书书书
ICS1306030
Z 60
中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准
GB18466 2005
代替GB18466—2001
部分代替GB8978—1996
医疗机构水污染物排放
标准
excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载
Dischargestandardofwaterpollutantsformedicalorganization
2005 07 27发布 2006 01 01实施
国 家 环 境 保 护 总 局
国家质量监督检验检疫总局
发 布
GB 18466—2005
中 华 人 民 共 和 国
国 家 标 准
医疗机构水污染物排放标准
GB18466—2005
中国环境科学出版社出版发行
(100062 北京崇文区广渠门内大街16号)
网址:http://wwwcespcn
电子信箱:bianji4@cespcn
电话:010—67112738 传真:010—67112738
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版权专有 违者必究
2005年9月第 1 版 开本 880×1230 1/16
2005年9月第1次印刷 印张 225
印数 1—4000 字数 75千字
统一书号:1380209028
定价:2400元
书书书
ⅰ
国家环境保护总局
公 告
2005年 第35号
为贯彻 《中华人民共和国环境保护法》,加强对医疗机构污水、污水处理站废气、污泥排放的控
制和管理,预防和控制传染病的发生和流行,保障人体健康,加强环境管理,现批准 《医疗机构水
污染物排放标准》为国家污染物排放标准,并由我局和国家质量监督检验检疫总局联合发布。
标准编号、名称如下:
GB18466—2005 医疗机构水污染物排放标准
本标准自实施之日起,代替 《污水综合排放标准》(GB8978—1996)中有关医疗机构水污染物
排放标准部分,并取代 《医疗机构污水排放要求》(GB18466—2001)。
上述标准为强制性标准,由中国环境科学出版社出版,自2006年1月1日起实施。
标准信息可在国家环境保护总局网站(www.sepa.gov.cn)和中国环境标准网站(www.es.org.cn)
上查询。
特此公告。
2005年7月27日
书书书
GB 18466 2005
ⅲ
目 次
前言 ⅳ!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
1 范围 1
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2
规范
编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载
性引用文件 1
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3 术语和定义 1
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4 技术
内容
财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容
1
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41 污水排放要求 1
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42 废气排放要求 4
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43 污泥控制与处置 4
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5 处理工艺与消毒要求 4
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6 取样与监测 5
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
61 污水取样与监测 5
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
62 大气取样与监测 6
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
63 污泥取样与监测 6
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
7 标准的实施与监督 7
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附录A(规范性附录) 医疗机构污水和污泥中粪大肠菌群的检验方法 8
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附录B(规范性附录) 医疗机构污水和污泥中沙门氏菌的检验方法 15
!!!!!!!!!!!!
附录C(规范性附录) 医疗机构污水及污泥中志贺氏菌的检验方法 19
!!!!!!!!!!!!
附录D(标准的附录) 医疗机构污泥中蛔虫卵的检验方法 22
!!!!!!!!!!!!!!!!
附录E(规范性附录) 医疗机构污水和污泥中结核杆菌的检验方法 24
!!!!!!!!!!!!
附录F(规范性附录) 医疗机构污水污染物 (COD、BOD、SS)单位排放负荷计算方法 27
!!!
GB 18466 2005
ⅳ
前 言
为贯彻 《中华人民共和国环境保护法》、《中华人民共和国水污染防治法》、《中华人民共和国海
洋环境保护法》、《中华人民共和国大气污染防治法》、《中华人民共和国传染病防治法》,加强对医
疗机构污水、污水处理站废气、污泥排放的控制和管理,预防和控制传染病的发生和流行,保障人
