购买

¥16.0

加入VIP
  • 专属下载券
  • 上传内容扩展
  • 资料优先审核
  • 免费资料无限下载

上传资料

关闭

关闭

关闭

封号提示

内容

首页 高中生物选修一生物技术实践 知识点总结91056

高中生物选修一生物技术实践 知识点总结91056.doc

高中生物选修一生物技术实践 知识点总结91056

似曾相识燕归来
2019-03-07 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《高中生物选修一生物技术实践 知识点总结91056doc》,可适用于高中教育领域

高中生物选修一生物技术实践知识点总结专题一传统发酵技术的应用课题一果酒和果醋的制作、发酵:通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。、有氧发酵:醋酸发酵谷氨酸发酵无氧发酵:酒精发酵乳酸发酵、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌酵母菌的生殖方式:出芽生殖(主要)分裂生殖孢子生殖、在有氧条件下酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖。CHO+OrarrCO+HO、在无氧条件下酵母菌能进行酒精发酵。CHOrarrCHOH+CO、℃左右最适宜酵母菌繁殖酒精发酵时一般将温度控制在℃℃、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色在缺氧呈酸性的发酵液中酵母菌可以生长繁殖而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。、醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代谢类型是异养需氧型,生殖方式为二分裂、当氧气、糖源都充足时醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸当缺少糖源时醋酸菌将乙醇变为乙醛再将乙醛变为醋酸。CHOH+OrarrCHCOOH+HO、控制发酵条件的作用①醋酸菌对氧气的含量特别敏感当进行深层发酵时即使只是短时间中断通入氧气也会引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最适生长温度为~℃控制好发酵温度使发酵时间缩短又减少杂菌污染的机会。③有两条途径生成醋酸:直接氧化和以酒精为底物的氧化。、实验流程:挑选葡萄rarr冲洗rarr榨汁rarr酒精发酵rarr果酒(rarr醋酸发酵rarr果醋)、酒精检验:果汁发酵后是否有酒精产生可以用重铬酸钾来检验。在酸性条件下重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。先在试管中加入发酵液mL再滴入物质的量浓度为molL的HSO滴振荡混匀最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液滴振荡试管观察颜色、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的出料口是用来取样的。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连接其目的是防止空气中微生物的污染。开口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。使用该装置制酒时应该关闭充气口制醋时应该充气口连接气泵输入氧气。疑难解答()你认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗?为什么?应该先冲洗然后再除去枝梗以避免除去枝梗时引起葡萄破损增加被杂菌污染的机会。()你认为应该从哪些方面防止发酵液被污染?如:要先冲洗葡萄再除去枝梗榨汁机、发酵装置要清洗干净并进行酒精消毒每次排气时只需拧松瓶盖不要完全揭开瓶盖等。()制葡萄酒时为什么要将温度控制在~℃?制葡萄醋时为什么要将温度控制在~℃?温度是酵母菌生长和发酵的重要条件。℃左右最适合酵母菌的繁殖。因此需要将温度控制在其最适温度范围内。而醋酸菌是嗜温菌最适生长温度为~℃因此要将温度控制在~℃。专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养培养基:人们按照微生物对营养物质的不同需求配制出供其生长繁殖的营养基质是进行微生物培养的物质基础。培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂(是从红藻中提取的一种多糖在配制培养基中用作凝固剂)后制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生活生产固体培养基应用于微生物的分离和鉴定半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成其中成分的种类比例明确常用于微生物的分离鉴定。天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成常用于实际工业生产。