药物基因毒性杂质-分析检测解决方案

药物基因毒性杂质分析 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 解决 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 药物杂质分析磺酸酯类 水合肼 叠氮化物药物中的杂质是指药物中存在的无治疗作用、或影响药物的稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质。其中有一类物质近年来日益受到各方的重视，它就是基因毒性杂质！什么是基因毒性杂质？基因毒性杂质是指能直接或间接损伤细胞DNA，产生致突变和致癌作用的物质。可能产生基因毒性杂质的环节包括新药合成，原料纯化，存储运输（与包装物接触）等。基因损伤会导致：诱变（并非所有DNA的损伤都导致突变） 导致遗传信息发生变化衰老---不可逆的休眠细胞凋亡---程序性死亡的细胞分裂失控染色体断裂 导致染色体的变化结构上（断裂）数值上（异倍体性）---细胞中数值的变化致癌 导致或促进癌细胞的繁殖 充足的致突变和/或致染色体断裂的活性=致癌基因毒性杂质主要涉及的DNA损伤是加合物的形成，包含以下两个主要模式：DNA碱基共价键的形成 烷基化 环化 插入芳香胺 亲电作用，与DNA形成强共价键DNA的损伤人类基因组是由大约3X109个碱基组成的序列，只有四种碱基，即腺嘌呤（A）、胞嘧啶（C）、鸟嘌呤（G）和胸腺嘧啶（T）哪些物质具有基因毒性？含有警示结构的物质，具有与致突变相关的官能团，这些物质有潜在基因毒性。需要通过经验和结构进行推断，以及多个实验来确认。现有法规指南欧洲药品评审组织指南（EMEA）美国药典（USP）食品药品监督管理局（FDA）人用药物注册技术要求国际协调会议指南（ICH）药物中基因毒性杂质的分析由于待分析物的特殊性，分析方法面临多重挑战！许多基因毒性杂质的化学性质很不稳定。检测方法缺乏灵敏度，传统分析方法的定量限在主成分的0.05%和0.03%之间干扰大，极高浓度的原料药里同时存在的基因毒性杂质赛默飞拥有无可挑剔的分析检测方案，如下是几个典型案例：磺酸酯类甲磺酸酯、苯甲磺酸等磺酸类物质与微量的低级醇在合成反应中生成烷基磺酸如甲磺酸甲酯（MMS）、甲磺酸乙酯（EMS）、异丙基甲磺酸酯（IMS）、正丁基甲磺酸酯（NBMS），以及芳基磺酸酯如苯磺酸甲酯（MBS）、苯磺酸乙酯（EBS）、对甲苯磺酸酯（MP-TS），这些物质可与DNA发生烷基化反应，从而可能成为引发癌症的诱因，因此控制药物中该类杂质的毒理学关注阈值（TTC）水平非常重要。方法一：参考欧洲药典8.0，通过衍生化法完成对甲基磺酸酯的衍生，采用气质-顶空法分析衍生产物，完成对药品中甲基磺酸酯的分析。方法二：采用气质，对液体样品直接进样，测定8种不同磺酸酯类物质。方法三：参照文献使用HPLC-UV法分析了对甲苯磺酸乙酯，对最低浓度1µg/mL进行了分析，根据信噪比进行计算检出限LOD，以S/N=3计，LOD为0.1µg/mL。仪器检出限与方法考察学均达到了相关要求，以期对相关分析者有一定的借鉴作用。水合肼肼通常由水合肼脱水制得。它是常用作制药原料，如合成氨基尿、异烟肼、呋喃西林盐酸阿齐利特，硫酸阿米卡星和他唑巴坦酸等。肼可对肝、肾、血液等系统产生毒副作用。有数据显示，肼可能具有致癌作用。通过衍生化法完成对水合肼的衍生，采用顶空法及直接进样法分析衍生产物，完成对药品中水合肼的分析方法开发，该方法通过气相色谱质谱法结合顶空进样方式分析不同溶解性药品中的水合肼，采用质谱法可以进一步对药品中的水合肼进行确证。分别考察了液体进样和顶空进样两种进样方式，实验发现当采用顶空进样时干扰更少且灵敏度较好，测得检出限在5µg/mL。叠氮化物叠氮化合物抑制细胞色素氧化酶及多种酶活性并导致磷酸化及细胞呼吸异常。叠氮酸及其钠盐主要急性毒作用是引起血管张力极度降低，此系直接作用于血管平滑肌所致。利用离子色谱阀切换技术可以将样品基体适时除去，保证了色谱条件的重现性，对色谱柱的保护也很充分。且目标离子N3-与常见阴离子Br-，NO3-分离度均大于1.5，可用于此类样品的测定。叠氮根离子回收率在95.4%~98.9%之间，回收率良好。定量限和最低检出限分别为10ng/mL、3ng/mL。顶空进样方式—2.0µg/mL水合肼衍生后TIC色谱图离子色谱阀切换技术检测叠氮化物水合肼的质谱图水合肼衍后产物的质谱图甲基磺酸甲酯，甲基磺酸乙酯和甲基磺酸异丙酯的TIC图空白、样品、标准品、样品加标浓度为20µg/g的TIC图甲基磺酸甲酯，甲基磺酸乙酯，甲基磺酸异丙酯，苯磺酸甲酯，苯磺酸乙酯，对甲苯磺酸甲酯，对甲苯磺酸乙酯，对甲苯磺酸异丙酯样品加标分析谱图（上面-加标溶液，下面-空白；峰1：10µg/mL甲基磺酸乙酯，峰2：样品主成分）33.标准品色谱图及样品加标色谱磺酸酯为药物生产中的副产物，本方法的分析目标物及其定性、定量离子如下表1。本方法选择某样品测定，其中未含有8种磺酸酯，且该药品中无其它物质对所分析物质干扰，如下图2为空白、某样品及其加标色谱图。4.线性、检出限及RSD配制浓度分别为：10.0、20.0、50.0、100.0、200、500μg/L的校准溶液，采用上述方法分别进样分析，考察各组分在10.0-500μg/L浓度范围内的线性。实验结果表明8种组分在10.0-500.0μg/L线性关系良好，线性相关系数均大于0.995（见表2）。