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静态顶空与顶空固相微萃取法测定云.docx

静态顶空与顶空固相微萃取法测定云

Kay德艳
2017-06-03 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《静态顶空与顶空固相微萃取法测定云docx》,可适用于农林牧渔领域

静态顶空与顶空固相微萃取法测定云*王茜茜李军明王亚琴张学忠李昆志(昆明理工大学生物工程技术研究中心云南昆明云南省产品质量监督检验研究院云南昆明)要:分别采用静态顶空与顶空固相微萃取法提取云南野生干巴菌的香气成分通过气相色谱-质谱联用定性定量分析对两种方法所得的香气成分进行比较。结果表明:两者共同检出的种组分分别为苯乙醛、天然壬醛、癸醛、摘-辛酮、-辛醇、-辛烯--醇-辛酮、-辛醇是构成云南野生干巴菌香气的重要物质其中-辛烯--醇、两种方相对含量较高较真实地反映了云南野生干巴菌的香法测出的相对含量均较高。静态顶空法检测出的组分种类较多气成分顶空固相微萃取法检测到的挥发性物质较少主要是醛酮类和弱极性的烃类物质基本能反映云南野生干巴菌的特色香味成分。关键词:静态顶空顶空固相微萃取云南野生干巴菌香气成分气相色谱质谱联用ComparisonofaromaticcomponentsfromSparasiscrispaextractedbyStaticHeadspaceandHeadspace-SPME*WANGQian-qianLIJun-mingWANGYa-qinZHANGXue-zhongLIKun-zhi(BiotechnologyResearchCenterKunmingUniversityofScienceandTechnologyKunmingChinaYunnanInstituteofProductQualitySupervision&InspectionKunmingChina)Abstract:AromaticcomponentsfromSparasiscrispawereextractedbyStaticHeadspace(SHS)andSolidPhaseMicroextraction(SPME)respectivelyTheiraromaticcomponentswerequalitativelyandquantitativelyanalyzedbythegaschromatographymassspectrometry(GC-MS)andcomparedPhenylacetaldehydeNonylaldehydeDecylp-Tolualdehyde-OctanoneDL--Octanoland-Octen--olwereidentifiedbyStaticHeadspacealdehydeandSPMEsimultaneouslyTheresultsshowedthat-OctanoneDL--Octanoland-Octen--olcontributedmutuallytotheparticulararomaofSparasiscrispaManymorecompoundswereidentifiedinStaticHeadspaceTheresultcouldreflecttherealconstitutesofSparasiscrispaaromaanalyzedbythismethodWhilethefeweraromaticcomponentswereidentifiedinHS-SPMESPMEmainlylowboilingaldehydesketoneandweaklypolarhydrocarbonTheyreflectedthebasiccharacteristicsofthearomaticcomponentsofSparasiscrispaKeywords:StaticHeadspaceHS-SPMESparasiscrispaaromaticcomponentsGC-MS中图分类号:TS文献标识码:A文章编号:-()--年采用水蒸气蒸馏和乙醚萃取法提取挥发油经气质联用(GC-MS)分离和鉴定云南干巴菌中挥发成分的报道。