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高效液相色谱法测水溶性维生素综述.pdf

高效液相色谱法测水溶性维生素综述

地北天南_1631
2013-09-21 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《高效液相色谱法测水溶性维生素综述pdf》,可适用于自然科学领域

湖南饲料年第期高效液相色谱法测水溶性维生素综述王海霞(扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州)摘要:高效液相色谱是一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离分析技术。本文综述了用高效液相色谱法测定水溶性维生素含量的方法列举了烟酸和维生素C的测定过程对仪器的保养也作了部分介绍。关键词:高效液相色谱水溶性维生素烟酸维生素C高效液相色谱(HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC)是近年发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离分析技术。它既能用于微量组分的分析测定又能用于大量的制备分离灵活多样其应用范围已超过其他各种分离方法尤其在生化医药样品的分析分离方面更充分发挥它的特长为推动该领域的进步和发展作出了巨大贡献。高效液相色谱系统是由储液器、泵、进样器、分离柱、检测器、数据处理系统等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入进样系统或进样器。样品通过进样器以精确的体积插入流动相中,再被流动相带到柱内,分离过程在柱内进行,被分离成单个组分的样品依次从柱内流出,通过检测器样品浓度被转变成电信号送到记录器和数据系统,经系统处理,数据以图谱和图表形式打印出来。对HPLC技术及设备原理了解了,这样就能够提高仪器的利用率,更好地发挥仪器作用。维生素为维持生物体正常机能的必需物质,常作为营养强化食品的添加因子,它广泛存在于谷类、果蔬、肉禽及蛋类等加工品中,因此,维生素的检测对食品、饮料、制药、饲料等领域都有非常重要的意义。水溶性维生素与人体的生长发育及健康密切相关。水溶性维生素中又以维生素C及B族维生素较为重要。水溶性维生素的测定方法主要包括分光光度法、分子荧光法、微生物法和高效液相色谱法等。分光光度法的样品前处理一般较复杂且干扰物质多测定结果偏高分子荧光法的样品预处理也很复杂在对多维片和维生素强化食品进行多种维生素的检测时会给定量带来一定的困难而用高效液相色谱法测定水溶性维生素样品前处理简单,样品用量少分离速度快可一次性分析多种水溶性维生素。目前,国内用高效液相色谱法分析水溶性维生素时一般使用Water公司专制的PICB离子对试剂其价格昂贵且不易保存。目前多种水溶性维生素的色谱分离条件有离子对HPLC、胶束HPLC和非离子对HPLC前者因离子对试剂价格昂贵且对色谱柱柱效及泵损害大不适合作为常规分析方法。HPLC应用于水溶性维生素的分析,目前多为纯方法研究或仅用于药物和一些基本样品的分析。应用于食品,尤其是植物机体,同时测定多种水溶性维生素的方法很少。复合预混合饲料中维生素B族的测定目前复合预混料中都添加有多种维生素,因为动物都具有潜伏的维生素不足症,这些潜伏的维生素不足症不能观察出来,但在不利环境条件下便可立即诱发并显示出缺乏症来。如果动物完全缺少一种或数种维生素,或者是摄入量不足,某些代谢过程就将受到损害,从而导致生长受阻或者疾病。现就复合预混合饲料中维生素B、B、检测分析湖南饲料年第期检测分析B、B(烟酸、烟酰胺)、B(叶酸)的测定方法进行探讨。根据GB饲料中维生素B的测定方法、GB饲料中维生素B的测定方法、GB饲料中维生素B的测定方法,对B、B、B进行测定。