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GB4789.3-2010 食品微生物学检验 大肠菌群计数.pdf

GB4789.3-2010 食品微生物学检验 大肠菌群计数

逆风飞翔
2010-04-23 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《GB4789.3-2010 食品微生物学检验 大肠菌群计数pdf》,可适用于农林牧渔领域

中华人民共和国国家标准GB食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数NationalfoodsafetystandardFoodmicrobiologicalexamination:Enumerationofcoliforms中华人民共和国卫生部发布发布实施GBI前言本标准代替GBT《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》。本标准与GBT相比主要修改如下:修改了标准的中英文名称“第二法大肠菌群平板计数法”的平板菌落数的选择范围修改为“CFU~CFU”删除了“第三法大肠菌群PetrifilmTM测试片法”。本标准的附录A、附录B为规范性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:GB、GB、GBT、GBT。GB食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数范围本标准规定了食品中大肠菌群(Coliforms)计数的方法。本标准适用于食品中大肠菌群的计数。术语和定义大肠菌群coliforms在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。最可能数mostprobablenumberMPN基于泊松分布的一种间接计数方法。设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外其他设备和材料如下:恒温培养箱:℃±℃。冰箱:℃~℃。恒温水浴箱:±℃℃。天平:感量g。均质器。振荡器。无菌吸管:mL(具mL刻度)、mL(具mL刻度)或微量移液器及吸头。无菌锥形瓶:容量mL。无菌培养皿:直径mm。pH计或pH比色管或精密pH试纸。菌落计数器。培养基和试剂月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LaurylSulfateTryptoseLST)肉汤:见附录A中A。GB煌绿乳糖胆盐(BrilliantGreenLactoseBileBGLB)肉汤:见附录A中A。结晶紫中性红胆盐琼脂(VioletRedBileAgarVRBA):见附录A中A。磷酸盐缓冲液:见附录A中A。无菌生理盐水:见附录A中A。无菌molLNaOH:见附录A中A。无菌molLHCl:见附录A中A。GB第一法大肠菌群MPN计数法检验程序大肠菌群MPN计数的检验程序见图。图大肠菌群MPN计数法检验程序操作步骤样品的稀释固体和半固体样品:称取g样品,放入盛有mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,rmin~rmin均质min~min,或放入盛有mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中用拍击式均质器拍打min~min制成:的样品匀液。液体样品:以无菌吸管吸取mL样品置盛有mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中充分混匀制成:的样品匀液。样品匀液的pH值应在~之间必要时分别用molLNaOH或molLHCl调节。℃±℃h±h℃±℃h±h检样g(mL)样品mL稀释液均质倍系列稀释选择适宜个连续稀释度的样品匀液接种LST肉汤管产气不产气BGLB肉汤不产气产气大肠菌群阳性大肠菌群阴性查MPN表报告结果GB用mL无菌吸管或微量移液器吸取:样品匀液mL沿管壁缓缓注入mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)振摇试管或换用支mL无菌吸管反复吹打使其混合均匀制成:的样品匀液。根据对样品污染状况的估计按上述操作依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释次换用支mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕全过程不得超过min。初发酵试验每个样品选择个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液)每个稀释度接种管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤每管接种mL(如接种量超过mL则用双料LST肉汤)℃±℃培养h±h观察倒管内是否有气泡产生h±h产气者进行复发酵试验如未产气则继续培养至h±h产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。