201011 核酸与核苷酸 生物化学

nullnull第三章 核酸与核苷酸学习要求3.1 核酸的类型和化学组成3.3 DNA的结构和功能3.2 RNA的结构和功能3.4 核酸和核苷酸的性质3.5 核酸及其组分的分离纯化null学习要求 (4学时)1、了解核酸的发展简史及核酸对生物体的重要意义。2、了解核酸的分类，掌握两类核酸的化学组成特点和分布状态，熟悉核苷酸的结构。3、掌握DNA的一级结构及一级结构的意义；DNA双螺旋结构模型要点；DNA双螺旋结构模型提出对生命科学的重要意义。了解真核生物染色体的结构特点。4、熟知RNA的种类，重点掌握与蛋白质合成有关的三种RNA的功能；掌握tRNA的结构特点以及与该结构有关的生物学功能。5、掌握核酸紫外吸收的特性及热变性的性质，从核酸热变性的基础上理解DNA的复性与分子杂交，掌握DNA的熔解温度、增色效应的概念。6、了解各种核酸酶对核酸的水解、限制性内切酶的作用特点及该酶的应用。null3.1 核酸的类型和化学组成核酸英文名nucleic acid（NA） 1868年瑞士F. Miescher（米歇尔）发现了核酸（含磷高的酸性物质）。 核酸是由几十个甚至几千万个核苷酸聚合而成的具有一定空间结构的大分子化合物。 分为核糖核酸(ribonucleic acid，RNA)和脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid，DNA) 。 RNA主要存在于细胞质中，参与生物体内蛋白质的合成。 DNA主要分布在细胞核中，它决定着生物体的繁殖、遗传和变异。P80nullnullnullnullnull5-15%nullnull一、碱基base 含氮碱 1. 嘧啶碱（pyrimidine，Py）null2. 嘌呤碱（purine，Pu） 其它嘌呤（核酸代谢产物）：黄嘌呤、次黄嘌呤、尿酸等null3. 修饰碱基（modified base） 也称稀有碱基（minor base） nullnull4. 碱基的性质 互变异构现象：nullnull碱基的紫外吸收：最大吸收峰在260nm附近null碱基的解离：nullnull二、戊糖 pentoseβ-D-2-O-甲基核糖null氧化反应：null碱水解：颜色反应：null三、磷酸 phosphoric acidnull四、核苷 nucleoside核苷：含N苷，β-苷 nullnullnull核苷 核糖核苷（核苷）：A、G、C、U RNA 脱氧核糖核苷（脱氧核苷）：dA、dG、dC、dT 命名，简写符号 天然核苷：一般为反式构象 DNA不可旋转性null五、核苷酸（nucleotide, Nt） 核苷酸是核酸的基本结构单位。null1. （核糖）核苷酸（ribonucleotide）2’，3’，5’-核糖核苷酸RNA的组成单位nullnull3’，5’-脱氧核糖核苷酸Deoxyadenosine 3’- monphosphate (3’- dAMP)Deoxyadenosine 5’- monphosphate (5’- dAMP)2. 脱氧（核糖）核苷酸（deoxyribonucleotide）是DNA的组成单位nullnull生物体内多数核苷酸是5 ’ -核苷酸。核苷酸的命名是取含氮碱的字头加上“核苷酸” ， 脱氧核苷酸则在含氮碱的字头前再加“脱氧”两字。null 核酸是许多核苷酸相互连接而成的多核苷酸长链。 RNA、DNA，核苷酸之间都是通过3′，5′-磷酸二酯键相互连接而成。 3′，5′-磷酸二酯键是磷酸分别与相邻两个核苷中戊糖3′位和5′位上的羟基脱水形成的酯键。六、核酸的一级结构 核酸的一级结构是指各个核苷酸在核酸分子中的排列顺序。核酸链的走向一般是从5′-端至3′-端。 nullnullnullnullnull3.2 RNA的结构和功能null（一）RNA的类别 1．核糖体RNA（ribosomal RNA，rRNA） 2．转移RNA（transfer RNA，tRNA） 3．信使RNA（messenger RNA，mRNA） 4．