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首页 饲料原料学与配方学大全:PDF清晰版,2000页

饲料原料学与配方学大全:PDF清晰版,2000页.pdf

饲料原料学与配方学大全:PDF清晰版,2000页

zhangcongqi
2010-02-06 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《饲料原料学与配方学大全:PDF清晰版,2000页pdf》,可适用于农林牧渔领域

第一篇饲饲料料配配制制新新技技术术新新工工艺艺评评价价与与产产品品品品质质测测定定最最新新技技术术标标准准及及政政策策法法规规!第第第第第第第第第第第第一一一一一一一一一一一一章章章章章章章章章章章章饲饲饲料料料品品品质质质测测测定定定最最最新新新技技技术术术标标标准准准饲料添加剂!"#!!$胡萝卜$$二酮(!"#斑蝥黄)(’()!*,"$"")!范围本标准规定了以合成!!$胡萝卜$$二酮(斑蝥黄)为主要原料而制成的饲料添加剂!"#!!$胡萝卜$$二酮技术要求、试验方法、验收规则、标签及包装运输和储存。本标准适用于以喷雾法工艺制造的饲料添加剂!"#!!$胡萝卜$$二酮。分子式:""相对分子量:*结构式:!规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准中引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件其最新版本适用于本标准。"#$’!())!分析实验室用水规格和试验方法"#(*’饲料标签"#$(,*’*饲料中铅的测定方法,技术要求!"#性状:紫红色到红紫色的流动性粉末。!"$饲料添加剂(*!!胡萝卜二酮(斑蝥黄)应符合表(的要求。表(项目指标粒度本品应(**通过*’孔径的筛网(!*目)干燥失重$()!’含量(以。!!计)$()"(*铅$($)!(*试验方法本标准所用试剂和水在没有注明其他要求时均指分析纯试剂和"#$’!())!规定的三级水。"#粒度称取试样**使用振动筛内应全部通过*’孔径(:!*目)的分析筛。"$干燥失重的测定"$"#称取试样约((精确到****()置于已在(*<烘箱中干燥至恒重的称量瓶内打开称量瓶瓶盖置于(*<烘箱中干燥至恒重。"$"$计算和结果的表示干燥失重=((以质量百分数表示)按式(()计算:·!·第一篇饲料配制新技术新工艺评价与产品品质测定最新技术标准及政策法规!"#$"$$’"(((")⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯式中:$"干燥前的试样加称量瓶质量单位为克())$干燥后的试样加称量瓶质量单位为克())$试样质量单位为克())。!"#鉴别测量在**,中的环己烷溶液的吸收值其吸收极大值应处于波长*$和*$之间。!"!含量测定原理:!!胡萝卜**二酮在波长*$和*$之间有吸收峰存在根据比耳定律其吸收强度和试料浓度成正比。!"!"$试剂!"!"$"$无水乙醇。!"!"$"三氯甲烷。!"!"$"#环己烷:光学纯。!"!"仪器和设备!"!""$离心机(*((($)。!"!""旋转蒸发器。!"!""#分光光度计。!"!"#测定称取试样约"(($)(精确到(((("))置于($的容量瓶中加"($预热至(的蒸馏水并在(的水浴中保持$。冷却后加"(($无水乙醇(**"")和"(($三氯甲烷(**")用超声波水浴处理$用三氯甲烷定容。摇匀后取出部分内容物置于具塞离心管内离心$移取离心管内上层清液($置于旋转蒸发器的圆底烧瓶中在*真空蒸发至干。残渣用($的无水乙醇和($的三氯甲烷润湿后加入环己烷(**",)少量多次进行溶解并转移到"(($的容量瓶中用环己烷定容。在分光光度计上测定波长*$*$之间的吸收极大值使用"$的吸收池以空白环己烷作参比。!"!"!计算试样中!!胡萝卜**二酮的含量!(以质量百分数表示)按式()进行计算:!#$:’((("((’$,()⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯式中:·!·第一章饲料品质测定最新技术标准!"#$试样溶液测得的吸收最大值’’试样中!!(胡萝卜())(二酮的标准百分消光值(*,")’’’稀释倍数"试样的质量单位为毫克(")。!"!"