体健康,维护良好的生态环境,制定本标准。
本标准规定了医疗机构污水及污水处理站产生的废气和污泥的污染物控制项目及其排放限值、
处理工艺与消毒要求、取样与监测和标准的实施与监督等。
本标准自实施之日起,代替GB8978—1996《污水综合排放标准》中有关医疗机构水污染物排
放标准部分,并取代GB18466—2001《医疗机构污水排放要求》。新、扩、改医疗机构自本标准实
施之日起按本标准实施管理,现有医疗机构在2007年12月31日前达到本标准要求。
本标准的附录A、附录B、附录C、附录D、附录E和附录F为规范性附录。
本标准为首次发布。
本标准由国家环境保护总局科技标准司提出并归口。
本标准委托北京市环境保护科学研究院和中国疾病预防控制中心起草。
本标准由国家环境保护总局2005年7月27日批准。
本标准2006年1月1日起实施。
本标准由国家环境保护总局负责解释。
书书书
GB 18466 2005
医疗机构水污染物排放标准
1 范围
本标准规定了医疗机构污水、污水处理站产生的废气、污泥的污染物控制项目及其排放和控制
限值、处理工艺和消毒要求、取样与监测和标准的实施与监督。
本标准适用于医疗机构污水、污水处理站产生污泥及废气排放的控制,医疗机构建设项目的环
境影响评价、环境保护设施设计、竣工验收及验收后的排放管理。当医疗机构的办公区、非医疗生
活区等污水与病区污水合流收集时,其综合污水排放均执行本标准。建有分流污水收集系统的医疗
机构,其非病区生活区污水排放执行GB8978的相关规定。
2 规范性引用文件
下列标准和本标准
表
关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf
5、表6所列分析方法标准及规范所含条文在本标准中被引用即构成为本标
准的条文,与本标准同效。当上述标准和规范被修订时,应使用其最新版本。
GB8978 污水综合排放标准
GB3838 地表水环境质量标准
GB3097 海水水质标准
GB16297 大气污染物综合排放标准
HJ/T55 大气污染物无组织排放监测技术导则
HJ/T91 地表水和污水检测技术规范
3 术语和定义
本标准采用下列定义。
31 医疗机构 medicalorganization
指从事疾病诊断、治疗活动的医院、卫生院、疗养院、门诊部、诊所、卫生急救站等。
32 医疗机构污水 medicalorganizationwastewater
指医疗机构门诊、病房、手术室、各类检验室、病理解剖室、放射室、洗衣房、太平间等处
排出的诊疗、生活及粪便污水。当医疗机构其他污水与上述污水混合排出时一律视为医疗机构污
水。
33 污泥 sludge
指医疗机构污水处理过程中产生的栅渣、沉淀污泥和化粪池污泥。
34 废气 wastegas
指医疗机构污水处理过程中产生的有害气体。
4 技术内容
41 污水排放要求
411 传染病和结核病医疗机构污水排放一律执行表1的规定。
412 县级及县级以上或20张床位及以上的综合医疗机构和其他医疗机构污水排放执行表2的规
定。直接或间接排入地表水体和海域的污水执行排放标准,排入终端已建有正常运行城镇二级污水
处理厂的下水道的污水,执行预处理标准。
1
GB 18466 2005
表1 传染病、结核病医疗机构水污染物排放限值 (日均值)
序号 控 制 项 目 标 准 值
1 粪大肠菌群数/(MPN/L) 100
2 肠道致病菌 不得检出
3 肠道病毒 不得检出
4 结核杆菌 不得检出
5 pH 6~9
6
化学需氧量 (COD)
浓度/(mg/L)
最高允许排放负荷/[g/(床位·d)]
60
60
7
生化需氧量 (BOD)
浓度/(mg/L)
最高允许排放负荷/[g/(床位·d)]
20
20
8
悬浮物 (SS)
浓度/(mg/L)
最高允许排放负荷 [g/(床位·d)]
20
20
9 氨氮/(mg/L) 15
10 动植物油/(mg/L) 5
11 石油类/(mg/L) 5
12 阴离子表面活性剂/(mg/L) 5
13 色度/(稀释倍数) 30
14 挥发酚/(mg/L) 05
15 总氰化物/(mg/L) 05
16 总汞/(mg/L) 005
17 总镉/(mg/L) 01
18 总铬/(mg/L) 15
19 六价铬/(mg/L) 05
20 总砷/(mg/L) 05
21 总铅/(mg/L) 10
22 总银/(mg/L) 05
23 总α/(Bq/L) 1
24 总β/(Bq/L) 10
25
总余氯1),2)/(mg/L)
(直接排入水体的要求)
05
注:1)采用含氯消毒剂消毒的工艺控制要求为:消毒接触池的接触时间≥15h,接触池出口总余氯65~10mg/L。
2)采用其他消毒剂对总余氯不做要求。
2
GB 18466 2005
表2 综合医疗机构和其他医疗机构水污染物排放限值 (日均值)
序号 控 制 项 目 排放标准 预处理标准
1 粪大肠菌群数/(MPN/L) 500 5000
2 肠道致病菌 不得检出 —
3 肠道病毒 不得检出 —
4 pH 6~9 6~9
5
化学需氧量 (COD)
浓度/(mg/L)
最高允许排放负荷/[g/(床位·d)]
60
60
250
250
6
生化需氧量 (BOD)
浓度/(mg/L)
最高允许排放负荷/[g/(床位·d)]
20
20
100
100
7
悬浮物 (SS)
浓度/(mg/L)
最高允许排放负荷/[g/(床位·d)]
20
20
60
60
8 氨氮/(mg/L) 15 —
9 动植物油/(mg/L) 5 20
10 石油类/(mg/L) 5 20
11 阴离子表面活性剂/(mg/L) 5 10
12 色度/(稀释倍数) 30 —
13 挥发酚/(mg/L) 05 10
14 总氰化物/(mg/L) 05 05
15 总汞/(mg/L) 005 005
16 总镉/(mg/L) 01 01
17 总铬/(mg/L) 15 15
18 六价铬/(mg/L) 05 05
