IC50曲线的测定IC50即半抑制率,
标准
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曲线是一个S型曲线。IC50为50%抑制浓度即细胞存活量为对照样本一半时所对应的浓度,半数抑制越低,说明药物对细胞的毒性越高。实验操作步骤如下:1.细胞准备:A.细胞状态
检测
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:从培养箱中取出细胞,显微镜下观察。状态描述:观察结果,细胞汇合度:B.细胞处理:将细胞培养基吸出后,加入2mlPBS缓冲液洗一次,加入1ml0.25%Trypsin-EDTA,放入培养箱中静置数分钟,直至细胞完全离壁悬浮,加入5ml含10%FBS的培养基(无抗生素)终止酶活,混匀后液体转移至15ml离心管,1000rpm离心3min,弃去液体。C.细胞计数:于15ml离心管中加入1ml含10%FBS的培养基(无抗生素),充分混匀。取40ul计数,公式如下:细胞浓度(数/ml)=(4大方格细胞数之和/4)×104×稀释倍数最终得到的细胞密度填入下表,根据最终需要细胞浓度及体积进行稀释。 细胞数/孔 起始浓度(/ml) 所需体积(ml) 需20%FBSDMEM(ml) 总体积 终浓度(/ml) 细胞株名 D.稀释细胞2.将稀释好的细胞用排枪加至96/384孔板:置于培养箱37℃5%CO2条件下培养24小时,待细胞贴壁后加药。3.药物稀释:将药物进行3倍倍比稀释。4.将稀释好的药物加入前一天铺好细胞的细胞板上,37℃5%CO2培养箱培养72h。5.荧光素酶检测:将Celltiter-Glo与ddH20以1:1混合,加入细胞板(96板:20ul/well;384板:10ul/well),静置10min后,TECANinfiniteF200酶标仪读值。6.
分析
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数据,绘制IC50曲线,寻找IC30,IC50等值。7.验证IC50:根据IC50曲线找出IC50理论值,分别取1/2倍、1倍及2倍的理论值进行药物浓度验证。附录:MaterialsforExperiment Name Corporation 96-wellplate Corning 384-wellplate Greiner CentrifugeTube(15ml) BDFalcon Pipets(10ml) Greiner T-25Flask Corning Tips,EPTube Axygen,MatrixReagentsforExperiment Name Corporation FBS Excell DPBS Hyclone 0.25%Trypsin-EDTA GIBCO Medium Hyclone Cell-TiterGlo™ PromegaInstrumentsforExperiment Name Model Corporation InvertedMicroscope TS100 Nikon CO2Incubator BB16UV Heraeus Bechtop ZHJH-1109 ZHCHENG Centrifuge 5200 KUBOTA MicroplateReader infiniteF200 TECAN Dispenser μFill Bio-Tek