#允许误差同一操作者对同一试样同时两次平行测定所得结果相对平均偏差不得大于。!"#铅的测定按’’进行。检验规则#"$本产品应由生产厂的质量检验部门按规定进行质量检查合格后方可出厂每批出厂的产品都应带有质量证明书。#"使用单位有权按照本标准规定的检验规则和试验方法对所收到的产品进行质量检验检验其是否符合本标准的要求。#"取样方法:取样需备有清洁、干燥、具有密闭性和避光性的样品瓶。瓶上贴有标签注明生产厂名称、产品名称、批号及取样日期。取样时应用清洁适用的抽样器。每批产品抽取两份每份抽样量应有足够的代表性。充分混匀后分装两个标明品名、批号和生产日期的样品袋。一件送化验室检验另一件密封后送留样室保存。#"!如果在检验中有一项不符合标准要求时应重新取样进行复检重新检验结果即使有一项指标不符合标准要求时则整批产品不能验收。#"#如供需双方对产品质量发生争议时可由双方商请仲裁单位按照本标准的检验规则和方法进行仲裁。标签本产品采用符合’)规定的标签。包装、运输和储存’"$本产品准确称量后装入密闭、避光的适当材质的包装袋中封口盛放于外包装容器内密闭储存。’"运输过程应有遮盖物避免日晒雨淋、受热及撞击。搬运装卸小心轻放不得与有毒有害或其他有污染的物品混装、混运。·!·第一篇饲料配制新技术新工艺评价与产品品质测定最新技术标准及政策法规前言本标准代替!"#$’(((《饲料中沙门氏菌的检验方法》因为国际上的发展原标准在技术上已过时。本标准修改采用)*,(:((《微生物学沙门氏菌检验导则》(英文版)。本标准根据)*,(:((重新起草。除增加了资料性附录、附录外本国家标准章条编号与)*,(:((完全一样。考虑到我国国情在采用)*,(:((时本标准做了一些修改。有关技术性差异已编入正文中并在它们所涉及的条款的页边空白处用垂直单线标识。在附录给出了这些技术性差异及其原因的一览表以供参考。为便于使用本标准还做了以下编辑性修改:)“本国际标准”一词改为“本标准”)用小数点“”代替作为小数点的逗号“”)删除国际标准的前言)标准名称由“微生物学沙门氏菌检验导则”改为“饲料中沙门氏菌的检测方法”。本标准的附录、附录"、附录为规范性附录附录、附录为资料性附录。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位:国家饲料质量监督检验中心(北京)。本标准主要起草人:饶正华、李丽蓓、高生、杨曙明、苏晓鸥。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:!"#$’(((。·!·第一章饲料品质测定最新技术标准饲料中沙门氏菌的检测方法!"#$’()*’’*警告:为保障实验室人员的健康只有具备适当设备的实验室才能承担沙门氏菌检验。应小心处理所有培养材料的废弃物。范围本标准规定了沙门氏菌检验方法。本标准适用于饲料中沙门氏菌的检验。*规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件其最新版本适用于本标准。!",(食品卫生微生物学检验总则!"#$((饲料采样方法术语和定义下列术语和定义适用于本标准。!"#沙门氏菌检验中能在选择性固体培养基中形成典型菌落且生化和血清学鉴定与本标准中描述一致的微生物。!"$沙门氏菌的检验:按本标准检验以确定沙门氏菌在某种产品中存在与否的过程。原理沙门氏菌的检测需要四个连续的阶段(见附录<)。注:样品中可能存在少量的沙门氏菌但却含有大量肠杆菌科的其他菌因此选择性增菌是必须的而且为了检验受伤的沙门氏菌常须进行预增菌。"#用非选择性液体培养基预增菌将试料接种到缓冲蛋白胨水在=>=下培养*’。"$在选择性液体培养基上增菌·!·第一篇饲料配制新技术新工艺评价与产品品质测定最新技术标准及政策法规将!"#中的培养物接种到氯化镁$孔雀绿培养基和亚硒酸盐胱氨酸培养基中。氯化镁$孔雀绿培养基在!培养!’亚硒酸盐胱氨酸培养基在()*#培养!’或再延长!’。!"#划线及识别将!"的培养物接种到以下两个选择性培养基:应使用酚红煌绿琼脂培养基除非国际标准对检样有规定或有特殊考虑(如分离乳糖阳性沙门氏菌)。,琼脂培养基(见""!")。在()*#培养!’后检查必要时培养至!’根据菌落特性辨别可疑菌落。!"!鉴定挑出!"(中的可疑沙门氏菌菌落再次培养用合适的生化和血清学试验进行鉴定。培养基、试剂和血清$"总则微生物实验室的操作按照!"#进行。$"培养基和试剂注:由于有大量的培养基和试剂可供选择为明确起见在附录中规定了它们的成分和制备方法。