按照培养基的用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质以抑制不需要的微生物生长促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的用以鉴别不同类别的微生物。划分标准培养基种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂如琼脂观察微生物的运动、分类、鉴定固体培养基加凝固剂如琼脂微生物分离、鉴定、活菌计数化学组成天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成)分类、鉴定目的用途选择培养基培养基中加入某种化学物质以抑制不需要的微生物的生长促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物鉴别培养基根据微生物的代谢特点在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。碳源:能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO、NaHCO等无机碳源糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。氮源:能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N、NH、NO、NH(无机氮源)蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨(有机氮源)等。只有固氮微生物才能利用N。培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件无菌技术middot获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵要注意以下几个方面:①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外还有什么目的?答:无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。消毒与灭菌的区别消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。消毒方法常用煮沸消毒法巴氏消毒法(对于一些不耐高温的液体)还有化学药剂(如酒精、氯气、石炭酸等)消毒、紫外线消毒。灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能灭菌方法:①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法所用器械是干热灭菌箱③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法所用器械是高压蒸汽灭菌锅。④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法所用器械是紫外灯。消毒与灭菌的区别比较项目消毒灭菌条件使用较为温和的理化方法使用强烈的理化因素结果杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)杀死物体内外所有的微生物包括芽孢和孢子适用实验操作的空间、操作者的衣服和手微生物的培养器皿、接种用具和培养基等常用方法煮沸消毒法(如在℃煮沸~min)、巴氏消毒法(如在℃煮min)使用酒精、氯气、石炭酸等化学药剂进行消毒灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌三种常用灭菌方法的比较灭菌方法灭菌条件灭菌时间适用材料或用具灼烧灭菌酒精灯火焰的充分燃烧层直至烧红接种环、接种针或其他金属工具干热灭菌干热灭菌箱内~℃~h玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等高压蒸汽灭菌kPa℃~min培养基等.制作牛肉膏蛋白胨固体培养基()方法步骤:计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。()倒平板操作的步骤:①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上右手拿装有培养基的锥形瓶左手拔出棉塞。②右手拿锥形瓶将瓶口迅速通过火焰。③用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙右手将锥形瓶中的培养基(约~mL)倒入培养皿左手立即盖上培养皿的皿盖。④等待平板冷却凝固大约需~min。然后将平板倒过来放置使培养皿盖在下、皿底在上。.倒平板操作的讨论()培养基灭菌后需要冷却到℃左右时才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度?提示:可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时就可以进行倒平板了。()为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?答:通过灼烧灭菌防止瓶口的微生物污染培养基。()平板冷凝后为什么要将平板倒置?