细胞培养实验
养细胞的主要条件有:1、温度
要求
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37℃,细胞是从人和动物体内提取出来的,人体内的温度大约是37℃,如果高了或者低了,都会导致细胞产生某个反应,所以养细胞的温度要求很高;2、养细胞要保证CO₂的浓度不超过5%;3、细胞一定要无菌状态下进行培养。
养细胞的培养设备是细胞培养箱,也是就是CO₂培养箱,与烘箱相似。1、它要求温度为37℃,控温精度为±0.25℃。控制温度有两种方式:加热、降温。温度也会跟培养间的空间、体积等有关。如何保证箱体保证均一性有两种方式:气套和水套。(私下问金老大)
2、而CO₂培养箱有CO₂检测器,当箱体内的CO₂浓度低于5%,它的阀门就会自动打开,向培养箱输送CO₂,当浓度达到了要求后,阀门会自动关闭。
3、培养箱是没办法做到无菌的,只能做到少菌,而大部分培养箱都有自动的紫外线灭菌这个功能。
注:公司目前有在做这个的品牌主要是是Thermo、三洋、香港力康。
养细胞的操作设备:超净工作台、生物安全柜。这两个的区别在于,前者是不干净的气体从上面往下通过过滤器后转变为干净的气体后往外吹风,生物安全柜是气体从工作台变脏了后往上通过过滤器过滤掉,也就是说生物安全柜是往里吸风。超净工作台一定要注意尺寸,放进细胞培养间的时候要弄清楚尺寸。(真空泵也属于操作设备)
国内生产安全柜的:苏净安泰、力康、BEKER.
观察细胞需要观察设备,显微镜(倒置显微镜,荧光显微镜、相差显微镜)、移液器(换液方式:5ml的移液枪或者真空泵)都是在细胞培养中不可缺少的。还有细胞计数仪,它有两个原理:
(1)图像识别法:用台盼蓝染料(进入核状结构就会出现一团一团蓝色),这个方法可以区分细胞是活的还是死的。但是它的缺点是经常分辨不出细胞团;()
扩尔特原理:识别颗粒。在两个电极间,颗粒从两个电极间冲过去,产生电阻,从而产生电压脉冲,细胞大的话电压就大,那么脉冲也大,反之一样。它计数准。但是它的劣势是分辨不出细胞是死是活。