除非另有说明在分析中仅使用确认为分析纯和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。$""缓冲蛋白胨水():见第"#章。$""氯化镁$孔雀绿增菌液():见第"章。$""#亚硒酸盐胱氨酸增菌液():见第"(章。$""!选择性划线固体培养基:)酚红、煌绿琼脂:见第"!章和附录。:),琼脂:见第"章。$""$营养琼脂:见第")章。$""’三糖铁琼脂(<):见第"章。$""(尿素琼脂:见第"章。$"")赖氨酸脱羧试验培养基:见第"章。$""*!$半乳糖苷酶试剂:见第"#章。$""$反应培养基(见第"#=章):)$培养基。·!·第一章饲料品质测定最新技术标准!)肌酸溶液。")!萘酚乙醇溶液。#)氢氧化钾溶液。!"#"$$靛基质反应培养基(见第$章):’)胰蛋白胨色氨酸培养基。!)柯凡克试剂。!"#"$#半固体营养琼脂:见第$(章。!"#"$盐水溶液:见第$)章。!"#"$沙门氏菌因子*,型血清。设备与材料注(:可以用一次性使用的仪器代替可重复使用的仪器。’"$高压灭菌锅或灭菌箱。’"#干热灭菌箱:(。’"培养箱:(。’")水浴或)培养箱。’"!水浴:)。’"’水浴:(。’"(接种环:铂铱或镍铬丝直径约(。’")仪。’"*培养瓶或三角瓶。注:可用无毒金属或塑料螺丝盖的培养瓶或三角瓶。’"$培养试管:直径长度。’"$$量筒。’"$#刻度吸管。’"$平皿:皿底直径"或)。采样实验室样品真实、具有代表性在运输和贮存过程中没有发生损失或改变是非常重要的。采样方法可按照国家标准:$<)进行(器具要经过消毒)。试样的制备将至少=>具有代表性的饲料样品四分法缩分至约>过)目筛在密闭瓶中低温保存。·!"·第一篇饲料配制新技术新工艺评价与产品品质测定最新技术标准及政策法规!操作步骤(见附录")!"#试料和#$#稀释液制备!"#"#用预增菌液(’(’#)作为稀释液来制备#$#稀释液。!"#"$取试料()加入装有((*缓冲蛋白胨水(’(’#)的*广口瓶内。如果试料量不是()试料质量与预增菌液的体积比应约为#$#。注#:当检测来自同一特定样品的多个试料时若有证据表明试料混合不影响检验结果试料可以混合。例如:若需检测#份()试料时混合这#份形成()试料缓冲蛋白胨水用((。或者从#个单独的试料预增菌液中分别取出’#*和#*入,培养基和亚硒酸盐胱氨酸增菌液中混合后分别接入’#和#选择性增菌培养基中。注(:干样和粉状样可能需要特殊的水合过程以提高沙门氏菌的复性。!"$非选择性增菌将增菌液在#培养时间不少于#不超过(。!"选择性增菌培养!""#取!’(中获得的预增菌培养物’#*接种于装有#*氯化镁孔雀绿增菌液(’(’()的试管中另取预增菌培养物#*接种于装有#*亚硒酸盐胱氨酸增菌液(’(’)培养瓶中。!""$接种后两种培养基(!’’#)的培养条件如下:)氯化镁孔雀绿增菌液试管在(培养(。)亚硒酸盐胱氨酸培养瓶在#培养(或。注:在某些情况下可以将亚硒酸盐胱氨酸培养基的培养温度增加至(。但需在检验报告中提及此改动。!"分离培养和鉴定!""#氯化镁孔雀绿增菌液在培养(后分别用接种环划线接种在酚红煌绿琼脂〔’(’)〕平皿和琼脂〔’(’)〕平皿上为取得明显的单个菌落取一环培养物接种两个平皿第一个平皿接种后连续在第二个平皿上划线接种。注:在酚红煌绿琼脂平板上划线时建议使用以下方法:两个平皿用同一接种环(’:)按附录进行划线操作划完整个平皿第一个平皿接种后不要烧接种环也不要换接种环。当仅用一个平皿时划线方法按附录中的第一个平皿的方法。!""$亚硒酸盐胱氨酸培养瓶在培养(后重复!’’#的操作。!""将(!’’#)和(!’’()的平皿底部向上在#培养箱中培养。!""亚硒酸盐胱氨酸培养基(!’’(和!’’)在培养后重复!’’(和!’’。!""’培养((后检查平皿(!’’和!’’)中是否出现沙门氏菌典型菌落生长在酚红煌绿琼脂上的沙门氏菌典型菌落使培养基颜色·!!·第一章饲料品质测定最新技术标准由粉红变红。!"#"$如生长微弱或无典型沙门氏菌落出现时可在!"#$#重新培养’()*’。再检验平皿是否有典型沙门氏菌菌落。注:任何典型或可疑菌落均应进行鉴定(,)。辨认沙门氏菌菌落在很大程度上依靠经验它们外表各有不同不仅是种与种之间每批培养基之间也有不同此时可用沙门氏菌多价因子血清先与菌落作凝集反应以帮助辨别可疑菌落。!"#"在进行沙门氏菌鉴定时可以使用商业鉴定材料。!"鉴定!""’