其它类别的RNA （1）病毒RNA（Viral RNA，rRNA） （2）核内RNA（nuclear RNA，nRNA） ① 不均一核RNA（heterogeneous nuclear RNA，HnRNA） ② 小分子核RNA（small nuclear RNA，sn RNA） ③ 小分子核仁RNA（small nucleolar RNA，sno RNA） ④ 染色体RNA（chromosomal RNA，ch RNA） （3）线粒体RNA（mitochondrial RNA，mit RNA） （4）叶绿体RNA（chloroplast RNA，chlRNA或ctRNA） 原核生物3种 真核生物4种 蛋白质合成场所nullnullnullnullRNA与蛋白质的生物合成 mRNA与遗传密码 遗传密码（genetic code） 密码子（codon） nullnullnulltRNA的作用 tRNA的作用是多方面的，它接受氨基酸、携带氨基酸，把氨基酸转运到核糖体上，然后按照mRNA上的密码顺序装配成多肽或蛋白质。 tRNA必须识别相应的氨基酸和识别mRNA上相应的密码子。 tRNA怎样识别相应的氨基酸: 主要靠高度专一的氨酰-tRNA合成酶。nulltRNA怎样识别mRNA上相应的密码子 nullnull（二）RNA的一级结构 RNA分子中核苷酸之间的连接方式3´,5´-磷酸二酯键 线状nullRNA分子中核苷酸的排列顺序 酵母tRNAAla片段重叠法 直接阅读法（直读法） 1965年RNA一级结构的测定：片段分析法null1. rRNA的一级结构几类RNA的一级结构：null原核生物核糖体 70S50S30S5S rRNA， 23S rRNA33种蛋白质16S rRNA21种蛋白质真核生物核糖体 80S60S40S5SrRNA，5.8SrRNA，28SrRNA49种蛋白质18SrRNA33种蛋白质nullnull2. mRNA的一级结构 真核生物mRNA的一级结构可用下式 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 示 :nullnullnullnull5´-cap的功能 (1) 防止mRNA被核酸酶降解。(2) 为mRNA翻译活性所必需。(3) 与蛋白质合成的正确起始有关。null3´-polyA : polyA的残基数20~200个，或更多。polyA的功能：(1) 保护mRNA，免受核酸外切酶的作用。(2) 与翻译有关，没有polyA翻译活性降低。(3) 与mRNA从细胞核转移到细胞质有关。nullnullnullnullnullnull3. tRNA的一级结构 tRNA一级结构的共同点: ① Mr 较小（Mr 25000），沉降常数4S。 ② 各种tRNA的链长很接近，一般在73-93个核苷酸之间。③ tRNA分子中约20多个位置上的核苷酸是保守的（不变和半不变的） ④ 各种tRNA的3′-端为CCA；5′-端大多数为pG，少数为pC。 ⑤ tRNA分子中含有较多的修饰成分。 nullnullnull 核酸亦有二级结构，大部份都是单股核糖核酸（RNA）分子。RNA二级结构可以分为螺旋（紧接的碱基对）及不同种类的环（被螺旋围绕的不成对核苷酸）。茎环结构是一个碱基对螺旋结构，末端为短少的不成对环。这种茎环结构非常普遍，并且是建构大型结构基元，如三叶草结构（即如在转运RNA中的四个螺旋结点）的基本单位。内环结构（在长碱基对螺旋中的短而不成对碱基）及膨出（在螺旋股中额外插入，但却在相对股中没有配对的碱基）亦很经常会出现。最后，伪结及base triples亦会出现在RNA。 null（三）RNA的二级结构 大多数天然RNA是一条单链，通过自身回折形成部分螺旋区，部分非螺旋区。 少数病毒RNA如水稻矮缩病毒、呼肠孤病毒、伤瘤病毒等RNA是双链螺旋，类似于DNA的双螺旋结构。 null RNA中双螺旋结构稳定的因素主要是碱基堆积力，其次是氢键。 1．tRNA的二级结构 三叶草型 （1）aa接受臂amino acid arm（2）二氢尿嘧啶环 dihydrouridine loop, DHU loop（3）反密码环 anticodon loop（4）额外环 extra loop（5）TψC环（TψC loop） nullnullnullnullnullnull 1980年，牛心线粒体tRNAser只有63个核苷酸，沉降常数3S，缺少D环和D臂，呈二叶草型。 近年，发现2种线虫线粒体tRNA也不是 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 的三叶草结构。 null2．