答:平板冷凝后皿盖上会凝结水珠凝固后的培养基表面的湿度也比较高将平板倒置既可以使培养基表面的水分更好地挥发又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。()在倒平板的过程中如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?答:空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生因此最好不要用这个平板培养微生物。.纯化大肠杆菌()微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。()平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体这就是菌落。()稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。()用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是:使聚集在一起的微生物分散成单个细胞从而能在培养基表面形成单个的菌落以便于纯化菌种。()平板划线法操作步骤:①将接种环放在火焰上灼烧直到接种环烧红。②在火焰旁冷却接种环并打开棉塞。③将试管口通过火焰。④将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。⑤将试管通过火焰并塞上棉塞。⑥左手将皿盖打开一条缝隙右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内划三至五条平行线盖上皿盖。注意不要划破培养皿。⑦灼烧接种环待其冷却后从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。⑧将平板倒置放入培养箱中培养。()涂布平板操作的步骤:①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。②取少量菌液滴加到培养基表面。③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃尽后冷却~s。④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。.平板划线操作的讨论()为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时仍然需要灼烧接种环吗?为什么?答:操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端从而通过划线次数的增加使每次划线时菌种的数目逐渐减少以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环能及时杀死接种环上残留的菌种避免细菌污染环境和感染操作者。()在灼烧接种环之后为什么要等其冷却后再进行划线?答:以免接种环温度太高杀死菌种。()在作第二次以及其后的划线操作时为什么总是从上一次划线的末端开始划线?答:划线后线条末端细菌的数目比线条起始处要少每次从上一次划线的末端开始能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。.涂布平板操作的讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求想一想第步应如何进行无菌操作?提示:应从操作的各个细节保证ldquo无菌rdquo。例如酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。.菌种的保存()对于频繁使用的菌种可以采用临时保藏的方法。①临时保藏方法:将菌种接种到试管的固体斜面培养基上在合适的温度下培养。当菌落长成后将试管放入℃的冰箱中保藏。以后每~个月都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。②缺点:这种方法保存的时间不长菌种容易被污染或产生变异。()对于需要长期保存的菌种可以采用甘油管藏的方法。在mL的甘油瓶中装入mL甘油后灭菌。将mL培养的菌液转移到甘油瓶中与甘油充分混匀后放在-℃的冷冻箱中保存。疑难解答()生物的营养营养是指生物摄取、利用营养物质的过程。营养物质是指维持机体生命活动保证发育、生殖所需的外源物质。人及动物的营养物质:水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。植物的营养物质:矿质元素、水、二氧化碳等三类。微生物的营养物质:水、无机盐、碳源、氮源及特殊营养物质五类。()确定培养基制作是否合格的方法将未接种的培养基在恒温箱中保温~天无菌落生长说明培养基的制备是成功的否则需要重新制备。课题二土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.尿素:是一种重要的农业氮肥尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素是因为他们能合成脲酶尿素最初是从人的尿液中发现的.筛选菌株()实验室中微生物的筛选应用的原理人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)同时抑制或阻止其他微生物生长。