复发酵试验用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物环移种于煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)管中℃±℃培养h±h观察产气情况。产气者计为大肠菌群阳性管。大肠菌群最可能数(MPN)的报告按确证的大肠菌群LST阳性管数检索MPN表(见附录B)报告每g(mL)样品中大肠菌群的MPN值。第二法大肠菌群平板计数法检验程序大肠菌群平板计数法的检验程序见图。图大肠菌群平板计数法检验程序操作步骤检样g(mL)样品mL稀释液均质倍系列稀释℃±℃h~h计数典型和可疑菌落BGLB肉汤℃±℃h~h报告结果选择个~个适宜稀释度的样品匀液接种VRBA平板GB样品的稀释按进行。平板计数选取个~个适宜的连续稀释度,每个稀释度接种个无菌平皿每皿mL。同时取mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。及时将mL~mL冷至℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)约倾注于每个平皿中。小心旋转平皿将培养基与样液充分混匀待琼脂凝固后再加mL~mLVRBA覆盖平板表层。翻转平板置于℃±℃培养h~h。平板菌落数的选择选取菌落数在CFU~CFU之间的平板分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色菌落周围有红色的胆盐沉淀环菌落直径为mm或更大。证实试验从VRBA平板上挑取个不同类型的典型和可疑菌落分别移种于BGLB肉汤管内℃±℃培养h~h观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气即可报告为大肠菌群阳性。大肠菌群平板计数的报告经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以中计数的平板菌落数再乘以稀释倍数即为每g(mL)样品中大肠菌群数。例:样品稀释液mL在VRBA平板上有个典型和可疑菌落挑取其中个接种BGLB肉汤管证实有个阳性管则该样品的大肠菌群数为:××g(mL)=×CFUg(mL)。GB附录A(规范性附录)培养基和试剂A月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤A成分胰蛋白胨或胰酪胨g氯化钠g乳糖g磷酸氢二钾(KHPO)g磷酸二氢钾(KHPO)g月桂基硫酸钠g蒸馏水mLpH±A制法将上述成分溶解于蒸馏水中调节pH。分装到有玻璃小倒管的试管中每管mL。℃高压灭菌min。A煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤A成分蛋白胨g乳糖g牛胆粉(oxgall或oxbile)溶液mL煌绿水溶液mL蒸馏水mLpH±A制法将蛋白胨、乳糖溶于约mL蒸馏水中加入牛胆粉溶液mL(将g脱水牛胆粉溶于mL蒸馏水中调节pH至~)用蒸馏水稀释到mL调节pH再加入煌绿水溶液mL用蒸馏水补足到mL用棉花过滤后分装到有玻璃小倒管的试管中每管mL。℃高压灭菌min。A结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)A成分蛋白胨g酵母膏g乳糖g氯化钠g胆盐或号胆盐g中性红g结晶紫g琼脂g~g蒸馏水mLpH±GBA制法将上述成分溶于蒸馏水中静置几分钟充分搅拌调节pH。煮沸min将培养基冷却至℃~℃倾注平板。使用前临时制备不得超过h。A磷酸盐缓冲液A成分磷酸二氢钾(KHPO)g蒸馏水mLpHA制法贮存液:称取g的磷酸二氢钾溶于mL蒸馏水中用大约mL的molL氢氧化钠溶液调节pH用蒸馏水稀释至mL后贮存于冰箱。稀释液:取贮存液mL用蒸馏水稀释至mL分装于适宜容器中℃高压灭菌min。A无菌生理盐水A成分氯化钠g蒸馏水mLA制法称取g氯化钠溶于mL蒸馏水中℃高压灭菌min。AmolLNaOHA成分NaOHg蒸馏水mLA制法称取g氢氧化钠溶于mL蒸馏水中℃高压灭菌min。AmolLHClA成分HClmL蒸馏水mLA制法移取浓盐酸mL用蒸馏水稀释至mL℃高压灭菌min。GB附录B(规范性附录)大肠菌群最可能数(MPN)检索表B大肠菌群最可能数(MPN)检索表每g(mL)检样中大肠菌群最可能数(MPN)的检索见表B。表B大肠菌群最可能数(MPN)检索表阳性管数可信限阳性管数可信限MPN下限上限MPN下限上限<,,,,>注:本表采用个稀释度g(mL)、g(mL)和g(mL)每个稀释度接种管。注:表内所列检样量如改用lg(mL)、g(mL)和g(mL)时表内数字应相应降低倍如改用g(mL)、g(mL)、g(mL)时则表内数字应相应增高倍其余类推。

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