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免疫组化染色实验结果分析
良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础
和前提。由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节,每
一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果,因此,要做
好一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事。需
要病理技术员和病理医生密切配合、相互协调、共同努力才
能保证做出合格的免疫组化切片。虽然免疫组化染色可以存
在各种各样的问
题
快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题
,但从染色的结果看,一般可分为两类:
无色片(即无阳性信号)和“ 杂音”染色片(有阳性信号)。
以下解析“无色片”:
染色结束后,切片中见不到任何阳性信号。这是常规工
作中比较常见的现象,出现这种现象,有两种可能:1、真
阴性结果:整个染色过程没有出现问题,组织或细胞确实不
表
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达与抗体相关的抗原。2、假阴性结果:即此阴性结果不
是真实的反映。假阴性结果又可分为两种情况:
(1)、切片中根本就不包含所预期检查的组织或细胞。
出现这种情况,要麽是病理医生选择错了切片或抗体选错了,
要麽是技术员选错了蜡块。获得正确的切片进行染色是获得
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正确结果的前提。由此表明:制作出合格的免疫组化切片不
仅仅是技术员的事,病理医生也起着不可缺少的作用。
(2)、染色过程中的某一或某些环节出了问题。比如,
组织未进行抗原修复,有的组织必须经过抗原修复才能检测
抗原表达;或选用了只能用于冰冻组织而不能用于石蜡包埋
组织的抗体;或一抗失效,虽然抗体失效在理论上是一个逐
渐的过,但偶尔也遇到突然失效的情况,抗体长期不用和/
或已超过有效期是主要的原因。也可见于染色过程中漏掉了
某一环节,如忘记加二抗或三抗,或用了两次二抗而缺少了
三抗,或配制 DAB 时少了过氧化氢。为了避免这种简单的错
误,有一种简单的方法:在三抗孵育结束时,将切片上的三
抗甩在一张白纸上,在将配制好的 DAB 滴一滴在白纸的三抗
上,观察是否出现棕色。如果出现了,证明三抗和 DAB 的配
制过程没有错误。如果这种 DAB 再滴到切片上没有出现任何
阳性信号,问题一定是出在三抗以前。如果纸上不出现棕色
反应,问题肯定在三抗或 DAB 的配制过程。这种简单方法能
迅速的帮助我们查找出现问题可能的原因。
解决阴性染色的问题非常简单,就是设立“阳性对照”。
如果阳性对照有了表达,
说明
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染色的全过程和所有试剂都没
有问题。如果此时测试片仍为阴性,便是真实的阴性,说明
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组织或细胞没有相应的抗原表达。反之,如果阳性对照没有
着色,表明染色过程中某个或某些步骤出了问题或试剂出了
问题。应一一寻找原因。阳性对照包括两种,一种称为“自
身对照”或“内部对照”,这是指在测试的切片中本身就存
在已知的抗原,如正常淋巴结中存在 T 和 B 细胞抗原,CD20
或 CD3 都应该有表达。自身对照是一种比较理想的对照,对
照和测试组织或细胞都在同一张切片中,都处于相同的试验
条件下,结果更可靠也更具有可比性。在选择自身对照片时
最好选择既有病变组织同时又有正常组织的部分,这样有利
于对比。另一种称为“外部对照”,有时在测试的切片中不
存在已知的抗原,如在胃的标本中怀疑是恶性黑色素瘤,需
要用 HMB45 或 Mart-1 来检测,在正常的胃组织中本身不存
在相关的抗原,如果病变出现阳性反应结果,尚能提示是恶
黑,但是如果出现阴性结果,就无法确定是本身组织中不含
黑色素瘤抗原,还是技术问题。因此,应另外设立一个已知
的阳性对照。这种在测试组织之外的阳性对照称为“外部对
照 ”。在实际工作中需要设立外部对照的情况很多,如果
每一种抗体都要选不同的阳性对照,工作量会很大。为了解
决这个问题,目前国内外有单位将多种不同组织集成在一起,
制成多组织切片、“腊肠”“春卷”切片、组织芯片等,其
连续切片储备待用,需要时取出一张便可作为阳性对照。另
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外,比较简单的方法,是采用阑尾作为阳性对照,因为与人
体其它组织器官比较阑尾包含的组织种类较多,如有上皮、
淋巴组织、平滑肌、间质、神经、血管、间皮等。一张阑尾
切片可以检测大多数常用的抗体。
设立阳性对照是病理医生的任务或责任,而不是技术员
的责任。病理医生观察了 HE 切片,了解切片中是否有自身
对照,如果没有,就应告诉技术员采用阳性对照。因此,病
理医生在免疫组化中的作用是不可忽视的。抗体未覆盖上测
试组织:当多块散开的小组织染色时,可能漏掉某块组织染
色。