长期毒性

null长期毒性试验 长期毒性试验 目的意义 基本内容和要求 有关问题目的意义 目的意义 毒性剂量 安全范围 毒性反应: 性质、程度、量毒关系、产生时间，达峰时间, 持续时间及反复产生毒性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性 毒性反应靶器官 毒性反应是否可逆 基本内容和要求 ---- 动物基本内容和要求 ---- 动物二种动物，啮齿类首选大鼠，非啮齿类用犬(Ⅰ类药Beagle犬，其它杂种犬), 必要时用猴 动物应写明供应单位及邮编，品系及生产合格证号(杂种犬例外) 大鼠6-8周龄，体重差异不超过平均体重的20％。3个月以上可选5-6周龄大鼠 Beagle犬4-12月龄，杂种犬龄＜5年 ♂♀各半 基本内容和要求 ---- 饲养管理基本内容和要求 ---- 饲养管理饲料写明供应单位，自配应提供配方及成分含量的检测报告 动物室温度、湿度、光照和通风条件应达标 笼养大鼠每笼≤5只，♂♀分开，有条件时单笼饲养, 实验前适应≥1周, 食量每天 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 ，体重每周称一次。 犬宜单笼饲养，定量喂食，Beagle犬实验前至少训养1-2周， 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 饲料喂养。杂种犬要预先检疫、驱虫，实验前至少训养1月 基本内容和要求 ---- 受试药基本内容和要求 ---- 受试药写明药名、批号、来源、规格、纯度、理化特性、保存条件及配制方法。 溶媒或其他赋形剂注明规格、来源、纯度、批号 应符合临床试用质量标准，最好和药效、一般药理、急性毒性、药代动力学研究用药有相同质量标准 基本内容和要求 ---- 给药途径基本内容和要求 ---- 给药途径与临床给药途径一致 混入饲料或饮水中灌服时 保证受试药分布均匀 在配制饲料或溶于饮水后仍旧稳定 计量准确 临床iv 时大鼠可用ip代替，im或sc可变换注射部位基本内容和要求 ---- 剂量及分组基本内容和要求 ---- 剂量及分组三个给药组(大动物可二个组), 单位: mg(ml,IU) /kg 或 /m2 以不等浓度等容量给药 低剂量组--高于有效剂量，不出现毒性反应 中剂量组--产生轻微或中等度毒性反应 高剂量组--产生明显或严重的毒性反应，或个别动物死亡 空白对照--溶媒或其它赋形剂，若溶媒或赋形 剂有毒性时则增加正常对照组基本内容和要求 ---- 剂量及分组基本内容和要求 ---- 剂量及分组<3月，大鼠♂♀各10只/组 ≥3月，大鼠♂♀各20只/组 大动物大剂量组♂♀各3只 , 其余♂♀各2只/组 限度试验：如小鼠ig急毒> 5 g/Kg, iv > 2g/Kg仍无毒性反应和死亡或仅个别有毒性反应, 可只做一个>50ACD(犬用30ACD)的剂量组 基本内容和要求 ---- 给药周期基本内容和要求 ---- 给药周期　 表.　临床与动物给药对应周期 临床给药周期　　　动物给药周期 　　　　 1～3天 14天 1周 1月 4周 3月 ≥1月 6月 ≥3月可一周6天给药, 周日休息, 每天给药时间相同 基本内容和要求 ---- 检测指标 一般观察 基本内容和要求 ---- 检测指标 一般观察 外观体征和行为活动(NS兴奋或抑制，肌肉麻痹或震颤，步态异常等), 皮毛贴身或稀疏竖散, 粪便性状、颜色、食量及体重变化 大动物应增加瞳孔、肛温、呼吸、呕吐、流涎、尿、皮肤粘膜(充血、紫绀、苍白)、眼、鼻、外阴部分泌物等, 发现死亡或濒死动物应1小时内及时尸检基本内容和要求 ---- 检测指标 血液学指标 基本内容和要求 ---- 检测指标 血液学指标 红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、红细胞压积（Hct）、红细胞平均容积（MCV）、红细胞平均血红蛋白含量（MCH）、红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）、血小板（Plat）计数、白细胞（WBC）计数及分类（淋巴细胞和粒细胞）、凝血时间（CT），必要时进行网织红细胞计数基本内容和要求 ---- 检测指标 血液生化指标 基本内容和要求 ---- 检测指标 血液生化指标 丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（Tbill）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、血葡萄糖（Glu）、总胆固醇（Tch） 必要时增加相应的血液生化指标 大动物要做尿液检查: 亚硝酸盐、pH、蛋白质、尿RBC、葡萄糖、酮体、胆红素、尿胆原、尿比重、尿WBC 基本内容和要求 ---- 检测指标 病检器官 基本内容和要求 ---- 检测指标 