云南野生干巴菌香气成分较为复杂各种提取方法的原理不同所得到的香味物质是否一致差异是否显著目前尚无相关的报道。本文以云南野采用静态顶空法(SHS)和顶生干巴菌作为研究对象空固相微萃取法(HS-SPME)两种前处理方法进行处理通过GC-MS分析比较两种处理方法所得的香气物质种类和含量的差异为今后云南野生干巴菌香气成分的研究提供科学的实验数据和技术手段。干巴菌(Sparasiscrispa(Wulf)Fr)又名绣球菌是绣球菌科(Sparassidaceae)绣球菌属的一种真菌植物。干巴菌不仅具备独特、浓郁的鲜香味而且含有大量的营养物质如氨基酸、蛋白质、矿物质、维生素等具有很高的营养保健价值是别具云南特色的野生珍贵食用菌[-]。目前有关云南野生食用干巴菌[]香气成分的分析报道较少仅见吕瑜平等收稿日期:--分析。*通讯联系人在作者简介:王茜茜(-)女硕士研究生研究方向:植物香气成分基金项目:云南省中青年学术技术带头人后备人才培养基金(py-)。材料与方法材料与仪器水新鲜野生干巴菌MΩcm。市售NaCl分析纯高纯GCMS-QP气相色谱-质谱联用仪AOC-顶空分析自动进样器日本岛津公司工作站GC-MSSolution萃取纤维头μmPDMSDVB气相色谱柱Agilent公司DB-MS石英弹性μm)。毛细管柱(m×mm实验方法静态顶空法通过优化静态顶空法的条件建立SHS的实验过程。取干巴菌g用研钵研磨后转移置mL的顶空瓶中℃振荡min。抽取顶空气体μL进行GCMS分析。静态顶空法色谱条件a气相色谱条件:毛细管色谱柱(DB-MS)柱温:起始温度℃保持min以℃min的速率升温至℃保持min然后以℃min的速率升温至℃保持min进样口温度:℃载气为高纯氦气(体积分数)柱流速为mLmin不分流进样开始进样时间:min。b质谱条件:EI电离源电子能量eV离子源温度℃发射电流A溶剂切除时间:min全扫描模式时间扫描范围:~min质量扫描范围:~mz。顶空-固相微萃取法通过优化顶空-固相微建立SPME的实验过程。取干巴菌萃取法的条件g与gNaCl共同研磨用mL水转移至mL℃条件下振荡minμmPDMS的顶空瓶中DVB萃取头萃取min进行GCMS分析。顶空-固相微萃取法色谱条件a气相色谱条件:毛细管色谱柱(DB-MS)柱温:起始温度℃保持min以℃min的速率升温至℃保持min然后以℃min的速率升温至℃保持min进样口温度:℃载气为高纯氦气(体积分柱流速为mLmin不分流进样开数)始进样时间:min。b质谱条件:EI电离源电子能量eV离子源温度℃发射电流A溶剂切除时间:min全扫描模式时间扫描范围:~min质量扫描范围:~mz。图-醇。云南野生干巴菌样品中挥发性香气成分的质谱图注:A静态顶空法B顶空固相微萃取法。采用静态顶空和顶空-固相微萃取法香气组分含量的差别-辛烯--醇、-辛酮、-辛由表可以看出醇等是构成云南野生干巴菌香气的重要物质。本研究还发现SHS法与HS-SPME法检测到的香味物质SHS方法测得的相的相对含量差异较大如-辛酮对含量为而HS-SPME法为甚至某类香味物质只在一种提取方法中检出而另一种方法无法检出如酯类化合物甲酸异戊酯、甲酸辛酯、(E)--甲基--丁酸乙酯、苯乙酸甲酯和苯乙酸乙酯SHS法均检出而HS-SPME未检出。讨论香气物质的富集浓缩是否全面、完整和真实直接影响到香气成分的定性和定量分析。云南野生干巴菌的香气成分较为复杂因此选择适当的提取技术对分析其所具有的香气成分是前提与基础。蒸馏萃取法(SDE)是一种较为常用的香气成分富集浓缩方法在加热的条件下使挥发性香气物质随着水蒸气与萃取剂在密闭装置的顶部混合并进行萃取然后冷凝回流。这样反复进行可以把低浓度的挥发性但是高温密闭的环境条件次生反应物质高度浓缩[]剧烈人工效应产物较多。静态顶空法(SHS)不需有机溶剂能直接得到所提取的挥发性物质因此在[]香气成分的分析方面具有独特的意义和价值并且SHS法灵敏度较高在测定痕量组分时具有其他方法无法比拟的优势。