鉴定菌落的选择从每种分离平皿培养基上(,*,和,*,")挑取个被认为可疑菌落。少于个时可将全部典型或可疑菌落供进行鉴定。挑选的菌落在营养琼脂平皿(,),)上划线培养在!"#$#培养’()*’用纯培养物作生化和血清鉴定。!""(生化鉴定将按,,挑选的典型菌落,用接种针接种在,,),(,,),"培养基上。!""("’三糖铁培养基(,),")在琼脂斜面上划线和穿刺在!"#$#培养)*’。培养基变化见表。表三糖铁培养基变化表培养基部位培养基变化琼脂斜面黄色乳糖和蔗糖阳性(利用乳糖或蔗糖)红色或不变色乳糖和蔗糖阴性(不利用乳糖和蔗糖)琼脂深部底端黄色葡萄糖阳性(发酵葡萄糖)红色或不变色葡萄糖阴性(不发酵葡萄糖)穿刺黑色形成硫化氢气泡或裂缝葡萄糖产气典型沙门氏菌培养物斜面显红色(碱性)底端显黄色(酸)有气体产生有形成硫化氢(琼脂变黑)。当分离到乳糖阳性沙门氏菌时三糖铁斜面是黄色的因而证实沙门氏菌不应仅仅限于三糖铁培养的结果(,,!)。!""("(尿素琼脂培养基(,),)在琼脂表面划线在!"#$#培养)*’应随时检查如反应是阳性·!"·第一篇饲料配制新技术新工艺评价与产品品质测定最新技术标准及政策法规尿素极快地释放氨它使酚红的颜色变成玫瑰红色至桃红色以后再变成深粉红色反应常在!"#!$"之间出现。!"#"$"赖氨酸脱羧反应培养基(’(!())将培养物刚好接种在液体表面之下在*,,培养!$"生长后产生紫色表明是阳性反应。!"#"$"检查!半乳糖苷酶的反应(’(!()取一接种环可疑菌落悬浮于装有(!’生理盐水的试管中加甲苯滴振摇混匀将试管在*,,水浴锅中放置数分钟加试液(!’将试管重新放入*,,水浴锅中!$"随时检查黄色表明为阳性反应反应常在!后明显出现。!"#"$"#反应培养基(’(!()挑取一环可疑菌落接种在反应培养基〔’(!()〕上在*,,培养!$"取培养物(!于灭菌试管中加肌酸溶液〔’(!(:)〕!滴充分混匀后加"萘酚乙醇〔’(!()〕溶液*滴充分混匀后再加氢氧化钾溶液〔’(!(<)〕!滴再充分振摇混匀在’内形成桃红色表明为阳性反应。!"#"$"’靛基质反应培养基(’(!()取可疑菌落接种于装有’胰蛋白胨色氨酸培养基〔’(!()〕的试管中在*,,培养!$"培养结束后加柯凡克试剂〔’(!(:)〕形成红色表明是阳性反应。!"#"$"(生化试验生化试验见表!。表!生化试验表可疑菌在培养基上的反应阴性或阳性出现此反应者沙门氏菌株百分率三糖铁葡萄糖形成酸=三糖铁葡萄糖产气=(三糖铁乳糖(!:三糖铁蔗糖(’三糖铁硫化氢(>!)=(尿素分解赖氨酸脱羧反应=$(!半乳糖苷酶反应)(’:反应)(’·!"·第一章饲料品质测定最新技术标准可疑菌在培养基上的反应阴性或阳性出现此反应者沙门氏菌株百分率靛基质反应!"#$’()*,(((伤寒沙门氏菌)不产气。沙门氏菌亚属!(亚利桑那属)乳糖反应可阴可阳但"!半乳糖苷酶反应总是阳性的。沙门氏菌亚属#乳糖反应阴性"!半乳糖苷酶反应阳性。对这些菌株可补充生化试验。’()*,(((甲型副伤寒沙门氏菌)赖氨酸脱羧反应阴性。!"#"$血清学鉴定以纯培养菌落("$$)用沙门氏菌因子血清、或型用平板凝集法检查其抗原的存在。!"#"$"除去能自凝的菌株在仔细擦净的玻璃板上放滴盐水($:$)使部分被枪菌落分散于盐水中均匀混合后轻轻摇动<=><=对着黑的背景观察如果细菌已凝集成或多或少的清晰单位此菌株被认为能自凝。不宜提供作抗原鉴定。!"#"$"抗原检查用认为无自凝力的纯菌落按"$$$方法用滴型血清($:$)代替盐水如发生凝集判为阳性。!"#"$"$抗原检查用认为无自凝力的纯菌落按"$$$方法用滴型血清($:$)代替盐水如发生凝集判为阳性。!"#"$"’抗原检查用认为无自凝力的纯菌落接种在半固体营养琼脂($:$:)中在ABA培养#>:<用这种培养物作为检查抗原用按照"$$$方法用滴血清($:$)代替盐水如发生凝集判为阳性。!"#"’生化和血清试验综合鉴定表给出了对菌落("$$)的鉴定实验("$$:和"$$)结果。表生化和血清试验综合鉴定表生化反应有无自凝血清学反应说明典型无、或抗原阳性被认为沙门氏菌菌株典型无全为阴性反应可能是沙门氏菌典型无未作检查("$$$)可能是沙门氏菌·!"·第一篇饲料配制新技术新工艺评价与产品品质测定最新技术标准及政策法规生化反应有无自凝血清学反应说明无典型反应无!、"#或$抗原阳性可能是沙门氏菌无典型反应无全为阴性反应不认为是沙门氏菌!"#"#权威性确认沙门氏菌可疑菌株(见表)送专门菌种鉴定中心进行鉴定。’