19 总砷/(mg/L) 05 05
20 总铅/(mg/L) 10 10
21 总银/(mg/L) 05 05
22 总α/(Bq/L) 1 1
23 总β/(Bq/L) 10 10
24 总余氯1),2)/(mg/L) 05 —
注:1)采用含氯消毒剂消毒的工艺控制要求为:
排放标准:消毒接触池接触时间≥1h,接触池出口总余氯3~10mg/L。
预处理标准:消毒接触池接触时间≥1h,接触池出口总余氯2~8mg/L。
2)采用其他消毒剂对总余氯不做要求。
413 县级以下或20张床位以下的综合医疗机构和其他所有医疗机构污水经消毒处理后方可排放。
414 禁止向GB3838Ⅰ、Ⅱ类水域和Ⅲ类水域的饮用水保护区和游泳区,GB3097一、二类海域
直接排放医疗机构污水。
3
GB 18466 2005
415 带传染病房的综合医疗机构,应将传染病房污水与非传染病房污水分开。传染病房的污水、
粪便经过消毒后方可与其他污水合并处理。
416 采用含氯消毒剂进行消毒的医疗机构污水,若直接排入地表水体和海域,应进行脱氯处理,
使总余氯小于05mg/L。
42 废气排放要求
421 污水处理站排出的废气应进行除臭除味处理,保证污水处理站周边空气中污染物达到表3要
求。
表3 污水处理站周边大气污染物最高允许浓度
序号 控 制 项 目 标 准 值
1 氨/(mg/m3) 10
2 硫化氢/(mg/m3) 003
3 臭气浓度 (无量纲) 10
4 氯气/(mg/m3) 01
5 甲烷 (指处理站内最高体积百分数/%) 1
422 传染病和结核病医疗机构应对污水处理站排出的废气进行消毒处理。
43 污泥控制与处置
431 栅渣、化粪池和污水处理站污泥属危险废物,应按危险废物进行处理和处置。
432 污泥清掏前应进行监测,达到表4要求。
表4 医疗机构污泥控制标准
医疗机构类别
粪大肠菌群数/
(MPN/g)
肠道致病菌 肠道病毒 结核杆菌
蛔虫卵死亡率/
%
传染病医疗机构 ≤100 不得检出 不得检出 — >95
结核病医疗机构 ≤100 — — 不得检出 >95
综合医疗机构和其他医疗机构 ≤100 — — — >95
5 处理工艺与消毒要求
51 医疗机构病区和非病区的污水,传染病区和非传染病区的污水应分流,不得将固体传染性废
物、各种化学废液弃置和倾倒排入下水道。
52 传染病医疗机构和综合医疗机构的传染病房应设专用化粪池,收集经消毒处理后的粪便排泄物
等传染性废物。
53 化粪池应按最高日排水量设计,停留时间为24~36h。清掏周期为180~360d。
54 医疗机构的各种特殊排水应单独收集并进行处理后,再排入医院污水处理站。
541 低放射性废水应经衰变池处理。
542 洗相室废液应回收银,并对废液进行处理。
543 口腔科含汞废水应进行除汞处理。
544 检验室废水应根据使用化学品的性质单独收集,单独处理。
545 含油废水应设置隔油池处理。
55 传染病医疗机构和结核病医疗机构污水处理宜采用二级处理 +消毒工艺或深度处理 +消毒工
艺。
56 综合医疗机构污水排放执行排放标准时,宜采用二级处理 +消毒工艺或深度处理 +消毒工艺;
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GB 18466 2005
执行预处理标准时宜采用一级处理或一级强化处理+消毒工艺。
57 消毒剂应根据技术经济分析选用,通常使用的有:二氧化氯、次氯酸钠、液氯、紫外线和臭氧
等。采用含氯消毒剂时按表1、表2要求设计。
571 采用紫外线消毒,污水悬浮物浓度应小于10mg/L,照射剂量30~40mJ/cm2,照射接触时
间应大于10s或由试验确定。
572 采用臭氧消毒,污水悬浮物浓度应小于20mg/L,臭氧用量应大于10mg/L,接触时间应大
于12min或由试验确定。
6 取样与监测
61 污水取样与监测
611 应按规定设置科室处理设施排出口和单位污水外排口,并设置排放口标志。
612 表1第16~22项,表2第15~21项在科室处理设施排出口取样,总α、总β在衰变池出口
取样监测。其他污染物的采样点一律设在排污单位的外排口。
612 医疗机构污水外排口处应设污水计量装置,并宜设污水比例采样器和在线监测设备。
613 监测频率
6131 粪大肠菌群数每月监测不得少于1次。采用含氯消毒剂消毒时,接触池出口总余氯每日监
测不得少于2次 (采用间歇式消毒处理的,每次排放前监测)。
6132 肠道致病菌主要监测沙门氏菌、志贺氏菌。沙门氏菌的监测,每季度不少于1次;志贺氏
菌的监测,每年不少于2次。其他致病菌和肠道病毒按6133规定进行监测。结核病医疗机构根据
需要监测结核杆菌。
6133 收治了传染病病人的医院应加强对肠道致病菌和肠道病毒的监测。同时收治的感染上同一
种肠道致病菌或肠道病毒的甲类传染病病人数超过5人、或乙类传染病病人数超过10人、或丙类传
染病病人数超过20人时,应及时监测该种传染病病原体。
6134 理化指标监测频率:pH每日监测不少于2次,COD和SS每周监测1次,其他污染物每季
度监测不少于1次。
6135 采样频率:每4小时采样1次,一日至少采样3次,测定结果以日均值计。
614 监督性监测按HJ/T91执行。
615 监测分析方法按表5和附录执行。
616 污染物单位排放负荷计算见附录F。
表5 水污染物监测分析方法
序号 控制项目 测 定 方 法 测定下限/(mg/L) 方法来源
1 粪大肠菌群数 多管发酵法 附录A
2 沙门氏菌 附录B
3 志贺氏菌 附录C
4 结核杆菌 附录E
5 总余氯
N,N-二乙基-1,4-苯二胺分光光度法
N,N-二乙基-1,4-苯二胺滴定法
GB11898
GB11897
6 化学需氧量 (COD) 重铬酸盐法 30 GB11914
7 生化需氧量 (BOD) 稀释与接种法 2 GB7488
8 悬浮物 (SS) 重量法 GB11901
9 氨氮
蒸馏和滴定法
比色法
02
005
GB7478
GB7479
5