rRNA的二级结构 nullnullnullnull3．mRNA的二级结构 The secondary structure of HEC-SOD’s mRNA. the free energy of result is –587.9J. 对编码成熟肽的ｍＲＮＡ二级结构的分析显示，每个密码子在ｍＲＮＡ二级结构中的位置有一定的倾向性，这种倾向性似乎与相应氨基酸的构象性质相一致。大多数编码疏水氨基酸的密码子位于ｍＲＮＡ二级结构中较稳定的茎区；反之，大多数编码亲水氨基酸的密码子位于柔性的环区。这个结果支持了最近得到的关于ｍＲＮＡ与蛋白质之间存在丰三维结构信息传递的结论。 null（四）RNA的三级结构 tRNA的三级结构 nullnullnullnullnull3.3 DNA的结构和功能一、DNA是主要的遗传物质nullnullnullnullnullnullnull1944年Avery细菌转化实验 转化作用的物质称转化因子 转化作用：从一种细菌中得到DNA通过一定途径进入另一种细菌，从而引起后者遗传特性的改变。 null 1952年美国Hershey 噬菌体感染实验 nullnullnull DNA的碱基组成特点——Chargaff定律 （1）碱基当量定律：嘌呤碱总量=嘧啶碱总量，即 A+G=T+C (2)不对称比率A+T/G+C因物种（亲缘关系远近）而异脱氧核苷酸的排列顺序 ——核酸中的可变成分（碱基）的排列顺序 一级结构的表示方法 ——线条式/字母式/结构式 DNA的一级结构是由数量极其庞大的四种脱氧核糖核酸（dAMP、dGMP、dCMP、dTMP）按一定顺序，通过3´,5´磷酸二酯键连成的直线形或环形分子。二、DNA的一级结构Primary structure nullnullnullnullnullDNA分子中核苷酸的排列顺序：英国Sanger ，1975年加减法，1977年末端终止法 美国Maxam和Gilbert，1977年化学断裂法 DNA分子中核苷酸的排列顺序：酶法（双脱氧法、末端终止法）nullnull三、DNA的二级结构 DNA的双螺旋结构三、DNA的二级结构 nullDNA碱基组成有种的特异性，但没有组织、器官特异性。 A+G=T+C nullnull提出DNA双螺旋结构模型的根据：x-光衍射分析， 20世纪40年代Astbury， 1952年M.Wilkins nullDNA双螺旋结构模型（double-helical structure） null ① DNA分子是由两条平行的多核苷酸链组成，它们围绕同一中心轴以相反的走向平行旋绕而成右手双螺旋结构。 ②在同一条链上，每隔10个碱基，多核苷酸链即旋转一圈，每一圈的螺距为3.4nm，螺旋直径为2.0nm。 ③两条长链的碱基在螺旋内侧，碱基平面与中心轴相垂直，它们通过嘌呤碱基和嘧啶碱基之间形成的氢键而固定下来。 由于螺旋圈的直径是一定的，因此两条链上的碱基以一定规律相互配对。在DNA双螺旋结构中只能A与T、G与C之间配对，这一规律称碱基配对原则或叫碱基互补原则。1. DNA的双螺旋结构nullnullnullnullnullnull稳定DNA双螺旋结构的化学键：（1）互补碱基对之间的氢键 （2）碱基堆积力（base-stacking forces） （3）磷酸基上的负电荷与介质中的阳离子之间形成的离子键。null2．DNA双螺旋的种类 B型DNA ：Watson Crick DNA双螺旋结构盐的种类改变nullnullnullnullA-DNA： 与B-DNA相同处：反向的两条多核苷酸链，右手螺旋。与B-DNA不同点 : （1）螺体宽而短，直径2.55nm；11个核苷酸一圈，螺距2.46nm。 （2）碱基的倾角大一些：倾角19º。 RNA分子中的双螺旋区；DNA-RNA杂交分子。 A-DNA和B-DNA之间可以相互转换，推测在转录时，DNA分子发生B→A的转变。 不同DNA纤维的空间结构 nullnullC型DNA的一些数据与B型DNA很相似。 C-DNA： 1979年，美国A·Rich等人发现了左旋DNA（左手DNA双螺旋结构），Z- DNA。晶体X-光衍射分析 d(Cp Gp Cp Gp Cp ­Gp)Z-DNA：与基因表达、基因调控有关nullDNA的其它螺旋结构DNA的其它螺旋结构回文结构 镜像重复 三股螺旋（H-DNA） 回文结构：DNA序列中以某一中心区域为对称轴，其两侧的碱基对顺序正读和反读都相同的双螺旋结构。