中药二至丸对老年痴呆模型小鼠脑组织Na^＋-K^＋-ATPase、Ca^2＋-ATPase活性及学习记忆的影响

第33卷第3期 2005年 6月 广 州 医 学 院 学 报 ACADEMIC JOURNAL OF GUANGZHOU MEDICAL COLLEGE Vo1．33 No．3 Jun．2005 中药二至丸对老年痴呆模型小鼠脑组织 Na+-K+- ATPase、Ca ．ATPase活性及学习记忆的影响 李 弋 杨友谊 (河南省南阳医学高等专科学校，河南 南阳473058) 摘要 目的：观察中药二至丸对老年痴呆(alzheimer disease AD)模型小鼠脑组织 Na 一K ATPase、Ca“一 ATPase活性及学习记忆的影响。方法 ：颈背部皮下注射 D一半乳糖建立亚急性老年痴呆模型，测定脑组织中 Na 一K 一A FPase、Ca 一ATPase活性、采用跳 台法测定小鼠的学习记忆能力。结果：中药二 至丸能明显提 高 Na 一K 一ATPase、Ca“一ATPase活性、缩短小鼠学习潜伏期，延长记忆潜伏期、减少错误次数 ．结论：中药二至 丸能改善老年痴呆模型小鼠的学习记忆能力，提高ATP酶的活性，维持脑组织的正常功能 关键词 中药二至丸；AD；Na 一K 一ATPase；Ca“一ATPase 中图分类号 R285．5 文献标识码 ：A 文章编号：1008—1836(2005)03—0023—03 Effects of Erzhiwan on the Na ．K ．ATPase． Ca ．ATPase Activities and Learning M emory in Mice model of Alzheimer Disease Ll Y／．YANG Youyi (Nanynng Medical College，Henan Province，Nanyang，Henan 473058，China) Abstract Objective：To ohseive the effects of Erzhiwan on the Na 一K 一ATPase．Ca 一A l1P ase activities and learning memory in mice model of Alzheimer Disease．M ethods：The mice were perfomled by neek back hypodermic injection of D—galactose to set up the subacute Alzheimer Disease mode1．tested fnr learning memory by the method of diving platform．and determined for the Na 一K 一ATPase& Ca“ 一ATPase activity in their brain tissues．Results： Erzhiwan could obviously shorten the latency ot learning period，prolong the incubation period of memor~'an(】reduce the times of mistakas．Conclusion：Erzhiwan can improve the learning memory of Alzheimer Disease nlice，raise activation of ATPase and maintain the normal function of the brain tissues． Key words Erzhiwan；Alzheimer disease；Na 一K 一ATPase；Ca 一ATPase 随着世界人u的老龄化，老年痴呆的发病率也 大大增加，已成为继心 管病 、癌症 、脑卒中之后的 第4位引起老年人夕E亡的原『大1。我国是世界上痴呆 患者最多的国家，65岁以上老人老年痴呆患者约有 500万。其 中 310万 老 人 患 阿 尔 茨 海 默 病 (alzheimer，sdisease，AD)，老年痴呆已成为严重威 胁老年人健康的4大疾病之一，陔领域已成为当今 世界研究的热点 。 AD主要临床 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 现是以近期记忆障碍为主的进 行性智能减退和精神运动障碍，其特异性病变为神 经纤维缠结(NFT)、老年斑(sP)、脑 血管淀粉样变 性等。本病的发病原因错综复杂、发病机制尚末完 全明了，现代医学对之缺乏有效的治疗手段。目前 美国 FDA批准上市治疗 AD的药物几乎均为胆碱 作者简介：李 弋(1963．10一)，男，高级讲师，学士。 研究方向：抗衰老研究。 · 论 著 · 酯酶抑制剂， 远期疗效并／f 想，且为化学药物， 具有一定的肝脏及胃肠道副反应。中医注重 体观 念和辨证论治， AD的防治方面有一定的优势，应 用于临床的方剂和中药有多种 ，但 中药二至丸刈‘ AD的防治作用鲜见报道，本文验用 D．半乳糖(D— ga1)所致 AD小鼠模型 J，观察了中药二至丸对于 AD模型学习、记忆能力的影响，测定了与大脑功能 密切相关 的腑组织 Na 一K ATPase、Ca -ATPase 活性。现将结果 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 如下。 1 材料和方法 1．1 实验药品、试剂 D．半 乳 糖 购 于 上 海 恒 信 制 药 厂，-fL[号 20010218。超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧 化物酶(GSH．PX)、Na ．K ．ATP酶、Ca 一ATP酶检 测试剂盒为南京建成牛物工程研究所产品。中药二 23 维普资讯 http://www.cqvip.com J 州医学院学报(J GZMC) 2005，33(3) 至丸：原药旱莲草、女贞子购自河南省南阳市医药公 司，自制煎液。 1．2 仪器、设备 75 1型紫外分光光度计，山东高密分析仪器厂； XHF21高速离心机，北京医用离心机厂；XW280A 旋涡混合器，上海医科大学仪器厂；电子分析天平， 上海精密科学仪器厂；电动玻璃匀浆机，宁波新芝 物科技股份有限公司；WX22型小鼠电光刺激条件 反射跳台，中国医学科学院药物研究所研制。 1．3 实验动物 雄性昆明种小鼠，体重(25±5)g，由河南省南 阳医专实验动物巾心提供。 1．4 方 法 1．4．1 二至丸水煎剂制备 取中药旱莲草、女贞子各 250 g，加水 1 000 g煎 煮 30 min，四层纱布过滤，药渣再加水 1 000 g，煎煮 30 min，过滤后浓缩至1 g／mL，灭菌，0℃贮藏备用。 1．4．2 实验动物分组及给药 将 50只小鼠随机分成5组，每组 10只，即空白 对照组、模型组、二至丸低、中、高剂量组。 实验组分别给予二至丸煎液20 g／(kg·d)、30 (kg·d)、40 g／(kg·d)灌胃6周。空白对照组和 模型组给等量凉开水灌胃。 1．4．3 造模方法 模型组和二至丸低、中、高剂量组每天颈背部皮 下注射 1％D一半乳糖 140 mg／(kg·d)，空白对照组 注射等量生理盐水。 1．4．4 小鼠学习记忆能力测试 实验第 42天，灌胃服药后，用跳台法对小鼠学 习、记忆能力进行测试。跳台装置为一被动回避反 应箱，4周用黑色塑料板分隔，箱底为可通电的铜栅 (40 V)，反应箱的右前角置一直径和高为 4．5 cm 的绝缘的橡皮垫，作为小鼠回避电击的安全台。实 验时将小鼠放入跳台实验仪中，训练小鼠受到电击 跳上平台躲避伤害性刺激，记录受到fU击跳上平台 的时问为学习潜伏期，3 min内从平台 跳下的次 数为学习的错误次数；24 h后重新测试，记录小鼠 第 1次跳下平台的时问记潜伏期和3 min内的跳下 平台的次数为记忆错误次数，比较不同组问小鼠记 忆成绩的差异。测试时若小鼠停留在平台上超过 3 min，其潜伏期以180 S计。 1．4．5 ATP酶活性测试 学习记忆能力测试后，断头处死小鼠，在冰台上 迅速取腩出脑组织，称重后用冰冷生理盐水制成 10％的匀浆。3 000 r／min离心 10 min，取上清液， 按说 明书方法 测定 蛋 白 Na 一K ATPase、Ca“一 ATPase活性。 1．4．6 统计学处理 实验数据用 x±S表示，进行方差分析。 2 结 果 2．1 二至丸对老年痴呆模型小鼠学习记忆能力的 影响 模型组与空白对照组比较，学习和记忆错误次 数明显增加，学习潜伏期明显延长，记忆潜伏期明显 缩短(P<0．01)，口服低、中、高剂量二至丸煎液后， 与模型组比较，学习和记忆错误次数明显减少，学 习潜伏期明显缩短，记忆潜伏期明显延长(P<0．05 或 P<0．01)(见表 1)。 表 1 中药二至丸对老年痴呆小鼠学习记忆影响 Tab．1 Effect of Erzhiwan on learning memory of AD mice(n：10) Compared with the control group： P<0．05，一 P<0．01；Compared with the model：△P<0 ． 05，△△P<0 ． 01 2．2 中药二至丸对老年痴呆模型小鼠 Na 一K ATPase，活性明显降低(P<0．O1)，差异有显著意 ATPase、Ca 一ATPase活性的影响 模型组与空白组相比 Na 一K ATPase、Ca 一 24 义，说明造模成功。