GB 18466 2005
续表
序号 控制项目 测 定 方 法 测定下限/(mg/L) 方法来源
10 动植物油 红外光度法 01 GB/T16488
11 石油类 红外光度法 01 GB/T16488
12 阴离子表面活性剂 亚甲蓝分光光度法 005 GB7494
13 色度 稀释倍数法 GB11903
14 pH值 玻璃电极法 GB6920
15 总汞
冷吸收分光光度法
双硫腙分光光度法
00001
0002
GB7468
GB7469
16 挥发酚 蒸馏后4-氨基安替比林分光光度法 0002 GB7490
硝酸银滴定法 025 GB7486
17 总氰化物 异烟酸-吡唑啉酮比色法 0004 GB7486
吡啶-巴比妥酸比色法 0002 GB7486
18 总镉
原子吸收分光光度法 (螯合萃取法)
双硫腙分光光度法
0001
0001
GB7475
GB7471
19 总铬 高锰酸钾氧化-二苯碳酰二肼分光光度法 0004 GB7466
20 六价铬 二苯碳酰二肼分光光度法 0004 GB7467
21 总砷 二乙基二硫代氨基甲酸银分光光度法 0007 GB7485
22 总铅
原子吸收分光光度法 (螯合萃取法)
双硫腙分光光度法
001
001
GB7475
GB7470
23 总银
原子吸收分光光度法
镉试剂2B分光光度法
003
001
GB/T155552
GB11908
24 总α 厚源法 005Bq/L EJ/T1075
25 总β 蒸发法 EJ/T900
62 大气取样与监测
621 污水处理站大气监测点的布置方法与采样方法按GB16297中附录 C和 HJ/T55的有关规定
执行。
622 采样频率,每2小时采样一次,共采集4次,取其最大测定值。每季度监测一次。
623 监测分析方法按表6执行。
表6 大气污染物监测分析方法
序号 控 制 项 目 测 定 方 法 方法来源
1 氨 次氯酸钠-水杨酸分光光度法 GB/T14679
2 硫化氢 气相色谱法 GB/T14678
3 臭气浓度 (无量纲) 三点比较式臭袋法 GB/T14675
4 氯气 甲基橙分光光度法 HJ/T30
5 甲烷 气相色谱法 CJ/T3037
63 污泥取样与监测
631 取样方法,采用多点取样,样品应有代表性,样品重量不小于1kg。清掏前监测。
6
GB 18466 2005
632 监测分析方法见附录A、附录B、附录C、附录D和附录E。
7 标准的实施与监督
71 本标准由县级以上人民政府环境保护行政主管部门负责监督实施。
72 省、自治区、直辖市人民政府对执行本标准不能达到本地区环境功能要求时,可以根据总量控
制要求和环境影响评价结果制定严于本标准的地方污染物排放标准。
7
GB 18466 2005
附 录 A
(规范性附录)
医疗机构污水和污泥中粪大肠菌群的检验方法
A1 仪器和设备
A11 高压蒸汽灭菌器。
A12 干燥灭菌箱。
A13 培养箱:37℃。
A14 恒温水浴箱。
A15 电炉。
A16 天平。
A17 灭菌平皿。
A18 灭菌刻度吸管。
A19 酒精灯
A2 培养基和试剂
A21 乳糖胆盐培养液
A211 成分
蛋白胨 20g
猪胆盐 (或牛、羊胆盐) 5g
乳糖 5g
04%溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸馏水 1000ml
A212 制法
将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于1000ml蒸馏水中,调整 pH到74,加入指示剂,充分混匀,
分装于内有倒管的试管中。115℃灭菌20min。贮存于冷暗处备用。
A22 三倍浓度乳糖胆盐培养液
A221 成分
蛋白胨 60g
猪胆盐 (或牛、羊胆盐) 15g
乳糖 15g
04%溴甲酚紫水溶液 75ml
蒸馏水 1000ml
A222 制法
制法同附录A212。
A23 伊红亚甲基蓝培养基 (EMB培养基)
A231 成分
蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氢二钾 2g
琼脂 20g
8
GB 18466 2005
2%伊红水溶液 20ml
05%美蓝水溶液 13ml
蒸馏水 1000ml
A232 制法
将琼脂加到900ml蒸馏水中,加热溶解,然后加入磷酸氢二钾和蛋白胨,混匀使溶解,再加入
蒸馏水补足至1000ml,调整pH至72~74。趁热用脱脂棉和砂布过滤,再加入乳糖,混匀,定量
分装于烧瓶内,115℃灭菌20min,作为储备培养基贮存于冷暗处备用。
临用时,加热融化储备培养基,待冷至60℃左右,根据烧瓶内培养基的容量,加入一定量的已
灭菌的2%伊红水溶液和05%美蓝水溶液,充分摇匀 (防止产生气泡),倾注平皿备用。
A24 乳糖蛋白胨培养液
A241 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
乳糖 5g
氯化钠 5g
16%溴甲酚紫乙醇溶液 1ml
蒸馏水 1000ml
A242 制法
将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解于1000ml蒸馏水中,调整 pH到72~74,加入
16%溴甲酚紫乙醇溶液1ml,充分混匀,分装于内有倒管的试管中。115℃灭菌20min。贮存于冷
暗处备用。
A25 革兰氏染色液
A251 结晶紫染色液
结晶紫 1g
95%乙醇溶液 20ml
1%草酸铵水溶液 1000ml
将结晶紫溶于乙醇中,然后与草酸铵水溶液混合。
A252 革兰氏碘液
碘 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300ml
将碘与碘化钾混合,加入蒸馏水少许,充分摇匀,待完全溶解,再加入蒸馏水至300ml。
A253 脱色液
95%乙醇。
A254 沙黄复染液
沙黄 1g
95%乙醇 2g
蒸馏水 90ml