结果表示根据分析结果得出(克样品中存在或不存在沙门氏菌。检验报告检验报告应给出检测方法和结果。应给出在本标准没有说明的操作条件。检验报告中也应说明培养温度以及亚硒酸盐胱氨酸培养基的培养温度是否增加到)*。检验报告应包括样品鉴定的所有必须的内容。*精度确认为检验实验室用本标准中的方法和培养基检测沙门氏菌的能力可将参考样接入预增菌培养基(,*)作对照。检测程序与检样相同。·!"·第一章饲料品质测定最新技术标准附录!检验程序图(规范性附录)图!"#检验程序图·!"·第一篇饲料配制新技术新工艺评价与产品品质测定最新技术标准及政策法规附录!培养基和试剂制备(规范性附录)!"#缓冲蛋白胨水!"#"#成分蛋白胨#$氯化钠磷酸氢二钠(’()*,·#)*),)磷酸二氢钾(*),)#"蒸馏水#$$$*"$!"#"$制法按上述成分分配好校正*分装于大瓶中#)#高压灭菌)$临用时分装在$$瓶中(每瓶))或配好后校正*分装于$$瓶中每瓶))#)#高压灭菌)$后备用。!")氯化镁孔雀绿增菌液!"$"#溶液!"$"#"#成分蛋白胨"$氯化钠:"$磷酸二氢钾(*),)#"蒸馏水#$$$*"$!"$"#"$制法将各成分加入蒸馏水中加热至约$溶解。此溶液需当天使用。!"$"$溶液!!"$"$"#成分氯化镁(<=)·*),)$$蒸馏水#$$$!"$"$"$制法将<=)·*),溶于水中。!"$"溶液=·!"·第一章饲料品质测定最新技术标准!"#"$"成分孔雀绿!"#$蒸馏水!!’!"#"$"#制法将孔雀绿溶于水中。溶液可室温保存于棕色玻璃瓶中。!"#"完全培养基!"#""成分溶液(!!!’溶液)!!’溶液*!’!"#""#制法按上述比例配制校正,值使灭菌后,值为"分装于试管中每管!’。高压灭菌。冰箱保存。)"亚硒酸盐胱氨酸增菌液!"$"基础液!"$""成分胰蛋白胨$乳糖#$磷酸氢二钠(,#·,)!$亚硒酸钠#$蒸馏水!!!’,"!!"$""#制法溶解前三种成分于水中煮沸冷却后加入亚硒酸钠校正,后分装每瓶!!!’。!"$"#’胱氨酸溶液!"$"#"成分’胱氨酸!"$:’氢氧化钠溶液’。!"$"#"#制法在灭菌中用灭菌水将上述成分稀释到!!’毋须蒸汽灭菌。!"$"$完全培养基制备基础液!!!’’胱氨酸溶液!’·!"·第一篇饲料配制新技术新工艺评价与产品品质测定最新技术标准及政策法规!"#$基础液冷却后以无菌操作加’胱氨酸溶液将培养基分装于适当容量的灭菌瓶中每瓶()。注:培养基在配制当日使用。*$酚红、煌绿琼脂!"#"$基础液!"#"$"$成分牛肉浸膏,蛋白胨(酵母浸液粉末磷酸氢二钠(")(磷酸二氢钠(")$琼脂((蒸馏水)!"#$!"#"$"制法将上述成分加水煮沸溶解校正!"((高压灭菌):。!"#"糖、酚红溶液!"#""$成分乳糖(蔗糖(酚红$蒸馏水加至()!"#""制法将各成分溶解于水中在#水溶锅中加温):冷却至,,立即使用。!"#"煌绿溶液见*$$条。!"#"#完全培养基制备基础液)糖、酚红溶液()煌绿()在无菌条件下将煌绿溶液加入到冷却至约,,的糖、酚红溶液中再将糖、酚红、煌绿溶液加入到,,,基础液中混合。!"#"’琼脂平皿制备将*$$制备的培养基在水浴锅中溶解冷却至,,,倾注入灭·!"·第一章饲料品质测定最新技术标准菌的平血中。大号平皿倾入约!"#$小号平皿倾入约#$待凝固后备用平皿在室温保存不超过!’在冰箱保存不超过(!’。)*,$琼脂!"#"$成分蛋白胨("牛肉浸膏乳糖"蔗糖"去氧胆酸钠硫代硫酸钠(*柠檬酸钠柠檬酸铁铵中性红"*"琼脂("蒸馏水"""#$,*!"#"制法将除中性红和琼脂以外的成分溶解于!""#$蒸馏水中校正,再将琼脂于""#$蒸馏水中煮沸溶解两液合并加入"*中性红溶液#$待冷却至"倾注平皿。)*营养琼脂!""$成分牛肉浸膏蛋白胨琼脂蒸馏水"""#$,*"!""制法将上述各成分煮沸溶解校正,(高压灭菌("#。!""’平皿制备将)**(制备的营养琼脂在水浴锅里溶解冷却至"时倾注入灭菌平皿中每皿约#$。·!"·第一篇饲料配制新技术新工艺评价与产品品质测定最新技术标准及政策法规!"#三糖铁琼脂!"#"$成分牛肉浸膏$酵母浸膏$蛋白胨’氯化钠(乳糖)’蔗糖)’葡萄糖)柠檬酸铁’"$硫代硫酸钠’"$酚红’"’*琼脂)),蒸馏水)’’’#"*!"#"制法将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中校正加入琼脂加热煮沸以溶化琼脂再加入’"酚红溶液)摇匀分装试管装量宜多些以便得到较高的底层))高压灭菌’放置高层斜面备用。!",尿素琼脂!""