VB、VB、VB是利用荧光分光光度计,采用使维生素经提取后形成荧光色素,在一定波长下所产生的荧光强度与试样中维生素的含量成正比,进行定量测定。GBT饲料中烟酸、叶酸的测定是采用高效液相色谱法进行测定的由于上述种B族维生素的前处理方法均各不相同尤其荧光法测定操作步骤繁琐,检测误差较大在查阅国内外文献的基础上参考《饲料添加剂分析(美国全国饲料协会NFIA分析方法概要)》报导的方法对试样提取条件、色谱测定条件及试样处理技术进行了研究改进建立了简便、快速的分析操作程序不仅大大缩短了样品前处理时间提高了工作效率而且其精密度和准确度结果与国标方法基本相同。实验过程中应注意:()样品前处理加入NaCO溶液后,溶液pH值必须呈明显碱性,如果样品中含有酸性物质(如抗坏血酸,氨基酸)需增加NaCO的用量。由于一些维生素对光敏感,故需用棕色玻璃容器样品溶液中的叶酸不稳定,超过h峰面积就会下降约,故样品处理后需避光并尽快检测()离子对试剂的选择。采用HPLC分析复合预混合饲料中种B族维生素时,VB、VB有重峰现象,加入离子对试剂可改善峰形且使VB、VB形成离子对而使各组分相应延长洗脱时间,达到基线分离。在相同检测条件下,采用庚烷磺酸钠和己烷磺酸钠进行对比试验,结果出峰顺序和峰面积基本不变,只是保留时间有些改变。用己烷磺酸钠更能缩短检验时间()酸度。影响分离的主要因素是流动相的pH值。乙酸调节流动相pH为,分离效果较好。流动相pH值降低有利于碱性溶质与离子对试剂结合而缩短分离时间,但过低会降低柱效,且叶酸在溶液中不稳定易析出,样品提取液与流动相的酸度要保持一致()选用反相C柱对分离复合B族维生素效果较好,前个峰的时间虽然接近,但都接近于基线分离,混合标准溶液中各成分的峰面积与单独成分所得到的峰面积基本一致,可以认为个组分完好分离基于水溶性维生素在碱性介质中只有维生素B(VB)和维生素B(VB)可以被KFe(CN)直接氧化产生化学发光的原理,建立了反相高效液相色谱(RPHPLC)分离柱后化学发光检测VB和VB的新方法,并成功应用于复合维生素B片剂中VB和VB的测定。()VB是水溶性维生素,经典的测定方法是荧光分析法,方法复杂,分析时间长,所用试剂繁多,且氰化钾剧毒用反相液相色谱定量测定的方法,步骤简单,分析速度快。烟酸的测定烟酸对奶牛的生产性能具有重要的作用包括对生长、泌乳以及乳成分的影响且烟酸对奶牛特别是高产奶牛的营养作用的研究正处于方兴未艾的阶段但是目前研究试验结果不一对羊的研究也是如此因此有必要对烟酸的营养作用进行深入研究。烟酸是一种含氮杂环化合物它可被具有烟酸脱氢酶(nicotinicaciddehydrogenase)活性的微生物转化生成一轻基烟酸。一轻基烟酸是一种重要的农药、医药中间体。它可用于合成多种现代农药合成,一二氯烟酸(合成医药活性成分的初始物质)等。一轻基烟酸生物转化具有效率高、专一性强、条件温和的特点。微生物转化生产一轻基烟酸已经成为国外研究热点具有很好的开发前景。开展这方面的工作必须首先建立合适的检测一轻基烟酸的方法。国外报道HPLC,,法在检侧波长的选择、流动相的选择、适用性等方面均存在不足。国内有试验对烟酸及一轻基烟酸的分析方法进行研究建立了简便、快速、准确的高效液相方法。烟酸为B族维生素之一,临床上小剂量应用于预防和治疗烟酸缺乏症,给药剂量为~mg次,每日~次临床大剂量(每日g)有降血脂作用,但不良反应随之增加。制成缓释制剂可充分发挥疗效保证用药安全。国外已有烟酸缓释制剂产品上市本研究参考文献报道建立人血浆中烟酸浓度测定的反相离子对高效液相色谱法(reversephaseionseionpairHPLC,RPIC),为其缓释片药代动力学研究及临床应用提供理论和试验依据。