即对称轴一侧的 片段旋转180°后，与 另一侧片段对称重复。 能形成十字结构和发夹结构nullAATTCAAGGGAGAAGTATAGAAGAGGGAAGGATC TTAAGTTCCCTCT TCATATCT TCTCCCTTCCTAG镜像重复 存在于同一股上的某些DNA区段的反向重复序列。此序列各单股中没有互补序列，不能形成十字型或发夹结构。也称反向重复（inverted repeats）回文结构（palindromic structure） null发夹形和十字形null三螺旋DNA 四、DNA的三级结构四、DNA的三级结构 双螺旋进一步扭曲形成的超螺旋。是一种比双螺旋更高层次的空间构象。线状DNA形成的纽结、超螺旋和多重螺旋、环状DNA形成的结、超螺旋和连环等。负超螺旋 正超螺旋线状DNA形成的超螺旋线状DNA形成的超螺旋环状DNA形成的超螺旋环状DNA形成的超螺旋nullnull结构紧密，粘度较低，浮力密度大，沉降速度快。超螺旋DNA的性质共价闭合环状null2. 四螺旋DNA DNA 双链线状 双链环状 单链线状：动物病毒MVM 单链环状：噬菌体φX174 真核细胞染色体DNA 噬菌体T2，T5，T7，λ，P22 E-Coli染色体DNA 线粒体DNA 叶绿体DNA 多瘤病毒DNA，病毒SV40DNA 噬菌体λ和φX174的复制型 噬菌体T2结构示意图噬菌体T2结构示意图null噬菌体T2DNA长约50μm E-coli DNA 长约1mm 人生殖细胞DNA长约1m 双链环状DNA（double stranded cyclic DNA, DSCDNA） 双链环状DNA在自然界是广泛存在的，如一些病毒DNA、一些噬菌体DNA、细菌质粒DNA、线粒体和叶绿体DNA等。 开环DNA（open circular DNA, ocDNA）也称松环DNA（relaxed circular DNA, rcDNA）null连环DNA（Catenanes DNA） TMV病毒颗粒结构示意图TMV病毒颗粒结构示意图核酸蛋白质复合体核酸蛋白质复合体病毒（核酸在内，蛋白质在外） 染色体（核酸在外，蛋白质在内） 核糖体（60%的rRNA,40%的蛋白质)核小体的结构核小体和染色质核小体和染色质染色质染色质核小体构成 的染色质丝核小体构成 的染色质丝核糖体核糖体真核细胞染色体DNA结构1．重复序列 （repeated sequence ） （1）高度重复序列（highly repeated sequence） 卫星DNA（satellite DNA） 基因组（genome）真核细胞染色体DNA结构主体DNA（bulk DNA） 卫星DNA（satellite DNA） null（2）中度重复序列（moderately repeated sequence） （3）单一序列（unique sequence） 转导作用（transduction） 人工合成基因的表达 2. DNA与遗传性疾病、癌变的关系（1）镰刀状红细胞贫血病的DNA点突变（2）白化病的基因缺失（3）癌变nullnull3.4 核酸和核苷酸的性质2.晶形：DNA为白色纤维状固体；RNA为白色粉末状固体 3. 溶解性：不溶于一般有机溶剂，微溶于水，但它们的钠盐在水中溶解度较大。在70%乙醇中形成沉淀； 在0.14MNaCl 和 1~2MNaCl中 DNA-蛋白(DNP) 溶解度低 溶解度高 RNA-蛋白(RNP) 溶解度高 溶解度低 4.粘度 DNA粘度很大 RNA粘度小得多 5.旋光性 均很强1. 分子大小：DNA Mr 106～1010或更大RNA Mr 104～106或更大 核苷酸＞核苷＞碱基0.14mol/L 分离法null用1～2个已知浮力密度的标准DNA样品作参考 式中 ρ：未知DNA的密度 ρ0：标准DNA的密度 ω：角速度（弧度/秒） r： 未知DNA与转轴之间的距离 r0：已知DNA与转轴之间的距离 核酸浮力密度的测定 浮力密度：经密度梯度沉降平衡法测出的密度 氯化铯（CsCl）密度梯度沉降平衡 6. 密度及沉降性nullnull密度： RNA>双链DNA； 环状DNA >开环、线状DNA 单链DNA >双链DNA核酸的构象和分离沉降速度： RNA >环状DNA >线状DNA >蛋白质null7. 核酸的两性解离酸碱性质8. 