$基础液!""$"$成分蛋白胨)葡萄糖)氯化钠(磷酸二氢钾酚红’"’)琼脂)),蒸馏水)’’’",!""$"制法将上述成分溶于水中煮沸校正))高压灭菌’。!""尿素溶液!"""$成分·!"·第一章饲料品质测定最新技术标准尿素!""#蒸馏水加至$"""!"#"$"$制法将尿素溶于水中通过滤器除菌并应检查灭菌情况。!"#"完全培养基制备基础液’("尿素溶液("在无菌条件下将尿素溶液加到事先溶化并冷却至!()基础液中分装试管放置成斜面备用。*’赖氨酸脱羧试验培养基!""’成分,赖氨酸盐酸盐(#酵母浸膏#葡萄糖$#溴甲酚紫""$(#蒸馏水$"""!""$制法将上述各成分溶于水中煮沸校正分装于小试管中每支约($$)高压灭菌$"备用。*$"反应培养基!"’("’基础培养基!"’"("’"’成分蛋白胨#葡萄糖#磷酸氢二钾(#蒸馏水$"""’!"’("’"$制法将上述成分溶于水中加热溶解校正分装在小试管中每支约分$$()高压蒸汽灭菌"。!"’("$肌酸溶液!"’("$"’成分肌酸单水化合物"(#·!!·第一篇饲料配制新技术新工艺评价与产品品质测定最新技术标准及政策法规蒸馏水!""#$!"#$""制法将肌酸单水化合物溶于水中备用。!"#$"!萘酚乙醇溶液!"#$""#成分!萘酚’()乙醇!""#$!"#$""制法将!萘酚溶于乙醇溶液中。!"#$"’氢氧化钾溶液!"#$"’"#成分氢氧化钾*"’蒸馏水!""#$!"#$"’"制法将氢氧化钾溶于水中。,!!靛基质反应培养基!"##"#基础培养基!"##"#"#成分胰蛋白胨!"’氯化钠’$色氨酸!’蒸馏水!"""#$,!"##"#"制法将上述各成分溶解于!""水中过滤校正分装于小试管中每支#$!!高压灭菌!#。!"##"柯凡克试剂!"##""#成分对二甲氨基苯甲醛’盐酸#$戊醇#$!"##""制法将对二甲氨基苯甲醛溶于戊醇中然后缓缓加入浓盐酸。,!"半乳糖苷酶试剂!"#"#缓冲液·!"·第一章饲料品质测定最新技术标准!"#$"#"#成分磷酸二氢钠(!"#$’)()*,)氢氧化钠溶液蒸馏水加至,!"#$"#"$制法将磷酸二氢钠溶于大约’水中用氢氧化钠调#为),加水至最后容量,贮存于冰箱中备用。!"#$"$!溶液!"#$"$"#成分邻硝基酚!半乳糖苷(!):,蒸馏水!"#$"$"$制法将!溶解于,水中冷却。!"#$"完全试剂制备缓冲液!溶液将缓冲液加入到!溶液中。!"#半固体营养琼脂!"#"#成分牛肉浸膏蛋白胨琼脂’<蒸馏水,,,#),!"#"$制法将上述成分溶于水中校正#$高压灭菌$,=>。)’盐水溶液!"#"#成分氯化钠:)蒸馏水,,,#),!"#"$制法将氯化钠溶解于水煮沸校正#后分装$高压灭菌$,=>。·!"·第一篇饲料配制新技术新工艺评价与产品品质测定最新技术标准及政策法规附录!煌绿的规格(规范性附录)!"#细菌学特性在酚红煌绿琼脂〔$""’)〕上变形杆菌的伸展受抑制而沙门氏菌的生长不被抑制。!"检测方法!"#"$培养基根据("准备酚红煌绿琼脂平板但煌绿需具不同浓度范围从"$)*,到)*,。!"#"#程序在一系列具不同煌绿浓度的琼脂平板上接种一种纯的变形杆菌并且在类似系列的平板上接种一种纯的沙门氏菌。在#下培养时间不超过。煌绿的合适浓度应当能使沙门氏菌在其中生长菌落为典型的粉红色直径为#))))。而变形杆菌的生长却被限制即不能伸展。按此浓度配制煌绿溶液(见("")。·!"·第一章饲料品质测定最新技术标准附录!平板划线的标准方法(资料性附录)平板划线的标准方法见图!"#。图!"#平板划线的标准方法·!"·第一篇饲料配制新技术新工艺评价与产品品质测定最新技术标准及政策法规附录!本标准与"#$’(:)((*技术性差异及其原因(资料性附录)表!)给出了本标准与"#$’(:)((*的技术性差异及其原因。表!)本标准与"#$’(:)((*技术性差异及其原因本标准的章条编号技术性差异原因)删除"#$’(:)(,*第一章中“适用于人类消费品”。删除“培养温度(*或*’)应当被有关部门认可并应在检测报告中说明”。本标准只针对饲料。此内容是从国际角度叙述的我国不适用于这种叙述。用’,()代替"#$,,’:)(,*:<=<>>=<ABC<D<D>>B=AB=EAF><G>F=>B=用’,()代替"#$’),:)(,:<=<>>=<AF><G>F=>B=E。增加引用HI)(()。