由于烟酸的半衰期太短,只有min,湖南饲料年第期主要参考文献张书杰李绍钰林东康畜牧生产中磷污染及治理措施河南畜牧兽医():刘艳琴江富华降低养禽业中磷污染的措施家畜生态():GolovanSPWangGZhangJForsBergCWCharacterizationandoverproductionoftheEscherichiacoliAPPaencodedBifunctionalenzymewhichexhibitsbothphytaseandacidphosphataseactivitiesCanadianJournalofMicrobiology:lGolovanSPHayesMAPhillipsJPForsBergCWaTransgenicmiceexpressingbacterialphytaseasamodelforphosphoruspollutioncontroNatureBiotechnology:~GolovanSPRGMeidingerAajakaiyeMCottrillMZWiederkehrDBranryCPlanteJPlooardMZFanMAHayesJLaursenJPHjorthRRHackerJPPhillipsandCWForsBergbPigsexpressingsalivaryphytaseproducelowphosphorusmanureNaturalBiotechnology:赵建军许泽永方小平作物低植酸育种研究进展中国油料作物学报():陈洪深养猪业粪尿处理技术及研究进展湖北畜牧兽医:其血药浓度极低,对于烟酸的血药浓度测定国内均未见报道。为进行烟酸缓释片药动学与生物利用度研究,需建立一种准确可靠的血药浓度测定方法,可采用HPLC法测定血浆中烟酸的含量,。国外分析方法中选择检测波长为nml或nml而采用最大吸收波长nm具有更高的灵敏度易于识别具有微量转化能力的菌种国外流动相采用磷酸盐缓冲液采用水则避免了磷酸盐易结晶堵塞管道的缺点同时采用甲醇代替了较贵的乙睛符合经济的原则。国内有方法的分析时间较国外方法要短。该方法是在国内广泛使用的Agilent系列仪器上建立的对于国内开展烟酸转化工作、创制新农药具有较强的借鉴意义。总之该方法利于保护色谱仪器利于对烟酸及其转化产物一轻基烟酸的快速定性定量测定适用于微生物转化工作中的批量样品测定。有文用ODSC色谱柱molL磷酸二氢钠缓冲液和甲醇为流动相。由于烟酸极性大在反相柱上保留时间短故在流动相中加入离子对试剂溴化四丁铵以延长烟酸的保留时间使之与血浆中的杂质及其代谢产物完全分离。烟酸有很强的亲水性故用丙酮进行萃取再用氯仿进行第次萃取以去掉脂肪、蛋白等杂质。其作者曾尝试过萃取次或改为其他有机溶剂萃取效果均不理想。近来文献报道烟酸用乙睛去蛋白后直接进样无血样浓缩过程。本法与蛋白沉淀法相比提取效率高杂质干扰少提高了检测的灵敏度适用于烟酸缓释片的临床药代动力学研究。测定Vc银翘片中Vc含量通过对Vc银翘片中Vc含量测定方法的研究,建立一种新型的HPLC测定方法采用甲醇醋酸铵(molL)醋酸(体积比∶∶)为流动相,甲醇醋酸钠(molL)醋酸(体积比∶∶)的混合溶液溶解样品,KrosmasilC(mm×mm,μm)柱分离,nm检测。该方法测定结果稳定,重现性好,可操作性强,明显提高了Vc的回收率,同时能将样品中的Vc及相关组分成功分离,有利于准确测定Vc的含量。用HPLC测定方法可同时直接测定Vc银翘片中Vc和对乙酰氨基酚的含量,方法简便、快速、准确,可作为该制剂的含量控制方法。因此,与滴定法相比,HPLC法测定Vc的含量有很多优势。当然我们还应注意高效液相色谱仪的正确应用和科学保养。严格按照说明书要求,进行规范操作,这是前提。另外定期清洗专用贮液瓶珍惜保护色谱柱,避免柱头突然产生大的波动,扰动损伤柱床采用保护(警戒)柱,延长柱寿命避免超负荷进样做完试验,及时用适当溶剂冲洗柱子和进样阀色谱仪检测器输出与积分仪(处理机)要匹配,尽量用流动相溶解样品,一是避免出现拖尾峰、怪峰,二是避免试样在系统中由于溶解度降低而析出。参考文献(略)(上接第页)检测分析

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