病检器官 脏器系数：心、肝、脾、肺、肾、脑、肾上腺、甲状腺、胸腺、睾丸、前列腺和子宫 组织学检查：对照组和高剂量组要详细检查，其它剂量组在高剂量组有异常时才进行检查 检查器官: 心、肝、脾、肺、肾、脑、肾上腺、胰腺、胃、十二指肠、回肠、结肠、垂体、前列腺、脊髓、胸骨(骨和骨髓)、淋巴结、膀胱、甲状腺、胸腺、睾丸(连附睾)、子宫(连卵巢)、视神经、注射部位 基本内容和要求 ---- 检测指标 心电图Ⅱ导联基本内容和要求 ---- 检测指标 心电图Ⅱ导联大动物长期毒性必须做 主要观察指标：心率、P波电压、P-R间期、R波电压、QRS时间、ST段、T波电压和Q-T间期基本内容和要求 ---- 恢复期观察 基本内容和要求 ---- 恢复期观察 最后一次给药后24h每组活杀2/3～1/2, 检测各项指标，留1/3～1/2动物继续观察2～4周，再活杀检查,了解毒性反应的可逆程度和可能出现的迟发性毒性反应 恢复期除不给受试物外，其它观察内容与给药期相同 引起不可逆损伤者要慎重考虑临床试验问题 基本内容和要求 ---- 指标检测时间 基本内容和要求 ---- 指标检测时间 大鼠三个月以内，一般在最后一次给药后24h和恢复期结束各进行一次。必要时中间插一次；大鼠3个月以上, 可在试验中间活杀少量动物(高剂量组和对照组)检测指标 犬长毒试验则应有正常值2次，给药后1-1.5月测一次, 停药一次，恢复期结束一次 基本内容和要求 ---- 资料整理 基本内容和要求 ---- 资料整理 首页写明: 负责者的姓名、职称、实验开始及结束日期、实验承担单位、研究室负责人和资料保存单位 试验指导者、课题负责人、病理学检查、血液生化指标测定、血液学指标测定及给药观察者 第二页书写试验摘要 第三页开始写正文、引言、材料与方法、结果 合理的统计图、表 有差异的指标应进行统计处理 应客观地描述尸检及组织病理学检查结果 对各种异常现象可用半定量的方式表述，揭示量--时关系 有关问题---受试药 有关问题---受试药 Ⅰ类药 结构确证，工艺稳定，纯度>98.5％，稳定性试验基本完成且符合要求，至少是中试产品 非注射给药可用原料药，必要时加赋形对照 注射药或局部用药须做成稳定制剂，要有赋形对照，写清注射剂的pH和渗透压。赋形剂须是药用规格 Ⅱ类药 和国外药品有相同的质量标准。提供受试药的理化性质如溶解度、吸湿性、对光、热等稳定性、 含量、解离常数(pka)、油水分配系数等。符合临床试用质量标准 有关问题---动物 有关问题---动物 二种动物: 啮齿类，首选大鼠。非啮齿类，常用犬，一类新药用Beagle犬，其他可用杂种犬 , 基因工程生物制品用猴 常用大鼠: Wistar和Sprague Dewley株 年龄: 大鼠6-8周龄, 体重≤平均体重的20％, Beagle犬4～12月龄, 杂种犬<5年 试验周期≥6月, 应考虑到动物的自然死亡, 可以每组增加♂♀各一只, 大鼠一年死亡15％，一年半死亡50％，二年死亡达70～80％。大鼠和杂种犬都应多领购1/4～1/3有关问题---饲养管理有关问题---饲养管理有关问题---预试有关问题---预试不使实验重复的最好办法就是预试 预试依据 国外同类产品甚至是相同药物临床前及临床药理资料 急性毒性、药效学或药动学或拟推荐临床的剂量 预试时间一般2周至1个月 生物制品预试更重要，摸出产生抗体的规律，一旦产生抗体，立即终止试验，生殖毒性等反复给药均应考虑这一问题，一旦产生抗体，其实验继续进行下去的结果就与原来不同 有关问题---剂量 有关问题---剂量 LD50 法 大鼠　1/10、1/50、1/100 LD50，犬剂量减半 MTD法 大鼠　MTD、1/3MTD、1/10MTD, 犬剂量减半 MBS(Metabolic Body Size)法 大鼠　10 Cmax、5 Cmax、Cmax, 犬剂量减半 ACD法 大鼠3个月试验　 50～100ACD、30～50ACD、 10～20ACD 大鼠6个月试验　 30～ 50ACD、 15～25ACD、 5～10ACD 犬剂量减半有关问题---剂量有关问题---剂量表 常用动物等效剂量折算表 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 项 目 人 犬 猴 兔 豚鼠 大鼠 小鼠 ──────────────────────────────── 成年时体重(kg) 70 12 4 1.5 0.4 0.2 0.02 换算常数(k) 12.3 11.6 11.8 12 10.5 10.5 10 每公斤用药量折算(mg/kg) 1 1.5 2.2 3.1 4.3 5.4 11.0 体表面积折算等效剂量比 1 0.32 0.16 0.07 0.031 0.018 0.0026 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 有关问题---剂量有关问题---剂量由于溶解度(注射剂)关系, 