引用的国际标准未被等同或修改采用为国家标准或行业标准。引用的国家标准与相应国际标准一致性程度均为非等效。以适应我国标准。*)选用“其他培养基”中的“JKL培养基”。根据使用效果和我国工业实际情况。)用’,()代替"#$’),。理由与规范性引用文件的代替一样。’增加HI)(()饲料采样方法。适应我国国情。,"#$’(:)((*要求各国制定。采取我国常用试样制备方法。()中注)、注删除“食品”两字。本标准只针对饲料。(’表中注删除"#$’(:)((*表注中的))、)两项。表中))不符合我国标准编制习惯表中)是从国际角度叙述的。·!"·第一章饲料品质测定最新技术标准饲料中大肠菌群的测定!"#$’()**)警告使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。具备适当设备的实验室才能承担检验。应小心处理所有废弃物。范围本标准规定了饲料中大肠菌群的测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、饲料原料(骨粉、肉骨粉、鱼粉、乳清粉等)中大肠菌群的测定。)规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件其最新版本适用于本标准。!",()((食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂!"#$’((饲料采样方法原理将试样稀释至适当浓度用乳糖胆盐发酵培养基在(’)下培养()))根据确证试验为大肠菌群阳性的管数查出每**()试样中大肠菌群的最大可能数()。试剂和材料除非另有说明在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或相当纯度水。以下试剂制备具体要求见附录。)乳糖胆盐发酵培养基:见第章。:)伊红美蓝琼脂平板:见第)章。)乳糖发酵培养基:见第章。<)磷酸盐缓冲稀释液:见第章。=)生理盐水。·!"·第一篇饲料配制新技术新工艺评价与产品品质测定最新技术标准及政策法规!)革兰氏染色液:见第"#$章。$仪器、设备!"#培养箱:’()’。!"$显微镜:普通生物显微镜。!"均质器或乳钵。!"平皿:直径为*,,。!"!试管。!"’吸管:),。!"(广口三角瓶:容量为$,。!")玻璃珠:直径约$,,。!"*载玻片。!"#酒精灯。!"##试管架。采样按照)**#)的要求执行。采样器具要灭菌消毒。分析步骤(见附录)("#检样稀释("#"#以无菌操作将试样$(或,)放于含有$,灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内经充分振摇或研磨做成))的均匀稀释液。固体试样最好用均质器以,:),:的速度处理),:做成))的均匀稀释液。("#"$用),灭菌吸管吸取))稀释液),注入含有*,灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内振摇试管混匀做成))的稀释液。("#"另取),灭菌吸管按上条操作依次做)倍递增稀释每递增稀释一次换用一支),灭菌吸管。("#"根据对试样污染情况的估计选择三个稀释度每个稀释度接种管。("$乳糖发酵试验将待检试样接种于乳糖胆盐发酵管内接种量在),以上者用双料乳糖胆盐发酵管),及),以下者用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种管置’()’培养箱内培养<(<如所有乳糖胆盐发酵管都不产气则可报告为大肠菌群阴性如有产气者则按下列程序进行。("分离培养·!"·第一章饲料品质测定最新技术标准将产气的发酵管分别转接种在伊红美蓝琼脂平板上置!"#$#培养箱内培养’()*’然后取出观察菌落形态并做确证试验。!"#确证试验在上述平板上挑取可疑大肠菌群菌落个()个进行革兰氏染色同时接种乳糖发酵管置!"#$#培养箱内培养)*’$)’观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌即可报告为大肠菌群阳性。!"$报告根据确证为大肠菌群阳性的管数查,检索表(表)报告每()试样中大肠菌群的最大可能数以“个()”表示。表大肠菌群最大可能数(,)检索表阳性管数()!()!()!,〔()试样〕可信限上限下限:!!)"!:!")!):!)")))))!"!!!!)"!!*:)))!)