紫外吸收 由于核酸中嘌呤和嘧啶碱基的共轭双键，所以对紫外有强烈吸收，最大吸收峰在260nm附近，利用这一特性可进行核酸的定性、定量测定。 根据pKa差进行分离。 生理条件下，核酸是阴离子型多元酸。nullnull四种单核苷酸吸收光谱的标准比值 光密度 比值pH核苷酸单独分开时，max 和 min有区别：nullnullOD260=A260：样品在260nm处的吸收值 E260：所测核苷酸的摩尔消光系数 C： 核苷酸样品的浓度（mg/ml） null样品中含有杂蛋白或苯酚，则OD260/OD280比值明显降低null纯的核酸样品可根据260nm的光吸收值算出其含量若260nm光吸收值为1相当于50μg/ml双螺旋DNA或相当于40μg/ml单链DNA或RNA或相当于20μg/ml寡核苷酸。9. 核酸含量问题：null也可以根据摩尔磷消光系数（molar absorptivity）计算A或OD：样品的光吸收值 C：每升溶液中磷的摩尔数 L：光径 知道了磷的含量就可知核酸的含量null10. DNA中G-C含量的测定 G-C对的含量与浮力密度之间呈正比关系 Rolfe-Meselson导出了如下公式： ρ=0.100（G-C%）+1.658(g/cm3) 知道了浮力密度就可计算出G-C对的含量 二、DNA 的变性denaturation、复性及分子杂交二、DNA 的变性denaturation、复性及分子杂交1. 变性 不同于蛋白质变性。核酸的变性往往是功能必须（如，复制期、转录期、损伤修复、基因表达等）。null增色效应（hyperchromic effect） 紫外吸收↑ 比旋光度↓ nullnull（1） 热变性:结构：螺旋→线团 nullnull（2） 熔点（Tm） 熔解温度，变性温度，解链温度，融熔温度 null双链DNA50%增色效应单链DNAnull（3）影响Tm值的因素 ① DNA的均一性则窄；② DNA中G-C对的含量 经验式: (G-C)%=(Tm-69.3)×2.44 ③ 盐离子强度 含量高则温度高，正比低则温度且变宽DNA分子大小 pH一般DNA 的Tm是70-850Cnullnull2．复性（renaturation） （1）复性 也称退火annealing 生物活性得到部分恢复 减色效应（hypochromic effect） null（2）影响复性的因素 ① 样品的性质，G、C含量高则难； ② DNA的浓度，高则容易；③ DNA片段的大小 ④ 温度 ⑤ 离子强度 DNA 的变性和复性DNA 的变性和复性可逆变性与复性nullnull3. 核酸的分子杂交nullnull核酸的杂交：不同来源的单链核酸之间可通过碱基互补形成双螺旋结构。 单链DNA与单链DNA杂交（DNA-DNA）利用核酸杂交可检测特定的核苷酸片段或研究同源性等。单链DNA与单链RNA杂交（DNA-RNA）单链RNA与单链RNA杂交（RNA-RNA）null用硝酸纤维素膜作为支持物进行杂交 1975年英国E. M. Southern首创的Southern blotting（Southern印迹）核酸探针：作为检测用的已知DNA序列或RNA序列的片段 null1977年G.K.Stark首创Northern blotting （Northern印迹） Western blotting（Western 印迹） nullnullnull核酸的酸解和碱解核酸的酸解和碱解三、核酸的水解和核酸酶类null核酸酶类包括核酸水解酶、合成酶、连接酶等。 nullnullnull1. 核酸水解酶的分类 (1)．底物：核糖核酸酶（ribonuclease, RNase） 脱氧核糖核酸酶（deoxyribonuclease, DNase） (2) ．作用方式：核酸内切酶（endonuclease）(3) ．按磷酸二酯键断裂的方式 (4) ．其它：如双链酶、单链酶等 核酸外切酶（exonuclease）null2. 核糖核酸酶类 （1）．牛胰核糖核酸酶 （pancreatic ribonuclease, 简称RNase A或RNase I） null（2） 核糖核酸酶T1（ribonuclease T1，简称RNase T1） null（3） 核糖核酸酶T2（ribonuclease T2，简称RNase T2） 主要作用点为Ap残基，水解速度A>>U>G>C null3. 