试验研究。现报告如下:  资料和方法  鬼针草提取液的制备  的方法制定鬼针草有效部位的提取方案。鬼针草全草kg,乙醇提取次第次加入倍量第次加入倍量合并乙醇提取液减压回收乙醇至无醇味将浓缩液真空干燥粉碎。依次用CHCl和EtOAc萃取每次加入倍量得到鬼针草提取液。  鬼针草滴眼剂的制备  以蒸馏水溶解鬼针草提取物水:提取物质量比为,加入眼润滑剂羧甲基纤维素浓度控制,加入NaHCO以及KCl作为缓冲系统浓度控制在以下。此时检测理化特性:pH值、渗透压、比重、表面张力、粘稠度和屈光指数之后调整鬼针草提取物、眼润滑剂、缓冲系统的含量使之尽量达到:pH:~渗透压:~mOsm比重:约等于表面张力:~dyncm粘稠度:略高于水屈光指数:的标准。最后加入保存剂苯扎溴铵其浓度控制在  分组及手术  新西兰大白兔只(月龄均为雄性体重~kg)。裂隙灯显微镜、眼底镜检查眼前节及眼底无异常SchirmerI试验(SchirmerItest,SIT)mmmin由南昌大学动物实验室提供。参照马轶群等的方法,将只雄兔行双侧睾丸切除术(orchiectomized,ORX)。将这只随机分为组(每组只均为右眼):对照PBS组(A)、鬼针草滴眼剂组(B)连续滴眼月每日次。C组只雄兔手术后不滴眼液作为阳性对照。另只雄兔切开阴囊不切除睾丸作为阴性对照术前肌肉滴注青霉素针U,术后连续d肌肉注射青霉素针U,预防感染。分别于术前、术后周、周、月及月对患者行SIT检查、角膜荧光素染色、泪液蛋白测定及角膜共聚焦显微镜扫描。  SIT检测及角膜荧光素染色  SIT检查泪液基础分泌情况。取mmmm有刻度的试纸一端反折mm,轻轻放入被测眼下结膜囊的中外处min后取出滤纸测量湿长。参照张梅等的标准以mmmin为正常每组动物均由同一人检查每组动物每次检查时间、地点、照明亮度、湿度及温度相同。角膜荧光素染色:将滴荧光素钠滴眼嘱其瞬目评分系统参考国家眼科研究临床干眼评分,分为级级:无染色级:很少的播散性污渍染色级:中度污渍染色程度在~级间级:重度融合性污渍染色。  泪液蛋白测定  所有的泪液样品在点到点收集毛细吸管吸取患者下泪河约μl非刺激性泪液用mlEP管保存置于冰箱中。以小牛血清白蛋白为标准Brandford泪液总蛋白含量。淀粉酶活性:使用ethylidenenitrophenylαdmaltoheptaoside(LeadmanGroupCo,Ltd,Beijing,China)作为底物。  检测处的双色读数在nm和nm采用自动生化分析仪分析(LXBeckman,Fullerton,CA)乳铁蛋白测定采用放射免疫分析法:取泪液样品μl,生理盐水稀释制作标准曲线后计算出乳铁蛋白含量。溶菌酶含量采用试管比浊法测定溶菌酶测试盒、染色菌液制备、溶菌酶标准液配制及标准曲线的绘制均按说明书进行将泪液及染色菌液混匀离心后取上清液根据测定管与样品对照管光密度差值查标准曲线后得出样品中溶菌酶含量。  共聚焦显微镜检查  采用Confoscan裂隙扫描共聚焦显微镜(NidekCoLTD,日本)检查操作步骤参考文献:待检兔眼表麻后将兔头部固定在显微镜前双眼固视正前方检查者移动镜头使共焦显微镜与角膜上皮细胞时将镜头缓慢向前推进于中央角膜处进行全层扫描结束后选择有价值的图像与录像存盘并计算角膜上皮基底细胞及炎症细胞密度。  