()选择性培养基在微生物学中将允许特定种类的微生物生长同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称作选择培养基。()配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物培养基中不加入氮元素可以选择培养能固氮的微生物加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。.统计菌落数目()测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。()稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的稀释度足够高时培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确一般设置~个平板选择菌落数在~的平板进行计数并取平均值。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低因此统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。()采用此方法的注意事项:一般选取菌落数在~之间的平板进行计数为了防止菌落蔓延影响计数可在培养基中加入TTC本法仅限于形成菌落的微生物.设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响提高实验结果的可信度。对照实验是指除了被测试的条件以外其他条件都相同的实验其作用是比照试验组排除任何其他可能原因的干扰证明确实是所测试的条件引起相应的结果。.实验设计实验设计包括实验方案所需仪器、材料、用具和药品具体的实施步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。()土壤取样:同其他生物环境相比土壤中的微生物数量最大种类最多。在富含有机质的土壤表层有更多的微生物生长。从富含有机物、潮湿、pHasymp的土壤中取样。铲去表层土在距地表约~cm的土壤层取样。()样品的稀释:样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。在实际操作中通常选用一定稀释范围的样品液进行培养以保证获得菌落数在~之间、适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量一般选用测定放线菌的数量一般选用测定真菌的数量一般选用()微生物的培养与观察不同种类的微生物往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌~℃~天放线菌~℃~天霉菌~℃~天。每隔小时统计一次菌落数目选取菌落数目稳定时的记录作为结果这样可以防止因培养时间不足而导致一楼菌落的数目。一般来说在一定的培养条件下(相同的培养基、唯独及培养时间)同种微生物表现出稳定的菌落特征。形状、大小、隆起程度、颜色疑难解答()如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数?统计某一稀释度下平板上的菌落数最好能统计个平板计算出平板菌落数的平均值每克样品中的菌落数=(CV)*M其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)M代表稀释倍数专题三植物的组织培养技术课题一菊花的组织培养.植物组织培养的基本过程()细胞分化:在生物个体发育过程中细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程。离体的植物组织或细胞在培养了一段时间以后会通过细胞分裂形成愈伤组织愈伤组织的细胞排列疏松而无规则是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程称为植物细胞的脱分化或者叫做去分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养又可以重新分化成根或芽等器官这个过程叫做再分化。再分化形成的试管苗移栽到地里可以发育成完整的植物体。()植物细胞工程具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞都具有发育成完整个体的能力即每个生物细胞都具有全能性。但在生物体的生长发育过程中并不表现出来这是因为在特定的时间和空间条件下通过基因的选择性表达构成不同组织和器官。()植物组织培养技术的应用有:实现优良品种的快速繁殖培育脱毒作物制作人工种子培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。()细胞分化是一种持久性的变化它有什么生理意义?使多细胞生物体中细胞结构和功能趋向专门化有利于提高各种生理功能的效率。()比较根尖分生组织和愈伤组织的异同.影响植物组织培养的条件材料:不同的植物组织培养的难易程度差别很大。植物材料的选择直接关系到试验的成败。植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响实验结果。菊花组织培养一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧枝作材料。一般来说容易进行无性繁殖的植物容易进行组织培养。