脱氧核糖核酸酶 （1）．牛胰脱氧核糖核酸酶 （pancreatic deoxyribonuclease简称DNase I） null（2）．牛脾脱氧核糖核酸酶 （spleen deoxyribonuclease, 简称DNase II） null（3）．限制性内切酶（restriction endonuclease） 简称限制酶 限制性内切酶主要降解外源的未经特殊修饰的DNA，对自身起了保护作用。（A）限制性内切酶的特征 ① 具有严格的碱基专一性，有专一的识别顺序、切点 ② 粘性未端，平整末端 null（B）限制性内切酶举例 nullnull4. 非专一性核酸酶类（nonspecific nuclease） 二种外切酶 （1）．蛇毒磷酸二酯酶（venom phosphodiesterase） 5-核苷酸蛇毒磷酸二酯酶对末端磷酸基有严格的要求 null橘青霉磷酸二酯酶专一性： 与蛇毒磷酸二酯酶相同 （2）．牛脾磷酸二酯酶 对末端磷酸基的要求与蛇毒磷酸二酯酶相反 +3´-核苷酸null5. 磷酸单酯酶 将单核苷酸或寡核苷酸末端的磷酸单酯键切开，得到磷酸和其它产物。（1）．特异性磷酸单酯酶 （2）．非特异性磷酸单酯酶 磷酸基无论在3´或5´位，都能水解，如E. coli磷酸单酯酶 四、核酸的颜色反应四、核酸的颜色反应1. 钼蓝反应（核酸中磷酸的反应） Pi + (NH4)3MoO4 + Vc 钼蓝（蓝色）2. 苔黑酚反应（RNA中核糖的反应） RNA + 浓Hcl +苔黑酚 蓝绿色3. 二苯胺反应 DNA + 二苯胺+ 浓H2SO4 蓝色物null五、凝胶电泳与核酸研究核酸研究中最常用的方法 优点：简单、快速、灵敏、成本低。 通过凝胶电泳： （1）可进行核酸分离，知道核酸的纯度。 （2）测定分子大小。 （3）估计核酸的构象。 null凝胶电泳兼有分子筛效应和电荷效应 1．琼脂糖凝胶电泳（agarose gel electrophoresis） 琼脂糖凝胶电泳的迁移率主要与分子大小、胶浓度、核酸构象、电流等有关。 2．聚丙烯酰胺凝胶电泳 （polyacrylamide gel electrophoresis） 用于分析RNA或Mr小于1000bp的DNA片段 适用于大分子核酸，一般用于DNA分析。 null3.5 核酸及其组分的分离纯化（一）核酸的分离、提取通则 为了得到完整的大分子核酸，一般要注意三点 :1．保持低温（0º～4℃）。 2．防止过酸、过碱等化学因素，避免剧烈搅拌等物理因素。 3．防止核酸酶的作用。 null抑制DNase： 可加柠檬酸钠、EDTA等金属螯合剂；或加去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）；或加蛋白变性剂。 抑制RNase： （1）实验器皿高温，或高压灭菌，不能高压灭菌的用具用0.1%二乙基焦碳酸盐（diethyl pyrocarbonate, DEPC）处理。 （2）加入强的蛋白变性剂如硫氰酸胍、异硫氰酸胍等。 （3）加核糖核酸酶阻抑蛋白（RNasin）等RNase抑制剂。 null（二）大分子DNA的提取 1．材料的选择 2．细胞破碎 3．DNA-蛋白质（DNP）的提取 真核细胞DNA与蛋白质结合成核蛋白（DNP），RNA与蛋白质结合成RNP，而且DNP和RNP常常混在一起。利用DNP和RNP在不同浓度NaCl中溶解度的不同来分离DNP和RNP。 0.14mol/L法 可用1mol/LNaCl溶液提取DNP。 DNP在NaCl中的溶解度null4．去蛋白质 （1）SDS （2）苯酚法 （3）氯仿法 （4）酚:氯仿:异戊醇＝25:24:1 5．沉淀DNA 6．去杂质 （1）去RNA （2）去多糖 null7．进一步纯化 生物材料 DNP(RNP) DNP 纤维状DNA 较纯DNA 纯DNA 原核生物的DNA是裸露的，与蛋白质结合不多，分离纯化要简单些。 null（三）RNA的提取 1．不同种类RNA的提取 2．大分子RNA的提取 （1）酚提取 （2）酚-氯仿-SDS法 3．mRNA的提取 null4．工业上制备RNA （1）稀碱法 （2）浓盐法 null（四）核酸纯度鉴定 1.A260/A280 2.电泳 （五）核酸含量的测定 1.定磷法 2.定糖法 3.紫外吸收法 null（六）核苷酸的制备 1．碱水解 2．酶水解 3. 自溶法