将沙黄溶于95%乙醇中,然后用蒸馏水稀释。
A26 染色法
染色的基本步骤为:1)涂片:在载玻片上滴加一滴生理盐水,用灭菌的接种环取菌落少许,与
生理盐水混匀,涂布成薄膜;2)干燥:在室温中使自然干燥;3)固定:将涂片迅速通过火焰2~3
次,以载玻片反面接触皮肤,热而不烫为度;4)染色:滴加结晶紫染色液,染色1min,水洗;5)
9
GB 18466 2005
媒染:滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗;6)脱色:滴加95%乙醇脱色,约30s,水洗;7)复
染:滴加复染液,复染1min,水洗。
革兰氏阳性菌染色后呈紫色,革兰氏阴性菌染色后呈红色。
注:亦可用1∶10稀释的石炭酸复红染色液做复染剂,复染时间为10s。
A3 检验程序
检验程序见图A1。
样品处理:确定样品接种量
发酵试验:
↓
将样品接种于乳糖胆盐培养液
44℃、培养24h
平板分离:将产酸发酵管液接种于
↓
EMB
37℃、培养18~24h
鉴定:挑取可疑菌落革兰氏染色、
↓
镜检
鉴定:
↓
挑取革兰氏阴性无芽孢杆菌接种于乳糖蛋白胨培养液
44℃、培养24h
计数:根据产酸产气的阳性管数查MPN
↓
表
↓
检验结果
报告
软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载
图A1 污水、污泥中粪大肠菌群检验程序
A4 操作步骤
A41 样品准备
A411 污水
污水样品应至少取200ml,使用前应充分混匀。
根据预计的污水样品中粪大肠菌群数确定污水样品接种量。粪大肠菌群数量相对较少的接种量
一般为10、1、01ml。粪大肠菌群数较多时接种量为1、01、001ml或01、001、0001ml等。
接种量少于1ml时,水样应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量为01、001ml时,取稀
释比分别为1∶10、1∶100。其他接种量的稀释比依此类推。
1∶10稀释样品的制作方法为:吸取1ml水样,注入到盛有9ml灭菌水的试管中,混匀,制成
1∶10稀释样品。因此,取1ml1∶10稀释样品,等于取01ml污水样品。其他稀释比的稀释样品
同法制作。
注1:若样品为经过氯消毒的污水,应在采样后立即用5%硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。
A412 污泥
污泥样品应至少取200g,使用前应充分混匀。
根据预计的污泥样品中粪大肠菌群数量确定污泥样品接种量。粪大肠菌群数量相对较少的污泥
样品接种量一般为01、001、0001g。粪大肠菌群数量较多时接种量为001、0001、00001g或
0001、00001、000001g等。
污泥样品应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量01、001、0001g的稀释样品制作方法
如下:取20g污泥样品,加入到三角烧瓶中,加灭菌水使成200ml,混匀,制成1∶10稀释样品。
吸取1∶10稀释样品1ml,注入到盛有9ml灭菌水的试管中,混匀,制成1∶100稀释样品。按同法
制成1∶1000稀释样品。接种1ml1∶10、1∶100、1∶1000稀释样品等于接种01、001、0001g
污泥样品。
注1:若样品为经过氯消毒的污泥,应在采样后立即用5%硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。
01
GB 18466 2005
A42 发酵试验
将样品接种于装有乳糖胆盐培养液的试管 (内有小倒管)中,44℃培养24h。样品接种体积以
及管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积根据以下条件确定:
样品为污水时,取三个接种量,每个接种量的样品分别接种于5个试管内,共需15个试管。试
管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积应根据接种量确定。若接种量为10ml,吸取10ml样品接种于装
有5ml三倍浓度乳糖胆盐培养液的试管内;若接种量为1ml时,吸取1ml样品接种于装有10ml普
通浓度乳糖胆盐培养液的试管内;若接种量少于1ml时,吸取1ml稀释样品接种于装有10ml普通
浓度乳糖胆盐培养液的试管内。
样品为污泥时,取三个接种量,每个接种量的稀释样品分别接种于3个试管内,共需9个试管。
9个试管中,各装有10ml乳糖胆盐培养液。各个试管接种稀释样品体积均为1ml。
A43 平板分离
大肠杆菌分解乳糖产酸时培养液变色、产气时小倒管内出现气泡。经24h培养后,将产酸的试
管内培养液分别划线接种于EMB培养基上。置于37℃培养箱中,培养18~24h。
A44 鉴定
挑选可疑粪大肠菌群菌落,进行革兰氏染色和镜检。可疑菌落有:1)深紫黑色,具有金属光泽
的菌落;2)紫黑色,不带或略带金屑光泽的菌落;3)淡紫红色,中心色较深的菌落。
上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢杆菌,则挑取上述典型菌落1~3个接种于盛有5ml
乳糖蛋白胨培养液倒管和倒管的试管内,置于44℃培养箱中培养24h。产酸产气试管为粪大肠菌群
阳性管。
A5 计数
根据证实有粪大肠菌群存在的阳性管数,查表A1或A2可得100ml污水或1g污泥中粪大肠
菌群MPN值。
由于表A1和表A2是按一定的三个10倍浓度差接种量设计的 (污水接种量为10、1和01
ml,污泥接种量为01、001和0001g),当采用其他三个10倍浓度差接种量时,需要修正表内
MPN值,具体方法如下:
表内所列污水 (污泥)最大接种量增加10倍时表内MPN值相应降低10倍;污水 (污泥)最大
接种量减少10倍时表内MPN值相应增加10倍。如污水接种量改为1、01和001ml时,表A1内