选取生长旺盛嫩枝进行组培的是嫩枝生理状态好容易诱导脱分化和再分化。营养:离体的植物组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对特殊需要配制适宜的培养基。常用的培养基是MS培养基其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。激素:植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下细胞分裂素的作用呈现加强趋势。在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。使用顺序实验结果先生长素后细胞分裂素有利于分裂但不分化先细胞分裂素后生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率提高生长素/细胞分裂素比值与结果比值高时促根分化抑芽形成比值低时促芽分化抑根形成比值适中促进愈伤组织生长环境条件:PH、温度、光等环境条件。不同的植物对各种条件的要求往往不同。进行菊花的组织培养一般将pH控制在左右温度控制在~℃并且每日用日光灯照射h.操作流程()配制MS固体培养基:配制各种母液:将各种成分按配方比例配制成的浓缩液(培养基母液)。middot使用时根据母液的浓缩倍数计算用量并加蒸馏水稀释。middot配制培养基:应加入的物质有琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液并用蒸馏水定容到毫升。middot在菊花组织培养中可以不添加植物激素。原因是菊花茎段组织培养比较容易。middot灭菌:采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。middotMS培养基中各种营养物质的作用是什么?与肉汤培养基相比MS培养基有哪些特点?大量元素和微量元素提供植物细胞所必需的无机盐蔗糖提供碳源维持细胞渗透压甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主MS培养基则需提供大量无机营养。()外植体的消毒外植体:用于离体培养的植物器官或组织片段。选取菊花茎段时要取生长旺盛的嫩枝。菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉用软刷轻轻刷洗刷洗后在流水下冲洗min左右。用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分放入体积分数为的酒精中摇动~次持续~s立即将外植体取出在无菌水中清洗。取出后仍用无菌吸水纸吸干外植体表面水分放入质量分数为的氯化汞溶液中~min。取出后在无菌水中至少清洗次漂洗消毒液。注意:对外植体进行表面消毒时就要考虑药剂的消毒效果又要考虑植物的耐受能力。()接种:接种过程中插入外植体时形态学上端朝上每个锥形瓶接种~个外植体。外植体接种与细菌接种相似操作步骤相同而且都要求无菌操作。()培养:应该放在无菌箱中进行并定期进行消毒保持适宜的温度(~℃)和光照(h)()移栽:栽前应先打开培养瓶的封口膜让其在培养间生长几日然后用流水清洗根部培养基。然后将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间进行壮苗。最后进行露天栽培。()栽培外植体在培养过程中可能会被污染原因有外植体消毒不彻底培养基灭菌不彻底接种中被杂菌污染锥形瓶密封性差等。专题四酶的研究与应用课题果胶酶在果汁生产中的作用.基础知识活动:阅读ldquo果胶酶的作用rdquo讨论并回答下列问题:.果胶是植物细胞壁和胞间层的主要组成成分之一。.在果汁加工中果胶的存在易导致果汁出汁率低果汁浑浊。.果胶酶分解果胶的作用是:①瓦解植物的细胞壁及胞间层使榨取果汁更容易②把果胶分解为可溶性的半乳糖醛酸使浑浊的果汁变得澄清因此可以解决果汁加工中出现的问题。.果胶酶是一类酶的总称包括:多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶。〖思考〗在植物细胞工程中果胶酶的作用是与纤维素酶一起除去植物细胞的细胞壁。活动:阅读ldquo酶的活性与影响酶活性的因素rdquo讨论并回答下列问题:.酶的活性是指:酶催化一定化学反应的能力。.酶的活性高低可用一定条件下的酶促反应速度来表示即单位时间、单位体积内反应物消耗量或产物生成量来表示。.影响酶活性的因素有:温度、PH、激活剂和抑制剂等。活动:阅读ldquo果胶酶的用量rdquo讨论并回答下列问题:食品工业生产中最常用的果胶酶是通过霉菌发酵产生。根据影响酶活性的因素在实际生产中我们如何获得果胶酶的最高活性?确定果胶酶的最适温度、最适PH等条件。.实验设计活动:阅读ldquo资料一:探究温度和PH对酶的活性的影响rdquo思考下列问题并尝试写出实验过程:.实验目的:定量测定温度或pH对果胶酶活性的影响。〖思考〗该实验与必修I中探究ldquo影响酶活性的条件rdquo实验有何不同?前者属于是定量分析实验后者属于定性分析实验。.实验原理:果胶酶瓦解细胞壁和胞间层增大果汁产量果胶酶催化分解果胶增大果汁澄清度。.变量设计与控制:①你确定的温度梯度(或pH梯度)为℃或℃(或、)。②实验的自变量是温度(或pH)控制自变量的方法是利用恒温水浴锅(或滴加酸碱等)。③实验的因变量是酶的活性检测因变量的方法是测定果汁的产出量或澄清度。