Raw264.7培养技巧
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RAW264.7细胞是一种鼠源的巨噬细胞系，RAW264.7细胞贴壁快，形态以类圆形和不规则为主，一般1～2个核，极少数有3个核，胞浆伸展时胞体较大。细胞贴壁紧，胰酶-EDTA难以消化，需要多次消化吹打，也可采用细胞刮法。
一、Raw264.7培养注意事项
1、RAW264.7具有很强的吞噬能力，当吞噬抗原后，细胞会释放趋化因子，进一步促进细胞伸出伪足，增强粘附攀爬能力。细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣都会促进该细胞呈现梭形、长梭形，镜下会看到具有细长伪足的小细胞被类似上皮的梭形大细胞取代。
2、每次传代都很难消化下来。用力过大则对细胞损伤较大，这种细胞传代时接种密度要大，否则容易使巨噬细胞向终末细胞分化，细胞变成长形，并且不能回复，这是培养这种细胞时最需要注意的问题。
3、RAW264.7细胞生长时喜欢结伴。正常生长状态应该是一小片一小片的生长，片片之间不连接，等到长到更多更密的时候会连成大片，并且会叠加成层。所以，要很好地控制好细胞的生长速度，不要等到叠加成层的时候再传代。
4、RAW264.7细胞传代后贴壁时间较短，半小时就能贴很多，刚贴壁是细胞呈圆形，折光度很好，镜下观察如小珍珠状一个个地散落于瓶底面。生长一段时间后，部分细胞会变成类似四角形，伸出伪足之类的。这个时候就是提醒你注意传代了，这部分细胞如再不传代，很容易就老化掉。
二、培养、传代、冻存和复苏
培养条件：90%alpha-MEM+10%FBS；5%CO2，37.0°C
传代条件：直接去除旧培养液，0.25%trypsin/EDTA消化3分钟，收集细胞离心去上清，加入新鲜培养液后用电动移液器吹落细胞，置于新dish中并补充适当体积新鲜培养液。1:3～1：6传代，约每天需传代一次（视细胞密度而定）。冻存条件：20%FBS的培养基+10%DMSO，4℃放置2小时，再将冻存管置于梯度降温冻存盒（Nalgene，如无此条件可用泡沫盒包裹）并放于-80度过夜，第二天转入液氮罐；
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复苏条件：迅速从液氮罐中拿出冻存管，37℃水浴锅孵育，复温后吸出细胞至15ml离心管，1：1缓慢加入培养液（如冻存管中1ml冻存液，则缓慢加入1ml培养液），离心去除培液后用新鲜培液重悬置于dish中培养。
三、破骨细胞分化
在RANKL的诱导下，RAW264.7细胞可以分化为成熟的破骨细胞，此时应用破骨细胞特异性的抗酒石酸酸性磷酸染色（TRAP染色），在有成熟破骨细胞的部位可见红色的阳性反应，所以一般认为RAW264.7是一种前破骨细胞。
RAW264.7细胞向破骨细胞的分化是一个NF-kb通路依赖的过程，先前的大量研究表明，NF-kb通路受到抑制时，RAW264.7细胞不能向破骨细胞的分化。
四、Raw264.7的感染
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