MPN值相应增加10倍。其他的三个10倍浓度差接种量的MPN值相应类推。
由于表A1内MPN值的单位为每100ml污水样品中MPN值,而污水以1L为报告单位,因此,
需将查表A1得到的MPN值乘上10,换算成1L污水样品中的MPN值。
表A1 污水中粪大肠菌群最可能数 (MPN)检索表
(污水样品接种量为5份10ml水样,5份1ml水样和5份01ml水样)
阳性管数
接种
100ml
水样
接种
10ml
水样
接种
01ml
水样
每
100ml
水样中
MPN
阳性管数
接种
100ml
水样
接种
10ml
水样
接种
01ml
水样
每
100ml
水样中
MPN
阳性管数
接种
100ml
水样
接种
10ml
水样
接种
01ml
水样
每
100ml
水样中
MPN
0 0 0 0 2 0 0 5 4 0 0 13
0 0 1 2 2 0 1 7 4 0 1 17
0 0 2 4 2 0 2 9 4 0 2 21
0 0 3 5 2 0 3 12 4 0 3 25
0 0 4 7 2 0 4 14 4 0 4 30
11
GB 18466 2005
0 0 5 9 2 0 5 16 4 0 5 36
续表
阳性管数
接种
100ml
水样
接种
10ml
水样
接种
01ml
水样
每
100ml
水样中
MPN
阳性管数
接种
100ml
水样
接种
10ml
水样
接种
01ml
水样
每
100ml
水样中
MPN
阳性管数
接种
100ml
水样
接种
10ml
水样
接种
01ml
水样
每
100ml
水样中
MPN
0 1 0 2 2 1 0 7 4 1 0 17
0 1 1 4 2 1 1 9 4 1 1 21
0 1 2 6 2 1 2 12 4 1 2 26
0 1 3 7 2 1 3 14 1 1 3 31
0 1 4 9 2 1 4 17 4 1 4 36
0 1 5 11 2 1 5 19 4 1 5 42
0 2 0 4 2 2 0 9 4 2 0 22
0 2 1 6 2 2 1 12 4 2 1 26
0 2 2 7 2 2 2 14 4 2 2 32
0 2 3 9 2 2 3 17 4 2 3 38
0 2 4 11 2 2 4 19 4 2 4 44
0 2 5 13 2 2 5 22 4 2 5 50
0 3 0 6 2 3 0 12 4 3 0 27
0 3 1 7 2 3 1 14 4 3 1 33
0 3 2 9 2 3 2 17 4 3 2 39
0 3 3 11 2 3 3 20 4 3 3 45
0 3 4 13 2 3 4 22 4 3 4 52
0 3 5 15 2 3 5 25 4 3 5 59
0 4 0 8 2 4 0 15 4 4 0 34
0 4 1 9 2 4 1 17 4 4 1 40
0 4 2 11 2 4 2 20 4 4 2 47
0 4 3 13 2 4 3 23 4 4 3 54
0 4 4 15 2 4 4 25 4 4 4 62
0 4 5 17 2 4 5 28 4 4 5 69
0 5 0 9 2 5 0 17 4 5 0 41
0 5 1 11 2 5 1 20 4 5 1 48
0 5 2 13 2 5 2 23 4 5 2 56
0 5 3 15 2 5 3 26 4 5 3 64
0 5 4 17 2 5 4 29 4 5 4 72
0 5 5 19 2 5 5 32 4 5 5 81
1 0 0 2 3 0 0 8 5 0 0 23
1 0 1 4 3 0 1 11 5 0 1 31
1 0 2 6 3 0 2 13 5 0 2 43
1 0 3 8 3 0 3 16 5 0 3 58
1 0 4 10 3 0 4 20 5 0 4 76
1 0 5 12 3 0 5 23 5 0 5 95
21
GB 18466 2005
续表
阳性管数
接种
100ml
水样
接种
10ml
水样
接种
01ml
水样
每
100ml
水样中
MPN
阳性管数
接种
100ml
水样
接种
10ml
水样
接种
01ml
水样
每
100ml
水样中
MPN
阳性管数
接种
100ml
水样
接种
10ml
水样
接种
01ml
水样
每
100ml
水样中
MPN
1 1 0 4 3 1 0 11 5 1 0 33
1 1 1 6 3 1 1 14 5 1 1 46
1 1 2 8 3 1 2 17 5 1 2 63
1 1 3 10 3 1 3 20 5 1 3 84
1 1 4 12 3 1 4 23 5 1 4 110
1 1 5 14 3 1 5 27 5 1 5 130
1 2 0 6 3 2 0 14 5 2 0 49
1 2 1 8 3 2 1 17 5 2 1 70
1 2 2 10 3 2 2 20 5 2 2 94
1 2 3 12 3 2 3 24 5 2 3 120
1 2 4 15 3 2 4 27 5 2 4 150
1 2 5 17 3 2 5 31 5 2 5 180
1 3 0 8 3 3 0 17 5 3 0 79
1 3 1 10 3 3 1 21 5 3 1 110
1 3 2 12 3 3 2 24 5 3 2 140
1 3 3 15 3 3 3 28 5 3 3 180
1 3 4 17 3 3 4 32 5 3 4 210
1 3 5 19 3 3 5 36 5 3 5 250
1 4 0 11 3 4 0 21 5 4 0 130
1 4 1 13 3 4 1 24 5 4 1 170
1 4 2 15 3 4 2 28 5 4 2 220
1 4 3 17 3 4 3 32 5 4 3 280
1 4 4 19 3 4 4 36 5 4 4 350
1 4 5 22 3 4 5 40 5 4 5 430
1 5 0 13 3 5 0 25 5 5 0 240
1 5 1 15 3 5 1 29 5 5 1 350
1 5 2 17 3 5 2 32 5 5 2 540