!!!")!·!"·第一篇饲料配制新技术新工艺评价与产品品质测定最新技术标准及政策法规阳性管数!"#$()’()"#$()’()("#$()’*,〔"((#$()试样〕可信限上限下限"(""(’(’("""("(("’("’("("’"(("’("’’(((("(’((""(’(’(((((’("("(’((""(((("("’’(("((("("(("((’(’(’((’"’(’(’’’(’((’(("((’("’(("’((’(("(’((’(’(’"(’(("((’""("(’((’""((’((’((’"’"((·!"·第一章饲料品质测定最新技术标准阳性管数!"#$()’()"#$()’()("#$()’*,〔"((#$()试样〕可信限上限下限’(’("(’((’""((’((((’"((’(((’’((’’(((’("’(((’’"(("((((’’""((("(((((’’’!(((!本表采用三个稀释度["#$()、()"#$()和()("#$()]每稀释度’管。表内所列试样量如改用"(#$()、"#$()和()"#$()时表内*,数字应相应降低"(倍如改用()"#$()、()("#$()和()(("#$()时则表内*,数字应相应增加"(倍。其余可类推。·!"·第一篇饲料配制新技术新工艺评价与产品品质测定最新技术标准及政策法规附录!试剂和培养基制备(规范性附录)以下培养基的制备按"#$’()*’’$的规定。!(*乳糖胆盐发酵培养基!"#"#成分蛋白胨),猪胆盐(或牛、羊胆盐),乳糖*,($溴甲酚紫水溶液)蒸馏水*($!"#"$制法将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中校正加入指示剂分装每管*并放入一个小导管**高压灭菌*。注:双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外其他成分加倍。!()伊红美蓝琼脂(#)!"$"#成分蛋白胨*,乳糖*,磷酸氢二钾),琼脂*,)伊红溶液)(美蓝溶液*蒸馏水*(*!"$"$制法将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中校正分装于烧瓶内*)*高压灭菌*备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂冷至:加入伊红和美蓝溶液摇匀倾注平板。·!!·第一章饲料品质测定最新技术标准!"#乳糖发酵培养基!"#"$成分蛋白胨$乳糖’"()溴甲酚紫水溶液$*,蒸馏水’,"(!"#"制法将蛋白胨及乳糖溶于水中校正加入指示剂按检验要求分装#,、’,或#,并放入一个小导管’’*高压灭菌’*。注:双料乳糖发酵管除蒸馏水外其他成分加倍。#,乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。!"(磷酸盐缓冲液!""$储存液磷酸二氢钾#(()’:,氢氧化钠溶液’*,蒸馏水$*,"$!""制法先将磷酸盐溶解于*,蒸馏水中用’:,氢氧化钠溶液校正后再用蒸馏水稀释至’,。!""#稀释液:取储存液’"$*,用蒸馏水稀释至’,。分装每瓶’,或每管’,’$’高压灭菌’*。!"*革兰氏染色法!"’"$结晶紫染色液结晶紫’<*)乙醇$,’:,草酸铵水溶液,将结晶紫溶解于乙醇中然后与草酸铵溶液混合。!"’"革兰氏碘液碘’碘化钾$蒸馏水#,将碘与碘化钾先进行混合加入蒸馏水少许充分振摇待完全溶解·!"·第一篇饲料配制新技术新工艺评价与产品品质测定最新技术标准及政策法规后再加蒸馏水至!""#$。!"#"$沙黄复染液沙黄"’()’*乙醇"#$蒸馏水)"#$将沙黄溶解于乙醇中然后用蒸馏水稀释。!"#"染色法!"#""将涂片在火焰上固定滴加结晶紫染色液染#,水洗。!"#""’滴加革兰氏碘液作用#,水洗。!"#""$滴加)’*乙醇脱色约!"或将乙醇滴满整个涂片立即倾去再用乙醇滴满整个涂片脱色"。!"#""水洗滴加复染液复染#,。水洗待干镜检。!"#""#结果革兰氏阳性菌呈紫色。革兰氏阴性菌呈红色。注:亦可用"稀释石炭酸复红染色液作复染液复染时间仅需"。·!"·第一章饲料品质测定最新技术标准附录!大肠菌群检验程序(规范性附录)大肠菌群检验步骤见图上!"#。图!"#大肠菌群测定步骤图

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