对某样品添加混合标准溶液（加标浓度为0.8μg/g、20μg/g），考察8种磺酸酯的加标回收情况。实验结果表明各组分的加标回收率均在83.2-99.5%之间，符合日常分析检测的要求。对0.8、20μg/g加标水平平行测定6次，平均RSD值在4.7-9.3%，符合稳定性要求。同时以三倍信噪比计算各组分检出限，各组分仪器检出限在5.0-12.0μg/L（见表3）。本方法能够满足欧洲药典中对甲基磺酸甲酯、乙酯、异丙酯的限量要求，同时对于其它5种磺酸酯也可以做到0.24μg/g。表1.分析物保留时间及定性定量离子图2.空白、样品、标准品、样品加标浓度为20μg/g的TIC图，由上而下分别为空白、样品、标准品、样品加标编号化合物CAS保留时间定量离子定性离子1甲基磺酸甲酯66-27-35.817965\802甲基磺酸乙酯62-50-06.877959\973甲基磺酸异丙酯926-06-77.2012359\794苯磺酸甲酯80-18-213.7277141\1725苯磺酸乙酯515-46-814.4777141\1866对甲苯磺酸甲酯80-48-815.2791155\1867对甲苯磺酸乙酯80-40-015.9615591\2008对甲苯磺酸异丙酯2307-69-916.07214155\172\914苯磺酸甲酯80-18-213.7277141\1725苯磺酸乙酯515-46-814.4777141\1866对甲苯磺酸甲酯80-48-815.2791155\1867对甲苯磺酸乙酯80-40-015.9615591\2008对甲苯磺酸异丙酯2307-69-916.07214155\172\91图2空白、样品、标准品加标浓度为20μg/g的TIC图，由上而下分别为空白、样品、标准品、样品加标4.线性、检出限及RSD配制浓度分别为：10.0、20.0、50.0、100.0、200、500μg/L的校准溶液，采用上述方法分别进样分析，考察各组分在10.0-500μg/L浓度范围内的线性。实验结果表明8种组分在10.0-500.0μg/L线性关系良好，线性相关系数均大于0.995（见表2）。对某样品添加混合标准溶液（加标浓度为0.8μg/g、20μ/g），考察8种磺酸酯的加标回收情况。实验结果表明各组分的加标回收率均在83.2-99.5%之间，符合日常分析检测的要求。对0.8、20μg/g加标水平平行测定6次，平均RSD值在4.7-9.3%，符合稳定性要求。同时以三倍信噪比计算各组分检出限，各组分仪器检出限在5.0-12.0μg/L（见表3）。本方法能够满足欧洲药典中对甲基磺酸甲酯、乙酯、异丙酯的限量要求，同时对于其它5种磺酸酯也可以做到0.24μg/g。表3线性、检出限及RSD数据（n=6）化合物线性方程R2加标(μg/g)回收率/%仪器检出限/μg/L方法检出限/μg/gRSD/%RT:0.00-16.21012345678910111213141516Time(min)050100050100050100RelativeAbundance0501005.886.736.9013.5713.6815.2214.565.886.7413.575.966.837.2115.277.356.8914.475.8615.957.2215.2713.726.7313.577.366.9015.9514.4715.275.8613.727.226.7413.577.35NL:2.00E5TICMSkbNL:2.00E5TICMSsNL:1.80E7TICMS1tNL:1.80E7TICMS+bProprietary&Confidential35药品中水合肼的分析(mainlib)Hydrazine101214161820222426283032343638400501001415161727282930313233NNHHHH一种无色发烟的、具有腐蚀性和强还原性的液体化合物NH2NH2[hydrazine]，它是比氨弱的碱，通常由水合肼脱水制得，主要用作火箭和喷气发动机的燃料部分，用在制备盐(如硫酸盐)及有机衍生物中。用作制药原料，如合成氨基尿、异烟肼、呋喃西林、百生肼，并用作喷气式发动机燃料、火箭燃料、显影剂、抗氧剂、还原剂等。也用于制发泡剂等。极毒！对眼睛有刺激作用，能引起延迟性发炎，对皮肤和粘膜也有强烈的腐蚀作用。Proprietary&Confidential37肼衍生产物—4-甲基-3-戊烯-2-酮腙(mainlib)2-Propanone,(1-methylethylidene)hydrazone10203040506070809010011012005010012141516182426282931353839404143455052545657596567707173767880828494969798112NN溶解性：溶于水和乙醇，不溶于氯仿、乙醚，相对密度1.03，可燃，有强腐蚀性，能侵蚀玻璃、橡胶和皮革等。沸点：130BR0031·Z03/15F_CMD_CN基因毒性杂质顶空法GC和GCMS是分析基因毒性杂质的首选方法，包括各种溶剂残留！IC特殊的检测手段为特殊结构基因毒性杂质提供高灵敏分析方法LC/LCMS是最常用的非挥发性基因毒性杂质分析手段！TMO1705050,000ThermoScientificLifeTechnologiesFisherScientificUnity™LabServiceswww.thermofisher.com303800872000www.thermofisher.cn