1 5 3 19 3 5 3 37 5 5 3 920
1 5 4 22 3 5 4 41 5 5 4 1600
1 5 5 24 3 5 5 45 5 5 5 >1600
31
GB 18466 2005
表A2 污泥中粪大肠菌群最可能数 (MPN)检索表
(污泥样品接种量为3份01g泥样,3份001g泥样和3份0001g泥样)
阳性管数
接种
01g
污样管
接种
001g
污样管
接种
0001g
污样管
每1g
泥样中
MPN
阳性管数
接种
01g
污样管
接种
001g
污样管
接种
0001g
污样管
每1g
泥样中
MPN
阳性管数
接种
01g
污样管
接种
001g
污样管
接种
0001g
污样管
每1g
泥样中
MPN
0 0 0 <3 1 2 0 11 3 0 0 23
0 0 1 3 1 2 1 15 3 0 1 39
0 0 2 6 1 2 2 20 3 0 2 64
0 0 3 9 1 2 3 24 3 0 3 95
0 1 0 3 1 3 0 16 3 1 0 43
0 1 1 61 1 3 1 20 3 1 1 75
0 1 2 92 1 3 2 24 3 1 2 120
0 1 3 12 1 3 3 29 3 1 3 160
0 2 0 62 2 0 0 91 3 2 0 93
0 2 1 93 2 0 1 14 3 2 1 150
0 2 2 12 2 0 2 20 3 2 2 210
0 2 3 16 2 0 3 26 3 2 3 290
0 3 0 94 2 1 0 15 3 3 0 240
0 3 1 13 2 1 1 20 3 3 1 460
0 3 2 16 2 1 2 27 3 3 2 1100
0 3 3 19 2 1 3 34 3 3 3 >1100
1 0 0 36 2 2 0 21
1 0 1 72 2 2 1 28
1 0 2 11 2 2 2 35
1 0 3 15 2 2 3 42
1 1 0 73 2 3 0 29
1 1 1 11 2 3 1 36
1 1 2 15 2 3 2 44
1 1 3 19 2 3 3 53
A6 检验结果报告
根据粪大肠菌群MPN值,报告1L污水或1g污泥样品中粪大肠菌群MPN值。
41
GB 18466 2005
附 录 B
(规范性附录)
医疗机构污水和污泥中沙门氏菌的检验方法
B1 仪器和设备
B11 高压蒸汽灭菌器。
B12 干燥灭菌箱。
B13 培养箱。
B14 恒温水浴箱。
B15 电炉。
B16 天平。
B17 灭菌平皿。
B18 灭菌刻度吸管。
B19 酒精灯。
B2 培养基和试剂
B21 亚硒酸盐增菌液 (SF增菌液)
B211 成分
胰蛋白胨 (或多价胨) 10g
磷酸氢二钠 (Na2HPO3) 16g
磷酸二氢钠 (NaH2PO3) 25g
乳糖 4g
亚硒酸氢钠 4g
蒸馏水 1000ml
B212 制法
除亚硒酸氢钠外,将以上各成分放入蒸馏水中,加热溶化。再加入亚硒酸氢钠,待完全溶解后,
调整pH到70~71,分装于三角烧杯内。121℃灭菌15min备用。
B22 二倍浓度亚硒酸盐增菌液 (二倍浓度SF增菌液)
B221 成分
除蒸馏水改为500ml外,其他成分同附录B211。
B222 制法
制法同附录B212。
B23 SS培养基
B231 基础培养基
B2311 成分
牛肉膏 5g
示胨 5g
三号胆盐 35g
琼脂 17g
蒸馏水 1000ml
B2312 制法
51
GB 18466 2005
将牛肉膏、示胨和胆盐溶解于400ml蒸馏水中。将琼脂加到600ml蒸馏水中,煮沸使其溶解。
再将二者混合,121℃灭菌15min,保存备用。
B232 完成培养基
B2321 成分
基础培养基 1000ml
乳糖 10g
柠檬酸钠 85g
硫代硫酸钠 85g
10%柠檬酸铁溶液 10ml
1%中性红溶液 25ml
01%煌绿溶液 033ml
B2322 制法
加热溶化基础培养基,按比例加入除中性红和煌绿溶液以外的各成分,充分混合均匀,调整pH
到70,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板。
注:制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于18h内使用。煌绿溶液配好后应在10d以内使用。
B24 亚硫酸铋琼脂培养基 (BS培养基)
B241 基础培养基
B2411 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
氯化钠 5g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
B2412 制法
加热溶解各成分,按每份100ml的量分装于250ml三角瓶中,121℃灭菌20min备用。
B242 亚硫酸铋贮备液
B2421 成分
柠檬酸铋铵 2g
亚硫酸钠 20g
磷酸氯二钠 10g
葡萄糖 10g
蒸馏水 200ml
B2422 制法
将柠檬酸铋铵溶解于50ml沸水中,同时将压硫酸钠溶解于100ml沸水中,混合两液并煮沸3
min,趁热加入磷酸氯二钠搅拌至溶解。冷却后,加入剩余的50ml葡萄糖水溶液,贮存于冰箱中。
B243 柠檬酸铁煌绿贮备液
B2431 成分
柠檬酸铁 2g
煌绿 (1%水溶液) 25ml
蒸馏水 200ml
B2432 制法
将上述成分溶解于水中,盛于已灭菌的玻璃瓶内,贮存于冰箱。
B244 完成培养基
B2441 成分
61
GB 18466 2005
基础培养基 100ml
亚硫酸铋贮备液 20ml
柠檬酸铁煌绿贮备液 45ml
B2442 制法
加热融化基础培养基并冷却至50℃,同时分别加热亚硫酸铋贮备液和柠檬酸铁煌绿贮备液至50
℃。在无菌操作下将后者加入到前者去,充分混合,无菌倾入已灭菌的培养皿中。
B25 三糖铁琼脂培养基 (TSI培养基)
B251 成分
蛋白胨 20g