〖思考〗果汁与果胶酶在混合之前分装在不同试管中用同一恒温处理的目的是什么?保证果汁与果胶酶混合前后的温度相同避免因混合导致温度变化而影响果胶酶活性。〖思考〗该实验中是否设置了对照?若设置那么它是如何设置的?若没有则如何进行设置?已经设置了对照。不同的温度设置之间可以相互对照。〖思考〗怎样排除PH和其他因素对实验结果的干扰?目的是什么控制PH和其他因素相同保证只有温度一个变量对果胶酶的活性产生影响。〖思考〗教材中A、B两个同学的实验设计有何不同?测定的因变量不同(A测定果汁产量B测定果汁澄清度)。.操作提示活动:阅读ldquo操作提示rdquo回答下列问题.制备果泥:用榨汁机榨制果泥。在榨制橙子汁时应怎样处理橙皮不必去橙皮.在探究不同PH对果胶酶活性的影响时可以用的NaOH溶液和盐酸调节pH。.在果胶酶处理果泥时为了是果胶酶能充分地催化反应如何操作用玻璃棒不时搅拌。.结果分析与评价将以下某同学实验数据转换成曲线图。(三)课堂总结、点评SHAPE*MERGEFORMAT专题五DNA和蛋白质技术课题六血红蛋白的提取和分离一、实验原理蛋白质的物化理性质:形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别由此提取和分离各种蛋白质。.凝胶色谱法(分配色谱法):()原理:分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙路程短流动快分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部路程长流动慢。()凝胶材料:多孔性多糖类化合物如葡聚糖、琼脂糖。()分离过程:混合物上柱rarr洗脱rarr大分子流动快、小分子流动慢rarr收集大分子rarr收集小分子middot洗脱:从色谱柱上端不断注入缓冲液促使蛋白质分子的差速流动。()作用:分离蛋白质测定生物大分子分子量蛋白质的脱盐等。.缓冲溶液()原理:由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成(如HCO-NaHCONaHPONaHPO等)调节酸和盐的用量可配制不同pH的缓冲液。()缓冲液作用:抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。.凝胶电泳法:()原理:不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。()分离方法:琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。()分离过程:在一定pH下使蛋白质基团带上正电或负电加入带负电荷多的SDS形成ldquo蛋白质-SDS复合物rdquo使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。二、实验步骤.样品处理红细胞的洗涤洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白采集的血样要及时采用低速短时间离心分离红细胞然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯再加入五倍体积的生理盐水缓慢搅拌min低速短时间离心如此重复洗涤三次直至上清液中没有黄色表明红细胞已洗涤干净。②血红蛋白的释放在蒸馏水和甲苯作用下红细胞破裂释放出血红蛋白。注:加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。加入甲苯的目的是溶解细胞膜有利于血红蛋白的释放和分离。.粗分离①分离血红蛋白溶液将搅拌好的混合溶液离心后试管中的溶液分为层。第一层为无色透明的甲苯层第层为白色薄层固体是脂溶性物质的沉淀层第层是红色透明液体这是血红蛋白的水溶液第层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤除去之溶性沉淀层于分液漏斗中静置片刻后分出下层的红色透明液体。②透析取mL的血红蛋白溶液装入透析袋中将透析袋放入盛有mL的物质的量的浓度为mmolL的磷酸缓冲液中透析h。透析可以去除样品中分子量较小的杂质或用于更换样品的缓冲液。.纯化调节缓冲液面:打开色谱柱下端的流出口使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝darr胶面平齐关闭出口。加入蛋白质样品:用吸管将透析后的样品沿管壁环绕移动加到色谱柱的顶端。加样后∣打开下端出口使样品渗入凝胶床内等样品完全渗入凝胶层后darr关闭出口。调节缓冲液面:加入mmolL的磷酸缓冲液到适当高度darr洗脱:连接缓冲液洗脱瓶打开下端出口进行洗脱。darr收集分装蛋白质:待红色的蛋白质接近色谱柱底端时用试管收集。纯度鉴定SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(选做)三、注意事项电泳技术电泳技术就是在电场的作用下利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异使带电分子产生不同的迁移速度从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的。