统计学方法  采用GraphPadPrism统计软件进行统计学处理计量资料以均数标准差(xs)表示计数资料用χ检验检验水准均为α=各组治疗前后及两组间同一时间点的均数比较采用单向方差分析studentt检验及Dunnett检验以P<为差异有统计学意义。  结果  治疗前后及两组间各项干眼检测指标评定结果比较  治疗前A、B两组SIT相比差异无统计学意义(tSIT=,P>)治疗月后B组SIT较治疗前均有不同程度改善差异有统计学意义(tBwk=,tBwk=,tBmo=,tBmo=,P<)而A组SIT较治疗前明显恶化差异有统计学意义(tAwk=,tAwk=,tAmo=,tAmo=,P<)A、B两组各时间点SIT相比差异均有统计学意义(twk=,twkmo=,tmo=,P<,详见表  治疗前A、B两组荧光素染色评分相比差异无统计学意义(tFL=,P>)治疗月后B组荧光素染色评分较治疗前均有不同程度改善差异有统计学意义(tBwk=,tBwk=,tBmo=,tBmo=,P<)而A组荧光素染色评分较治疗前明显恶化差异有统计学意义(tAwk=,tAwk=,tAmo=,tAmo=,P<)A、B两组治疗后周月月荧光素染色评分相比差异均有统计学意义(twk=,twk=,tmo=,tmo=,P<)。见表  两组用药前后各时间点泪液蛋白比较  治疗前A、B两组泪液总蛋白量、乳铁蛋白、溶菌酶及淀粉酶活性相比较差异无统计学意义(ttotalproteins=,tlysozyme=,tlactoferrin=,tamylaseactivity=,P>)治疗月后A、B组泪液总蛋白量、乳铁蛋白、溶菌酶及淀粉酶活性与治疗前相比差异有统计学意义(tAwk=,tAwk=,tAmo=,tAmo=tBwk=,tBmo=,tBmo=,P<)A、B两组各时间点泪液总蛋白量、乳铁蛋白、溶菌酶及淀粉酶活性相比差异均有统计学意义(twk=,twk=,tmo=,tmo=,P<)。见表  治疗前后及两组间共聚焦显微镜结果  正常角膜上皮基底细胞显示为光暗细胞体窄的细胞边界(附图A)。制作去势雄兔月的干眼症模型后角膜上皮基底细胞体积缩小可见有呈亮光样的炎性细胞浸润(附图B)。经过鬼针草滴眼剂处理月的B组在上皮基底层可见极少数的炎性细胞浸润但与正常雄兔基底细胞比较密度稍有降低(附图D)而经过PBS处理的A组在上皮基底层可见有大量的呈亮光样炎性细胞上皮基底细胞密度明显增加(附图C)。炎症细胞进行计数发现经过治疗月后A组上皮基底细胞和炎症细胞密度分别为()cellsmm和()cellsmm,而B组上皮基底细胞和炎症细胞密度分别为(和()cellsmm,两组比较差异均有统计学意义(tBC=,tIC=,P<)。见附图E、F  讨论  我国干眼症的发病率逐渐升高并向低龄化发展而雄激素失调是干眼症主要发病机制之一它可调节机体及局部的免疫功能调控泪腺和睑板腺的形态、发育、分化及分泌功能且对眼的泪液稳定、炎症反应以及细胞凋亡有重要的调节作用。由绝经、衰老、自身免疫性疾病、服用抗雄激素药物等原因引起的雄激素水平下降时均可导致泪膜不稳定、局部炎症反应和泪腺等腺体组织细胞凋亡加重最终导致干眼症。  眼是性激素作用的靶器官已证实雄激素、雌激素、孕激素和催乳素受体广泛存在于人、兔和鼠的泪腺、睑板腺、角膜等眼表组织中雄激素替代药物的意义在于与雄激素受体结合而发挥生物学效应。