牛肉膏 5g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
硫酸亚铁铵 02g
硫代硫酸钠 02g
琼脂 12g
酚红 0025g
蒸馏水 1000ml
B252 制法
将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,调 pH到74。加入琼脂,加热煮沸,再加入
02%酚红水溶液 125ml,摇匀。分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。121℃灭菌 15
min。放置高层斜面备用。
B26 沙门氏菌诊断血清
B3 检验程序
检验程序见图B1。
污水样品处理:
↓
过滤 污水样品处理:
↓
稀释
增菌:将样品接种于二倍浓度
SF
37℃、培养24h
平板分离:将增菌培养液分别接种于SS和
↓
BS
37℃、培养24~48h
平板分离:挑选可疑菌落接种于
↓
TSI
37℃、培养18~24h
鉴定:生化、
↓
血清学试验
↓
检验结果报告
图B1 污水、污泥中沙门氏菌检验程序
B4 操作步骤
B41 样品处理和增菌
B411 污水
取200ml污水,用灭菌滤膜进行抽滤,用100ml二倍浓度 SF增菌液把滤膜上截留的杂质洗脱
71
GB 18466 2005
到灭菌三角烧瓶内,充公摇匀,置于37℃恒温培养箱,增菌培养12~24h。
注:若样品为经过氯消毒的污水,应在采样后立即用5%硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。
B412 污泥
用灭菌匙称取污泥20g,放入灭菌容器内,加入200ml灭菌水,充分混匀,制成1∶10混悬液。
吸取上述1∶10混悬液100ml,加入到装有100ml二倍浓度 SF增菌液的已灭菌的三角烧瓶内,摇
匀,置于37℃恒温培养箱,增菌培养24h。
注:若样品为经过氯消毒的污泥,应在采样后立即用5%硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。
B42 平板分离
取上述增菌培养液,分别接种于SS培养基平板和BS培养基平板,置于37℃培养箱中,培养24~
48h。观察各平板上生长的菌落形态。
挑取在SS培养基平板上呈无色透明或中间有黑心,直径1~2mm的菌落;挑取在 BS培养基平
板上呈黑色的菌落或灰绿色的可疑肠道病原菌菌落。每个平板最少挑取5个菌落,接种于TSI培养基
中,置于37℃培养箱中,培养18~24h。
B43 鉴定
B431 血清学试验
在TSI培养基中,如不发酵乳糖,发酵葡萄糖产酸产气或只产酸不产气,一般产生硫化氢,有
动力者,先与沙门氏A-F群O多价血清作玻璃片凝集,凡与多价 O血清凝集者,再与 O因子血清
凝集,以确定所属群别,然后用H因子血清,确定血清型。双向菌株应证实两相的H抗原,有Vi抗
原的菌型 (伤寒和丙型副伤寒沙门氏菌)应用Vi因子血清检验。
B432 生化试验
应进行葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、蔗糖、靛基质、硫化氢、动力、尿素试验。沙门氏菌
属中除伤寒沙门氏菌和鸡沙门氏菌不产气外,通过发酵葡萄糖、产气、均发酵甘露醇和麦芽糖 (但
猪沙门氏菌、雏沙门氏菌不发酵麦芽糖),不分解乳糖、蔗糖,尿素酶和靛基质为阴性,通常产生硫
化氢。除鸡、雏沙门氏菌和伤寒沙门氏菌的O型菌株无动力外,通常均有动力。
如遇多价O血清不凝集而一般生化反应符合上述情况时,可加做侧金盏花醇、水杨素和氰化钾
试验,沙门氏菌均为阴性。
B5 检验结果报告
根据检验结果,报告一定体积的样品中存在或不存在沙门氏菌。
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GB 18466 2005
附 录 C
(规范性附录)
医疗机构污水及污泥中志贺氏菌的检验方法
C1 仪器和设备
C11 高压蒸汽灭菌器
C12 干燥灭菌箱。
C13 培养箱。
C14 恒温水浴箱。
C15 电炉。
C16 天平。
C17 灭菌平皿。
C18 灭菌刻度吸管。
C19 酒精灯。
C2 培养基和培养液
C21 革兰氏阴性增菌液 (GN增菌液)
C211 成分
胰蛋白胨 (或多价胨) 20g
葡萄糖 1g
甘露醇 2g
枸橼酸钠 5g
去氧胆酸钠 05g
磷酸氢二钾 16g
磷酸二氢钾 25g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000ml
C212 制法
将以上各成分加入蒸馏水中溶化,调整pH至70,煮沸过滤,115℃灭菌20min。贮存于冷暗
处备用。
C22 二倍浓度革兰氏阴性增菌液 (二倍浓度GN增菌液)
C221 成分
除蒸馏水改为500ml外,其他成分同附录C211。
C222 制法
制法同附录C212。
C23 SS培养基
同附录B23。
C24 伊红亚甲基蓝琼脂培养基 (EMB培养基)
同附录A23。
C25 三糖铁琼脂 (TSI培养基)
同附录B25。
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GB 18466 2005
C26 志贺氏菌诊断血清
C3 检验程序
检验程序见图C1。
污水样品处理:
↓
过滤 污水样品处理:
↓
稀释
增菌:将样品接种于双倍浓度
GN
37℃、6~8h培养
平板分离:将增菌培养液分别接种于SS和
↓
EMB
37℃、培养24h
平板分离:挑选可疑菌落接种于
↓
TSI
37℃、培养18~24h
鉴定:生化、
↓
血清学试验
↓
检验结果报告
图C1 污水、污泥中志贺氏菌检验程序
C4 操作步骤
C41 样品处理和增菌培养
C411 污水
取200ml污水,用灭菌滤膜进行抽滤。用100ml二倍浓度GN增菌液把滤膜上截留的杂质洗脱
到已灭菌的三角烧瓶内,摇匀,置于37℃恒温培养箱,增菌培养6~8h。
注:若样品