顶空固相微萃取法(HS-SPME)是将萃取头置于顶空气体中一段时间待平衡后将萃取头取出插入气相色谱进样口热解吸涂层上吸附的物质被萃取物解吸后靠流动相将其导入色谱柱完[]成提取、分离、浓缩的全过程。由于香气成分大多是因此选择μmPDMSDVB萃取非极性和弱极性的化合物定性与定量化合物定性方法:经FFNSC数据库检索定按SI相似度>的原则作为鉴定结果化合物性定量方法:按峰面积归一化法计算化合物的相对百分含量。结果与讨论采用静态顶空和顶空-固相微萃取法提取香气组分的差别采用SHS与HS-SPME富集云南野生干巴菌的香气成分经GC-MS分离、鉴定总离子流图如图分析结果见表。表显示:云南野生干巴菌挥发性成分主要为酯类、醛类、酮类和醇类化合物。其中SHS法检测出的组分种类相对较多有种SPME法相对较少只有种。两者共同检出的种组分分别为-辛酮、-辛醇、-辛烯-苯乙醛、天然壬醛、癸醛、表序号云南野生干巴菌样品香气物质静态顶空与顶空固相微萃取检测结果分子式分子量CAS号峰面积相对含量()StaticHeadspaceheadspaceSPME------------------------------------化合物酯类化合物(种)CHO甲酸异戊酯(Isoamylformate)CHO甲酸辛酯(Formicacid)CHO(E)--甲基--丁酸乙酯(ethyltiglate)CHO苯乙酸甲酯(Methylphenylacetate)CHO苯乙酸乙酯(Ethylphenylacetate)醛类化合物(种)CHO-甲基丁醛(-Methylbutyraldehyde)CHO正戊醛(Valeraldehyde)CHO己醛(Hexanal)CHO糠醛(-Furaldehyde)CHO庚醛(Heptaldehyde)CHOS-(甲基硫代)丙醛(-(methylthio)propionaldehyde)CHO苯甲醛(Benzaldehyde)CHO辛醛(Octylaldehyde)CHO苯乙醛(Phenylacetaldehyde)CHO天然壬醛(Nonylaldehyde)CHO反式--癸烯醛(Decenal)CHO癸醛(Decylaldehyde)桃醛(Peachaldehyde)反式--辛烯醛(trans--Octen--al)对甲基苯甲醛(p-Tolualdehyde)-辛酮(-Octanone)-十一酮(-Undecanone)-壬酮(-Nonanone)胡椒酮(Piperiton)异戊醇(-Methyl--butanol)-辛醇(DL--Octanol)β-苯乙醇(Phenethylalcohol)-辛烯--醇(-Octen--ol)辛醇(-Octanol)苯酚(Phenol)异戊酸(Isovalericacid)α-蒎烯(alpha-pinene)-正戊基呋喃(-pentylfuran)-乙酰基吡啶(-acetylpyridine)茶香螺烷((-)-theaspirane)-甲基--乙酰基呋喃(-Acetyl--methylfuran)β-波旁烯(β-bourbonene)-Dimethylheptyl)phenol(OandP))壬基酚(-(β-环氧石竹烷(β-caryophylleneepoxide)十四烷(Tetradecane)十七烷(n-Heptadecane)delta-杜松萜烯(delta-Cadinene)十八烷(Octadecane)CHOCHOCHO酮类化合物(种)CHOCHOCHOCHO醇类化合物(种)CHOCHOCHOCHOCHO其他(种)CHOCHOCHCHOCHNOCHOCHOCHCHOCHOCHCHCHCH--------------------------------------------------------------------------------------------头具有较好的提取效果。本研究HS-SPME法检测到的挥发性物质有种主要是醛类、酮类和弱极性的烃类化合物SHS法检测出种组分主要是酯类、醛类、酮类和醇类化合物。从检测到化合物种类看与吕瑜等报道新鲜云南干巴菌挥发油的主要化学成分:亚-二乙氧基乙烷、油酸甲酯、棕榈酸、苯乙醛、十六碳烯酸、十五烷酸、邻苯二甲酸二丁酯、苯甲酸、苯乙醇、硬脂酸、二十一烷、肉豆蔻酸、十八碳烯酰胺、苯乙酸等有很大差别。