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生物制品蛋白质含量Lowry测定法应注意的几个问题.pdf

生物制品蛋白质含量Lowry测定法应注意的几个问题

李薇薇不是我马甲
2014-01-08 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《生物制品蛋白质含量Lowry测定法应注意的几个问题pdf》,可适用于人文社科领域

StratPharmaceutieaJournalVoNo.生物制品蛋白质含量Lowry测定法应注意的几个问题张康(福建省医药工业公司福州)摘要:日常工作中刺定生特制品中总蛋白酌舍量常采用Lowry法由于蛋白盾酌特异性烈厦干扰转质存在.常培刺定站果带皋较置误差丰文H刺定时参愚标准品选择、干扰物存在酌排除方面甚蛄了提击Lowry渣洲蛄果准璃性酌妊验。关键词蛋白质:舍量洲定Lowry法准璃性中图分类号:R.文献标识码:C文章缩号:∞(g)。l生物制品的中间体成品蛋白质含量测定通常是检验项目中较难的一项测定常需要其他方法进行独立的肯定日常工作中测定总蛋白质含量的方法常采用Iowry法该法是根据福林酚试剂与蛋白质的显色反应来测定蛋白质的含量囡其灵敏度高和操作简便在生化检验领域广泛应用。但是由于蛋白质的特异性影响及干扰物质的存在也给本法带来误差因此在实际应用中为提高本法的准确性有如下几个问题应充分考虑。参照标准品I.owry法反应机理是蛋白质中芳香族氨基酸酪氨酸、色氨酸及苯丙氨酸把磷钼酸一磷钨酸还原成杂多钼蓝而显色。由于不同蛋白质中芳香簇氨基酸的含量不同因而使不同蛋白质的反应强度不同。虽然历史上一直没用牛血清制备标准曲线.但是例如胸腺制品、转移因子等的氨基酸组成远比牛血清白蛋白复杂的多故在实际测定中应采用与制品同类的参考物校正。显色波长的选择以牛血清白蛋白为参照标准的显色液的最大吸收峰在nm附近笔者测定了批不同厂家的生物制品显色液的最大吸收峰在nm之间Iowry等认为蛋白质的最终浓度为mg·ml时.波长应选择在最大吸收峰nm附近对于高浓度的蛋白质溶液.波长应选择在nm附近。Bensadoun等采用改良Lowry法测定蛋白质含量波长选择在nm。国外有人认为显色液波长选择在之间笔者分别采用、、、nm的波长测定了批制品的含量。、、nm的测定值相差约.而nm测定值则比前者低约。干扰物的存在糖、醇、酚、钾、EDTA等物质的存在对Lowry法测定有明显干扰作用它们的干扰作用表现在增强或减弱的颜色增强或减弱显色程度还原破坏福林试剂或产出沉淀等。为了使Lowry测得准确的结果测定前必须排除干扰物质的影响一般用蛋白沉淀的手段去除干扰物质。在具有脱氧胆酸钠的条件下用的三氯乙酸可以定量将蛋白质沉淀下来然后进行测定。与凯氏定氮结果的比较凯氏定氮是准确和精密的蛋白质浓度测定法。有人比较两法测定生物制品的含量结果凯氏定氮法比Lowry法高..倍Lowry法结果远低于凯氏定氮法的主要原因是制品中芳香氨基酸含量较低由于蛋白质的特异性影响牛血清白蛋白与生物制品的氨基酸组成的差异而使两法结果有较大的差异。讨论本文的工作总结表明日常工作中用Lowry法测定生物制品、半成品的总蛋白质含量时.为提高其准确性.测定时的参照标准品以及波长应根据不同的品种蛋白质的结构特性通过实验予以调整和确定同时对干扰物测定前应予以排除。由于Lowry法和凯氏定氮法测定总蛋白的原理完全不同.两者测定的结果相差较大这一点在日常工作中必须要充分考虑到。·声明·为了实现科技期刊编辑.出版发行工作的电子化推进科技信息交流的网络化进程我刊现已入网万方数据一数字化期刊群(网址:http://www.wanfangdate.corn.on)。所以向奉刊投稿并录用的稿件文章.将一律由鳊辑郜统一纳入“万方数据一数字化期干:群”进入因特网提供信息服务。凡有不同意者.请另投它刊奉刊所付稿酬包含刊精内容上网服务报酬不再另付。“万方数据数字化期刊群是国家丸五”重点科技攻关两目。奉刊仝文内客按照统一格或制作.读者可上网查询测宽丰刊内容一并扯可拳刊《海峡药学》编辑部··维普资讯http:wwwcqvipcom

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