有研究表明体内睾酮水平与泪液分泌量之间呈正相关此外雄激素缺乏可促进Sogren综合征的进展并与泪腺炎症、睑板腺功能异常和重症干眼症有关而雄激素替代疗法是目前此类干眼唯一的对因治疗方法但长期雄激素应用会造成男性前列腺肥大甚至肿瘤、女性男性化等严重副作用给患者带来了长期的苦恼。因此寻找一种行之有效的雄激素替代药物势在必行。黄酮类物质是细胞膜雄激素受体的刺激物可以与细胞膜雄激素受体结合发挥生物学效应  鬼针草为一种厥阴肝经的天然中药能分离出木犀草素、槲皮素、异槲皮苷、金丝桃苷、芦丁等种黄酮类物质含总黄酮,其化学结构与雄激素结构相似可以与细胞膜雄激素受体结合发挥生物学效应起到拟雄激素活性作用从而改善泪腺、睑板腺的分泌情况减轻全身和眼局部的自身免疫反应抑制泪腺和角膜的局部细胞凋亡最终达到治疗干眼症的目的。此外鬼针草具有抑菌作用同时含大量胆碱可引起流泪防止干眼患者的眼表状态进一步恶化。MCVEY通过对连续大豆异黄酮灌胃鼠检测研究表明连续灌胃d后异黄酮灌胃鼠睾丸和精液中雄激素含量与对照组比较均有显着的升高。李桥等发现鬼针草可以用于治疗局部滴用阿托品导致的干眼。利用放射性示踪标记的方法研究表明黄酮类物质是细胞膜雄激素受体的刺激物可以与细胞膜雄激素受体结合发挥生物学效应笔者前期探讨了密蒙花等其他黄酮类植物雄激素在干眼症作用本实验研究表明鬼针草滴眼液也可明显改善干眼症状减少了水煎液的全身副作用适用于胃肠道吸收不良的患者。实验表明鬼针草滴眼液在用药月后可明显改善去势雄兔干眼SIT和改变泪液蛋白成分PBS治疗则改善不明显可能的原因是SIT反映泪液基础分泌量泪液蛋白反映泪液的成分鬼针草滴眼液主要作用机制可能发挥拟雄激素作用促进眼睑腺体(睑板腺分泌的脂质层成分和泪腺分泌的泪液)分泌故可明显改善SIT和部分泪液蛋白的结果。  此外笔者在实验中还发现鬼针草能有效减少雄激素失调性干眼症的炎症细胞浸润和角膜上皮基底细胞萎缩。这可能与鬼针草改善泪腺、睑板腺的分泌情况抑制角膜的局部细胞凋亡相关。  综上所述对于去势雄兔干眼症鬼针草滴眼液可较快而明显地改善干眼的症状和维持泪液蛋白成分。它是一种安全有效、给药途径简单、副反应少患者能长期坚持的治疗干眼的方法具有广泛临床应用及推广价值。进行临床试验并研究其干预机制探讨其作用的受体、信号传导途径、调节机制和有关在临床方面的应用可能为探索抗眼部炎症、新生血管病变与变性性眼病的治疗策略提供新的途径。  参考文献:  刘超王传富。NFκBpNOS在去势雄兔角膜结膜和泪腺中的表达及意义J眼科研究,():  李教社赵玉英李秀兰。鬼针草黄酮类化合物的分离和鉴定J药学学报,():  邵毅余瑶黄国栋等。鬼针草治疗绝经期女性中重度干眼症临床初探J中国实用眼科杂志,():  邵毅余瑶黄国栋等。鬼针草叶治疗更年期女性中重度干眼症临床研究J中国中药杂志,():  曹园瞿慧姚毅等。鬼针草化学成分的研究J中草药,():  马轶群王传富刘美光。去势雄兔干眼病模型角膜上皮细胞橱亡及相关基因表达的研究J眼科研究,():  邵毅余静余瑶等。无缝线骨髓间充质干细胞羊膜移植预防角膜缘干细胞缺乏的实验研究J眼科新进展,():

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