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不同治则中药复方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠PAI-1影响的研究

不同治则中药复方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠PAI-1影响的研究 · 284· 中西医结合肝病杂志2007年箜 !鲞筮塑不同治则中药复方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠 PAI一1影响的研究郑培永安德明季光 1。上海中医药大学脾胃病研究所 (上海，200032) 2．甘肃省中医院消化内科摘要目的：观察补益肝肾、活血化瘀方荆二至丸、失笑散及其组合对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织 PAI— lmRNA的影响。方法：采用胆管结扎复制胆汁淤积性肝纤维化模型。术后 1周，造模组随机分模型组、优思弗、二至丸、失笑散及舍方组；各药物干预组分别给予相应药物灌胃...

· 284· 中西医结合肝病杂志2007年箜 !鲞筮塑不同治则中药复方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠 PAI一1影响的研究郑培永安德明季光 1。上海中医药大学脾胃病研究所 (上海，200032) 2．甘肃省中医院消化内科摘要目的：观察补益肝肾、活血化瘀方荆二至丸、失笑散及其组合对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织 PAI— lmRNA的影响。方法：采用胆管结扎复制胆汁淤积性肝纤维化模型。术后 1周，造模组随机分模型组、优思弗、二至丸、失笑散及舍方组；各药物干预组分别给予相应药物灌胃，模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃，至 4周末处死全部动物取材。观察内容包括一般情况、肝功能(ALT、AST、ALP、TBil)、肝组织病理、PAI—lmRNA表达。结果：与假手术组比较，模型组大鼠 ALT、AST、ALP、TBil、纤维化程度均显著升高；与模型组比较，3个复方均能降低胆汁淤积性肝纤维化大鼠血清 ALP、ALT、AST水平(P 说明书所示方法测定。 1．2．3．4 病理学检测 HE染色、胶原纤维染色 (天狼猩红染色)、肝纤维化程度分级标准：汇管区纤维组织无增生为 “ 一 ” ；增生后面积占肝小叶 1／3以下为 “+”；占肝小叶 1／3 ～ 2／3为 “++”；占肝小叶 2／3以上为 “+ ++”。每个 “+”记 1分，每个标本记总分。积分越高，表明肝脏纤维化程度及病理损害越重。 1．2．3．5 RT-PCR法检测肝组织 PAI-lmRNA表达提取经一 8O℃保存的大鼠肝组织标本，匀浆后用上海申能博彩生物公司的 TRIZOL试剂抽提总 RNA。采用分光光度法测定提取的总 RNA含量及纯度，OD260／OD280在 1．8～2．0之间。引物由上海申能博采生物科技有限公司合成，上游引物 GTG GTT CGG CAC AAT CCA ACA GAG，下游引物 GCA ATG GAG GAC GAT ACA AGA GGT， actin上游 TGT GAT GGT GGG TAT GGG TCA GAA G，t?-actin下游 TCA CGG GTT GGC CTT AGG GTT CAG AG；PCR扩增：49gl体系： 1 strand eDNA 5 1，10X PCR Buffer 5 1，dNTP lgl，目的基因正负链各 2gl，3-actin正负链各 2gl，H2O 29gl，Taq酶 1／A；PCR循环条件：95℃预变性 5分钟，95℃ 3O秒，6O℃ 4O秒，72℃ 1分钟，3O次循环，72℃ 1O分钟。PCR产物加样于 2 琼脂糖凝胶，电泳，紫外灯下观察，凝胶分析系统拍照，计算机图像扫描和吸光度值分析，从而得到 PAI-1／13- 维普资讯 http://www.cqvip.com · 286· 中西医结合肝病杂志2007年第 17鲞箍塑表 1 不同治则中药复方对模型大鼠肝功能的影响 ( ± ) 与模型组比较，*P(0．05，#P(0．01；与优思弗组比较·AP(0．05，AP(0．01 表 2 不同治则中药复方对模型大鼠纤维化程度的影响 (x+s) 与模型组、优思弗比较，#P 0．05)。 2．2 肝脏形态变化假手术组肝脏表面光滑，呈红褐色，质地软。模型组大鼠肝脏体积增大，表面黄染，质地较硬。3个中药复方组大鼠肝脏体积较模型组小，表面较模型组光滑。优思弗组肝脏肉眼观察与模型组无明显区别。 2．3 不问治则中药复方对模型大鼠肝功能的影响见表 1。 2．4 不同治则中药复方对模型大鼠肝组织病理的影响 HE 染色显示，假手术组大鼠肝小叶结构清晰，肝细胞索排列整齐，呈放射状，肝窦正常，胞核结构清晰。模型组大鼠肝脏内小胆管大量增生，以汇管区为中心呈放射状向肝实质内延伸，增殖的胆管呈花环样，胆管上皮细胞周围有肌成纤维细胞的聚集和细胞外基质的沉积；肝细胞与增生的胆小管相比明显减少，剩余肝细胞的形态结构尚正常。与模型组比较，3 个中药组小胆管增生较模型组明显减少，剩余肝细胞量较多；合方组较两个中药单方组病理改变轻，失笑散组和二至丸组无明显差异；优思弗组胆管增生无明显减少；模型及药物组的炎症及坏死均不明显。肝组织纤维化程度计分评定结果 (见表 2)。 2．5 不同治则中药复方对模型大鼠肝组织 PAI—lmRNA表达的影响 RT—PCR检测显示：假手术组肝组织 PAI-lmRNA 表达较低，与假手术组比较，模型组 PAI—lmRNA表达显著增强 (P

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