红细胞的洗涤如果分层不明显可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外离心速度过高和时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀也得不到纯净的红细胞影响后续血红蛋白的提取纯度。.如何检测凝胶色谱柱的装填是否成功由于凝胶是一种半透明的介质因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯检查凝胶是否装填得均匀。此外还可以加入大分子的有色物质观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡轻轻敲打柱体以消除气泡消除不了时要重新装柱。.为什么凝胶的装填要紧密、均匀?如果凝胶装填得不够紧密、均匀就会在色谱柱内形成无效的空隙使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过搅乱洗脱液的流动次序影响分离的效果。.沸水浴处理加入洗脱液的湿凝胶的目的不但节约时间还能除去凝胶中可能带有的微生物和排除凝胶内的空气。.GldquoGrdquo代表凝胶的交联程度膨胀程度及分离范围表示凝胶得水值即每克凝胶膨胀时吸水g。.装填完后立即用洗脱液洗脱的目的:使凝胶装填紧密.加入柠檬酸钠有何目的?为什么要低速、短时离心?为什么要缓慢搅拌?防止血液凝固防止白细胞沉淀防止红细胞破裂释放出血红蛋白。.与其他真核细胞相比红细胞的特点及这一特点对进行蛋白质的分离的意义哺乳动物及人的成熟的红细胞是双面凹圆饼状没有细胞核和细胞器。其含有的血红蛋白是有色蛋白因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观大大简化了实验操作。.如何检测血红蛋白的分离是否成功如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整随着洗脱液缓慢流出如果红色区带歪曲、散乱、变宽说明分离的效果不好这与凝胶色谱柱的装填有关。专题六 植物有效成分的提取课题二 胡萝卜素的提取胡萝卜素性质:橘黄色结晶化学性质比较稳定不溶于水微溶于乙醇易溶于石油醚等有机溶剂。依据碳碳双键的数目划分为alpha、beta、gamma三类。其中最主要的组成成分为beta胡萝卜素。作用:①治疗夜盲症、幼儿生长发育不良、干皮症等疾病②常用于食品色素③使癌变细胞恢复成正常细胞。提取beta-胡萝卜素的方法主要有三种:①从植物中提取②从大面积养殖的岩藻中获得③利用微生物的发酵生产实验步骤①粉碎:使原料与有机溶剂充分接触增大溶解度。②干燥:脱水温度太高干燥时间太长会导致胡萝卜素分解。③萃取Ⅰ、萃取剂的选择 水溶性的:乙醇、丙酮水不溶性的:石油醚、乙酸乙酯、乙醚、苯、四氯化碳等选择:具有较高的沸点能够充分溶解胡萝卜素并且不与水混溶。Ⅱ、影响萃取的因素主要因素:萃取剂的性质和使用量次要因素:原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等一般来说原料颗粒小萃取温度高时间长需要提取的物质就能够充分溶解萃取效果就好。萃取前要将胡萝卜进行粉碎和干燥Ⅲ、胡萝卜素提取装置的设计:萃取过程应该避免明火加热采用水浴加热这是因为有机溶剂都是易燃物直接使用明火加热容易引起燃烧爆炸。为了防止加热时有机溶剂挥发还要在加热瓶口安装回流冷凝装置。萃取液的浓缩可直接使用蒸馏装置。在浓缩之前还要进行过滤除去萃取液中的不溶物。④过滤:除去萃取液中的不溶物⑤浓缩:蒸发出有机溶剂鉴定:纸层析法滤纸:㎝times㎝基线:滤纸下端距底边㎝处做一基线在基线上取A、B、C、D四点。点样:用最细的注射器针头(毛细吸管)吸取样品进行点样。点样应该快速细致在基线上形成直径2mm左右的圆点每次点样后可用吹风机将溶剂吹干注意保持滤纸干燥。等滤纸上的点样液自然挥发干后将滤纸卷成圆筒状至于装有1cm深的石油醚的密封玻璃瓶中。等各种色素完全分开后观察标准样品中位于展开剂前沿的胡萝卜素层析带。1.乙醇和丙酮能够用于胡萝卜素的萃取吗?为什么?答:胡萝卜素可溶于乙醇和丙酮但它们是水溶性有机溶剂因萃取中能与水混溶而影响萃取效果所以不用它们作萃取剂。在石油醚、醋酸乙酯、乙醚、苯和四氯化碳这几种有机溶剂中哪种最适宜用来提取胡萝卜素?答:在这五种有机溶剂中石油醚的沸点最高在加热萃取时不易挥发所以石油醚最适宜用作萃取剂。组织类型�细胞来源�细胞形态�细胞结构�细胞排列�细胞去向��根尖分生组织�受精卵�正方形�无液泡�紧密�分化成多种细胞组织��愈伤组织�高度分化细胞�无定形�高度液泡化�疏松�再分化成新个体��相同点�都通过有丝分裂进行细胞增殖��改变不同的温度后重复上面的实验得出结论记录实验数据动手实验设计实验方案将水果泥和果胶酶混合保温水果泥与果胶酶分别水浴保温制备水果泥配制果胶酶记录果汁量过滤出果汁温度℃�����������果汁量ml�����������将实验数据转换成曲线图的方法①以自变量为横坐标、以因变量为纵坐标建立直角坐标系。②注明坐标轴名的名称、单位、坐标原点以及曲线名称。③每个坐标轴上的取值单位要相等。④将实验数据标在坐标系中并用各种线型连接起来。PAGE

用户评价(0)

关闭

新课改视野下建构高中语文教学实验成果报告(32KB)

抱歉,积分不足下载失败,请稍后再试!

提示

试读已结束,如需要继续阅读或者下载,敬请购买!

评分:

/12

¥16.0

立即购买

VIP

意见
反馈

免费
邮箱