剂量无法再增加时,应允许以最大可溶浓度和最大允许容量给药 一些腔道用药、血浆代用品的高剂量也应采用类似方法 防止犬与大鼠剂量倒置 必要时增加阳性对照组有关问题---分组 有关问题---分组 ♂♀分别随机分组 把体重过大、过小去掉，以免差异过大，开始实验时大鼠体重不应超过±20％ 大动物则根据给药前生理生化指标测定把指标过高或过低的动物去掉 有关问题---给药途径 有关问题---给药途径 与临床给药途径一致 注射剂要考虑溶液的pH、刺激性及渗透压等，以免造成注射局部损伤或坏死 大鼠iv长毒可改用ip注射，im或sc可采用多点交换注射 临床有用药后加上照光(血卟啉类＋激光)或X-照射(CM-Na光敏剂＋γ-射线)，动物上只给药没有其他条件，观察到的毒性较加照光后的毒性低 有关问题---给药途径有关问题---给药途径特殊情况下可改变给药途径 胆道给药溶解胆结石 肿瘤局部注射给药(肝瘤注射) 舌下给药 腔道给药(阴道、关节腔注射、硬膜或脊髓腔给药、滴耳药) 内病外治、穴位给药(肝脐贴药或其他穴位给药,)艾炙加中药 药酒治病、中药加烤电 雾化吸入 抗肝癌导向药物动脉注射 Vd可改用iv代替，反之则否有关问题---实验周期 有关问题---实验周期 西药---临床给药周期的3～4倍 中药---临床给药周期的2倍以上, 最长不过半年 对于生物技术药品长毒的试验周期, 不仅参考临床疗程, 还要考虑产生抗体的时间, 一旦产生抗体, 立即停止给药, 因为抗体产生后不仅中和血液中的药品, 而且可能产生变态反应而干扰药品生物学效应 有关问题---实验周期 有关问题---实验周期 实验周期<3月, 每天给药 实验周期≥3月, 每周六天给药, 周日休息, 不应每周给药5天 有关问题---指标选择 有关问题---指标选择 如何预测新药可能引起的毒性反应 从新药药效作用或其它药理作用特点推测 根据新药的化学结构从已知同类药物的毒性特点推测 从急毒和长毒预试结果预测可能的毒性反应，增加检测指标 据文献资料或临床预试产生的毒副反应来增加检测指标有关问题---指标选择有关问题---指标选择增加可疑组织或器官的负荷，可使损伤明显表现出来 外周血网织红细胞计数应受到重视 AST受标本溶血影响大 年轻大鼠ALP可比成熟大鼠高2-3倍，应强调组间对照 犬血尿素氮天热时升高，32℃以上可升高30-50% 免疫功能增强（感染）或自身免疫功能亢进时，球蛋白增高，相反则偏低 有关问题---指标选择有关问题---指标选择病理学检查称重时尽量剔除脂肪和结缔组织，尤其是肾上腺、甲状腺、前列腺等较小的组织器官 病理变化最好半定量：无病理变化(-)为0分, 可疑（±）为0.5分，轻度（＋）为１分，中度（++）为２分，重度（+++)为３分 病理检查一般可见灶性炎症、炎细胞浸润、灶性出血、瘀血及可疑细胞变性等均可能与药物无关，可因自身感染、宰杀方法等造成有关问题---测试方法 有关问题---测试方法 测试方法必须公认，有文献依据 新的测试方法要经同行专家认可 对于某一指标的不同测试方法，应交待清楚选择的理由 方法选择原则是简便、快速、灵敏、准确有关问题---测试次数 有关问题---测试次数 能反映动态变化 一般行为活动宜每天观察记录 食量宜每天称重 大鼠体重宜每周一次，按体重给药 其它生理指标每半月至１月一次 大动物心电图用II导联，至少给药前、给药期间、给药后及停药结束各测一次 发现有阳性指标应加大观察密度 有关问题---测试次数有关问题---测试次数大动物生化检测，给药前2次、给药期间１-２次，停药时及实验结束各1次，这样就可看出动态变化，并能了解是否可逆，不仅可以进行组间比较，也可进行自身对照 大鼠长毒未强调动态观察，只是指出必要时给药期可测一次，主要是因为生化指标较多，采血量大有关问题---停药观察 有关问题---停药观察 时间的长短取决于给药周期，一般可1/3 - 1/2给药周期，或2-6周 了解毒性反应在停药后能否恢复 观察有否迟发性毒性反应，特别是神经系统毒性反应 有关问题---数据处理 有关问题---数据处理 定量数据均用x ± s表示，用国际单位 不能只与对照组比较，给药组之间还要比较，以说明量--毒关系；大动物还要进行自身对照 正态分布，用t检验或方差 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 ，非正态分布，用非参数统计分析法（Ridit分析或秩和检验） P<0.05应具体分析有关问题---资料整理 有关问题---资料整理 原始资料应保存完好，我国 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 原始资料至少保存至生产后２年 长期毒性长期毒性确实做好预试 周密 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 剂量 精心饲养动物 细心观察反应 认真测定指标 实事求是总结