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GE 离子交换色谱 ppt

GE 离子交换色谱 ppt

henry
2010-05-26 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《GE 离子交换色谱 pptpdf》,可适用于人文社科领域

离子交换层析一种广泛应用于各种纯化阶段和规模的层析技术什么是离子交换层析离子交换层析是一种根据被分离物质的分子表面电荷性质来分离的吸附层析通过电荷性质分离相反电荷性质之间的作用•蛋白质上的电荷与填料表面的电荷相互作用不同的蛋白质带有电荷性质不同与填料的作用也就不同•阴离子交换和阳离子交换•蛋白质带有负电荷时叫做阴离子交换•蛋白质带有正电荷时叫做阳离子交换SomeofthechargedregionswhichwillinfluenceionexchangeDifferentproteinshavedifferentchargesanddifferentpatternsofsurfacecharge选择性的原理NHRCOOHNHRCOORNHCOOlowpHpositivechargehighpHnegativechargehydrogengainedhydrogenlostpH对电荷性质的影响overallchargeonproteinNHRCOOHNHRCOORNHCOOacidisoelectricpointalkalineexcesspositivechargebalancedpositiveandnegativechargeexcessnegativecharge表面电荷的性质和多少依赖于pHpHpH滴定曲线pHpHanionexchangercationexchangerchargeonprotein通过pH控制选择性平衡离子交换过程阴离子交换介质上样和清洗离子交换过程洗脱离子交换过程再生离子交换过程带电荷基团阴离子交换基团Diethylaminoethyl(DEAE)OCHCHNH(CHCH)Quaternaryaminoethyl(QAE)OCHCHN(CH)CHCHOHCHQuaternaryammonium(Q)CHN(CH)阳离子交换基团Carboxymethyl(CM)OCHCOO–Sulphopropyl(SP)CHCHCHSO–Methylsulphonate(S)CHSO–weakionexchangers:capacityvarieswithpHweakanionexchangerweakcationexchangerstronganionexchangerstrongcationexchangerstrongionexchangers:capacityisconstantoverawiderangeofpHQSepharose™FastFlowSPSepharoseFastFlowDEAESepharoseFastFlowCMSepharoseFastFlow强离子交换和弱离子交换为什么选择离子交换层析可用于各个纯化阶段和各种规模•可控性•高选择性•高载量•浓缩的•高回收率ResultscanbeoptimisedviaseveralfactorsEffectofpHonfractionationofmodelproteins良好的可操控性考虑因素•需要什么样的设备•需要什么样的离子交换•怎么操作分离过程pHUVcondfractioncollectionFracAMIXERWWBsamplepumpPvalveFVmonitorUPCdifferentbuffersinjectionvalveVlargeandsmallfractionscolumnsforAIX,CIXandbufferexchangemonitorforUV,conductivityandpH离子交换的通用装备交换基团•类型•密度基质•多孔性•粒度大小•化学性质•选择性•载量•载量,流速•峰宽,流速•使用寿命可再生性离子交换填料HiTrapIEXSelectionKit:conalbumin(I),alactoglobulin(II)andsoyabeantrypsininhibitor(III)Sample:mgconalbuminpI=,mgαlactoglobulinpI=,mgsoyabeantrypsininhibitorpI=dissolvedinmlstartbufferColumns:HiTrap™DEAESepharose™FastFlowmlHiTrapQSepharoseFastFlowmlHiTrapQXLmlHiTrapANXSepharoseFastFlowhighsubmlStartbuffer:mMTris™HClpHElutionbuffer:mMTrisHCl,MNaClpHFlowrate:mlmincmhRunningparametersequilibration:mlstartbuffersampleapplication:mlwash:mlstartbufferelutionml,lineargradient,–elutionbufferInstrumentation:ÄKTAexplorer™controlledbyUNICORN™使用不同的填料优化层析效果强离子交换的优势•在很宽的pH范围下都带有电荷•在很宽的pH范围下电荷密度不变•比较快速容易地达到平衡多孔性与载量IonexchangerPorosityMaxloadmlMiniQ™solidcamgMonoQ™veryhighcamg机械强度好才能高流速X•大颗粒允许较大的体积流速填料和流速MiniBeads™µmmicropurificationMonoBeads™µmpolishingSOURCE™µmpolishingSOURCEµmintermediatesteps颗粒大小µmMiniS™µmMonoS™填料颗粒大小与分辨率载量类型总离子载量egµmolmL•并不重要有效载量egmgHSAmL•随着pH、样品、离子强度不同而变化动态载量egmgHSAmL,cmh•与流速有关•也随着pH、样品、离子强度不同而变化现代填料的要求•良好的机械强度流速快•高载量•良好的可再生能力•不同的操作阶段使用不同颗粒大小的填料合适的层析条件•pH•添加剂•洗脱方式•流速在几个试管中各放ml离子交换填料加入不同pH值的缓冲液加入样品并摇匀分析上清中目的蛋白的情况左图中目标蛋白在pH时完全吸附结论:阴离子交换,结合缓冲液选pHpH试管检测法确定结合缓冲液的pH滴定曲线实验方法滴定曲线结果elutionvolume(ml)mAUMNaClpHpHpHpHpH通过scouting优化pHColumn:RESOURCE™Q,mlSample:mgcrudepancreatinSystem:ÄKTAexplorer™,BufferPreppHpHACitratemM,pHBCitratemM,NaClM,pHACitratemM,pHBANaClM不同的方法来配制的“相同的”缓冲液ToensureaproperpHvalue,thesampleshouldbedissolvedinstartbuffer(A),criticalwithlargevolumesamplesBufferingionconcentrationsof–mMareusuallysufficientAUvolumepHvaluegradientvolumeAUpHvaluegradientpH值和缓冲能力谢谢欢迎访问:wwwgehealthcarecomproteinpurificationBPG,FineLINE,FPLC,HiPrep,HiTrap,INdEX,MiniBeads,MiniQ,MiniS,MonoBeads,MonoQ,MonoS,PhastGel,PhastSystem,RESOURCE,Sephadex,Sepharose,SMART,SOURCE,STREAMLINE,Tricorn,UNICORN,ÄKTAexplorerandÄKTApilotaretrademarksofGEHealthcareLtd,aGeneralElectricCompanyGE,imaginationatworkandGEMonogramaretrademarksofGeneralElectricCompanyCoomassieisatrademarkofIClplcAllgoodsandservicesaresoldsubjecttothetermsandconditionsofsaleofthecompanywithinGEHealthcarewhichsuppliesthemGeneralElectricCompanyreservestheright,subjecttoanyregulatoryandcontractualapproval,ifrequired,tomakechangesinspecificationsandfeaturesshownherein,ordiscontinuetheproductdescribedatanytimewithoutnoticeorobligation©GeneralElectricCompany–AllrightsreservedGEHealthcareBioSciencesAB,aGeneralElectricCompanyGEHealthcareBioSciencesAB,Björkgatan,SEUppsala,Sweden

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