生化实验期末考试试题
一、实验
1. 醋酸纤维薄膜点样
用盖玻片在醋酸纤维素薄膜上点样（试剂：牛血清样品），并电泳，正负极不能接反。
2.分光光度计
波长520nm，用蒸馏水作对照管，测定有色样品的吸光度。
3.平衡和离心
取一定量样品，先用天平平衡，然后规定转速和时间离心，如3000r/min离心5分钟
4.氨基酸分离鉴定———纸层析
二、理论考试题目（考试随即抽取两题，以口答形式进行，每题7.5分，每人限时3分钟）
1.醋酸纤维薄膜电泳时，点样的一端应靠近电极的那一端？为什么？
负极。因为血清中各种蛋白质在PH为8.6的环境中均带负电，根据同性相吸，异性相斥原理，点样端在负极时蛋白质向正极泳动从而实现蛋白质分离。
2.用分光光度计测定物质含量时，设置空白对照管的意义是什么？
空白对照是为了排除溶剂对吸光度的影响。溶液的吸光度表示物质对光的吸收程度，但是作为溶剂也能吸收，反射和透射一部分的光，因此必须以相同的溶剂设置对照，排除溶剂对吸光度的影响。
3.简述血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳的原理？
血清蛋白中各种蛋白质离子在电场力的作用下向着与自身电荷相反的方向涌动，而各种蛋白质等电点不同，且在PH为8.6时所带电荷不同，分子大小不等，形状各有差异，所以在同一电泳下永动速度不同从而实现分离。
4.何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么？
Rf是原点到层析中心的距离与原点到溶剂前沿的距离之比。Rf的大小与物质的结构，性质，溶剂系统，层析滤纸的质量和层析温度有关。
5.什么是盐析？盐析会引起蛋白质变性吗？一般我们用什么试剂做盐析的实验？
盐析是指当溶液中的中性盐持续增加时，蛋白质的溶解度下降，当中性盐的浓度达到一定程度的时候，蛋白质从溶液中析出的现象。盐析不会引起蛋白质的变性。一般用饱和硫酸铵溶液进行盐析。
6.简述DNS法测定还原糖浓度的实验原理？
还原糖与DNS在碱性条件下加热被氧化成糖酸，而DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内还原糖的量与3-氨基-5硝基水杨酸颜色的深浅成正比，用分光光度计 测出溶液的吸光度，通过查对
标准
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曲线可计算出3-氨基-5硝基水杨酸的浓度，从而得出还原糖的浓度。
7.依据我们所做的实验，说明影响蛋白质沉淀的因素是什么？影响蛋白质变性的因素是什么？沉淀和变性有何联系？
水溶液中的蛋白质分子由于表面形成水化层和双电层从而形成稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下蛋白质颗粒因失去电荷和脱水而沉淀。 这些因素包括溶液的酸碱度、盐溶液的浓度、温度、重金属离子以及有机溶剂等。 变性蛋白质不一定沉淀，沉淀的蛋白质不一定变性。
8.简述纸层析法分离氨基酸的原理？
纸层析发是以滤纸作惰性支持物的分配层析法。纸纤维上的羟基具有亲水性，因此能吸附一定的水作为固定相，而有机溶剂作为流动相。由于各种氨基酸的极性不同，随流动相迁移的距离不同，所以可将氨基酸的混合物分离开来。
9.在蛋白质显色实验的黄色反应中，反应原理是什么？实验结果为什么会出现深浅不一的黄色？
含有苯环的氨基酸如酪氨酸和色氨酸，能被硝酸硝化成黄色的物质，而且不同蛋白质中所含的苯环数量不同，造成与试剂反应的程度不同，因此呈现颜色深浅不一 。
10.RNA水解后的三大组分是什么？怎样各自验证的？
核糖，磷酸，嘌呤碱。 核糖+苔黒酚—Fe（浓HCI）绿色物质； 磷酸+钼酸铵——蓝色； 嘌呤碱+硝酸银——白色。
11.何谓等电点？在等电点时，蛋白质的溶解度为什么最低？
当溶液的pH为一定数值时，其中的蛋白质正负电荷相等，即净电荷为零，此时的pH至值就是该蛋白质的等电点。 在等电点时，蛋白质在溶液中净电荷为零。蛋白质分子失去了电荷的排斥作用，因分子运动聚集而沉淀下来。
12.鸡蛋清可用作铅中毒或汞中毒的解毒剂，为什么？
因为蛋白质可与重金属离子结合成不溶于水的复合物，则鸡蛋清可以代替机体组织与重金属反应，从而减少其对机体的损害。
13.离心管如何在天平上平衡？操作离心机时应注意什么？
把放在小烧杯中的离心管（包括盖子）和管套放在平衡的天平上，用胶头滴管取离心液调平。
①有不正常声音时应按STOP键②离心机工作中切勿打开离心机盖③避免离心机连续使用时间过长
14.血清醋酸纤维薄膜电泳可将人血清蛋白依次分为哪几条区带？哪条带泳动最快？影响蛋白质泳动速度的因素有哪些？
从正到负看：白蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、β-球蛋白、r-球蛋白；其中白蛋白点最快。影响因素：蛋白质所带电荷数，分子大小与形状以及缓冲液浓度。
15.什么是抑制剂？什么是变形计？抑制剂和变性剂的区别是什么？
凡是能使酶活性降低而不使酶失活变性的物质为抑制剂；凡是能引起蛋白质变性失活的物质叫变性剂。抑制剂只是抑制蛋白质的特性而变性则破坏蛋白质的结构。
16.什么是还原糖？所有单糖都是还原糖吗？为什么？
指含有自由醛基或酮基，能使某些物质还原的糖。所以的单糖都是还原糖。因为单糖都含有自由的醛基或酮基，并具有还原性。
17.简述桔皮中提取果胶的原理、操作步骤及果胶的应用。
原果胶是果胶在植物中的主要形式，而其不溶于水。故利用酸将原果胶水解为水溶性果胶并浓缩，然后利用果胶不溶于乙醇的特点，使其沉淀出来。
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