SHS和HS-SPME两种方法检出种共-辛酮、同组分分别为苯乙醛、天然壬醛、癸醛、(下转第页)酶解蛋白质的时候受温度影响蛋白得率随酶解时间的增加而增加但达到一定时间后蛋白得率将不但达到一再增大蛋白得率随料液比的增加而增大定值后继续增加料液比会稀释底物浓度所以蛋白得率减小。验证实验在响应面分析法求得的最佳条件下即酶解pH为加酶量为温度为℃时间为h料液比为条件下进行次平行实验蛋白得率次平行实验的平均值为。蛋白得率预测值为±。说明响应面分析的实验结果与回归方程预测值吻合良好。结论利用响应面分析方法对水酶法提取大豆蛋白的酶解工艺参数进行了优化。建立了相应的数学模型并且为以后的中试以及工业化生产提供理论基础得到了最优酶解工艺条件为酶解pH、加酶量、酶解温度℃、酶解时间h、料液比∶。图各因素对考察指标的降维分析图由图的分析结果可明显看出pH(x)与酶解温pH(x)与酶解时间(x)、度(x)、酶解时间(x)与料液比(x)的交互作用对多肽得率的影响。由此可知酶解pH和酶解时间与其他因素的交互作用对水解度地影响较大。经过验证与对比实验可知在最优酶解工艺条件下蛋白得率可达到。参考文献[]J]药膳食疗:余文慧食药兼优赤小豆[[]韩涛孙献军李丽萍等红小豆蛋白与淀粉的提取和分J]食品工业科技():-离初探团[[]C-FChauPCKCheungY-SWongChemicalcompositionofthreeunderutilizedtegumeseedsgrowninChina[J]FoodChemistry:-[]中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所食物成分M]北京:人民卫生出版社表[[]张强阐国仕陈红漫玉米抗氧化肽的分离制备及其体J]中国粮油学报():-外抗氧化活性的研究[[]代卉施用晖韩芳等小麦肽免疫活性及抗氧化作用的J]天然产物研究与开发:-研究[[]任海伟王常青黑豆低聚肽的抗氧化活性评价及其氨基J]食品与发酵工业():-酸组成分析[[]GuangtaoMengChingYungMaDavidLeePhillipsRamanspectroscopicstudyofglobulinfromPhaseolusangularis(redbean)[J]FoodChemistry:-[]MengGTMaCYFlowpropertyofglobulinfromredbean(Phaseolusangularis)[J]FoodResearchInternational:-[]MengGTMaCYFourier-transforminfraredspectroscopicstudyofglobulinfromPhaseolusangularis[J]International:-JournalofBiologicalMacromolecules图各酶解参数对总蛋白提取率的降维分析檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾(上接第页)-辛醇、-辛烯--醇-辛酮、其中-辛烯--醇、-辛醇这三种物质经两种方法检出含量都比较高说明这三种物质可能是构成云南野生干巴菌香气的选择静态顶空方法能更全面地反重要物质。因此映野生干巴菌的香气成分。J]西南林学院学报():-用[[]吕瑜平文净朱伟明云南干巴菌挥发油化学成分的研J]天然产物研究与开发():-究[[]王峰曹福亮张洪娟SPME法与SDE法测定雨花茶香气J]林业科技开发():-成分比较[[]MarriottPJShellieRCornwellCGasChromatographictechnologiesforanalysisofessentialoil[J]JChromatogrA:-[]耿亚鹏张慧敏李小川固相微萃取技术及其在分析中J]河北化工():-的应用[参考文献[]吴少雄王保兴郭祀远等云南野生食用干巴菌的营养J]现代预防医学():-成分分析[[]干巴菌的开发利郭安胡慧蓉云南优特野生食用菌

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