灌服二至丸煎液后，Na 一K 一 ATPase、Ca 一ATPase的活性明显升高。(见表 2) 维普资讯 http://www.cqvip.com 第3期 李 弋，等．中药二至丸对老年痴呆模型小鼠脑组织 Na 一K ATPase、Ca 一ATPase活性及学习记忆的影响 表2 中药二至丸对老年痴呆模型小鼠 ATP酶活性的影响 Tab．2 Effects of Erzhiwan on the activities of Na ．K ．ATPase& Ca“ ．ATPase of AD mice Compared with the control group： P<0．05，一 P<0．0l；Compared with the model：△P<0 ． 05，△△P<0 ． 01 3 讨 论 AD发病机制的分子生物学学说有多种：胆碱 能学说、病毒学说、炎症学说、凋亡学说、基因突变学 说、淀粉样蛋白学说 、氧化应激学说等，其中氧化应 激学说认为，体内重要的自由基为活性氧(ROS)，它 产牛于线粒体氧化磷酸化时分子氧到水的减少过程 中，双分子氧减少 的结果产生超 阴离子 自由基 (O )、过氧化氢(H O )和羟基自由基(HO‘)，体 内存在 的氧化防御系统包 括超氧化物歧 化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH．PX)和过氧化 氢酶(CAT)等，对抗氧化应激反应，两者形成平衡关 系。一 体内产乍大量的自由基未能被抗氧化剂所 清除，则损伤生物大分子包括蛋白质、DNA和脂质 过氧化，这会使一些重要酶的功能被破坏。脑组织 中Na -K ATPase、Ca“-ATPase存在细胞膜上，通 过水解ATP逆化学梯度转运离子，是维持神经元兴 奋传导、突触传递的物质基础[4 J。自由基可直接氧 化 ATP酶蛋白氨基酸残基，使酶失活，ATP酶活性 降低可影响神经元细胞内Na 及 ca¨ 的分布，导致 细胞内ca¨ 的浓度大增，即 ca¨ 超载。神经细胞内 ca¨ 水平的升高可使细胞骨架和膜不稳定，并可激 活ca¨ 依赖性降解酶(磷脂酶、蛋白酶和内切 酶) 。 。磷脂酶使膜磷脂水解，花生四烯酸释放增 加，同时又产生大量自由基，使膜通透性增大，造成 恶性循环 J，氧化损伤可使蛋白质交联加剧和 淀 粉样蛋白聚集，促进老年斑和神经纤维缠结的形成； 细胞 Ca 超载和 自由基过多还可导致细胞的凋亡 (apoptosis)。通过以上途经，可使 AD产生。 D．半乳糖所致的亚急性痴呆模型，已为大多学 者所公认，长期注射 D-半乳使其在细胞 内大量集 聚，造成代谢紊乱，导致过多自由基的产生。模型小 鼠表现为学习、记忆能力下降与老年痴呆相似。 二至丸出自明代王三才的《医便》，由蒸女贞子、旱 莲草二味中药组成。其中女贞子为木樨科植物女贞 (LigustramIuciduAit．)的干燥成熟果实的黄酒蒸品。 墨旱莲草为菊科植物鳢肠(EcliptaproztrataL．)的干 燥地上部分。二至丸是滋阴补肾之方药。具有益肝 肾、补阴血、壮筋骨、乌须发之功效。对于肝肾阴虚 所致的头晕目眩、耳呜、咽干、腰膝酸软、遗精体倦、 须发早 白等症有较好 的效果 。中医理论认为： “肾生髓 ，上充于脑，脑为髓海”，老年痴呆症属于肾 精不足，髓海空虚所致。二至丸的补肝肾益精血功 能，使精血充足，髓海允盈则思维敏捷，耳聪目明。 现代药理学研究，二至丸巾女贞子含有齐墩果酸、齐 墩果苷、乙酰齐墩果酸女贞子苷、业油酸、多糖及多 种挥发油等。早莲革中含豆甾醇 、螃蜞菊内酯、去甲 螃蜞菊内酯及多种噻吩化合物 J。它们具有较强 地清 除氧 自由基 的能力。提高 Na -K -ATPase Ca¨ -ATPase活性，维持 ca¨ 的稳态，明显提高老年 痴呆模型小鼠的学习记忆能力。 参考文献 [1]覃仁安，蔡洁英，黄竹英．中医药防治老年痴呆的研究 进展[J]．中国处方药，2004，8：63—63． [2]包金风，包金云，李锦明，等．脑力宝对 D一半乳糖所致亚 急性衰老小鼠的抗衰老作用及其机制 [J]．中国老年学 杂志，2004，24(8)：742—744． [3]谢 宁，何秀丽，周妍妍，等．地黄饮对老年痴呆模型大 鼠行为学 、Ach及 Na 一K ATPase、Ca“一ATPase活性活 性的影响 [J]．中医药学刊，2004，22(7)：1162—1163． [4]李笑萍，喻培先．赵冬 D一半乳糖衰老模型观察的新指标 [J]．中国现代应用药学杂志，2004，21(6)：442—444． [5]王德生，张守信．老年性痴呆[M]．北京：人民卫生出版 社，2001：233—237． [6]王建光，杨新宇，张 伟，等．大枣对 D一半乳糖致衰老小 鼠钙稳态影响的实验研究 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