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高效液相色谱一质谱联用技术.pdf

高效液相色谱一质谱联用技术

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2009-11-02 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《高效液相色谱一质谱联用技术pdf》,可适用于自然科学领域

第卷第期年月分析试验室ChineseJoumalofAnalysisVo..No.Cr高效液相色谱一质谱联用技术测定人血浆中的西替利嗪喻凌寒。温预关宋之光牟德海苏流坤杨运云(.广东省化学危害应急检测技术重点实验室中国广州分析测试中心广州.中国科学院广州地球化学研究所有机地球化学国家重点实验室广州.中国科学院研究生院北京.广州市脑科医院国家药品临床研究基地广州)摘要:建立了人血浆中西替利嗪的液相色谱.质谱联用测定方法。血浆样品调至pH经(乙酸乙酯):V(CHC)=:液一液提取后以AgilentZorbaxSBC(.m//l×m//li.d..ffm)柱为色谱柱流动相为(乙腈):V(%甲酸水)=:溶液流速为.mL/min柱温:C进样量:在AgilentLC/MSDXCT离子阱质谱仪上以多重反应离子(nRn)方式进行定量分析用于监测的离子为m/z(西替利嗪)和m/z"(替米沙坦内标物)。西替利嗪的检出限为.ffg/L(S/N=)线性范围为.~ffg/L方法回收率在.%~.%之间(/Z=)精密度与准确度符合生物样品分析要求。该法可用于西替利嗪临床血药浓度和药代动力学研究。关键词:西替利嗪液相色谱.质谱法药代动力学中图分类号:.R文献标识码:A文章编号:()盐酸西替利嗪(cetirizinehydrochloride)是第一代抗组胺药羟嗪的活性羧酸衍生物为选择性高的第二代H.受体拈抗剂具有较强的抗过敏作用作用强而持久能抑制肥大细胞脱颗粒抑制嗜酸细胞向过敏反应部位移动和对皮肤组织的浸润无明显的中枢抑制副作用。西替利嗪是第一代H受体羟嗪的活性羧酸代谢物在体内不易被细胞色素P所代谢大部分经肾脏以原型药物排出。目前已在国内外获准上市临床主要用于防治(季节性和非季节性)过敏性鼻炎、慢性特发性荨麻疹、过敏性哮喘、特异性皮炎等疾病。在此之前的研究中测定人体内西替利嗪的方法一般为高效液相色谱.紫外检测或荧光检测lJ灵敏度低达不到血浆中微量西替利嗪的检测要求。此外紫外检测缺乏特异性不能完全排除内源性物质的干扰。因此本文在前人的研究基础上建立了测定人体内西替利嗪浓度的液相收稿日期:修订日期:作者简介:喻凌寒(一)男工程师色谱.串联质谱方法(HPLC.MS/MS)检出限为.ffg/L并用于西替利嗪片剂在人体内的药代动力学研究以及生物等效性研究。实验部分.药品与试剂盐酸西替利嗪标准品(批号):纯度≥.%浙江浙北药业有限公司提供内标物:替米沙坦对照品(批号):纯度≥.%北京德众万全药物技术开发公司提供乙腈(色谱纯迪马公司)水为重蒸去离子水乙酸乙酯、CHCl、枸橼酸钠、枸橼酸均为分析纯由广州市化学试剂厂提供。.仪器安捷伦LC/MSDXCT离子阱质谱仪配有电喷雾离子源及AgilentChemStations数据处理软件Agilent高效液相色谱系统电子天平(瑞士SARTORIUS)XW一A旋涡混合器(原上海医科一维普资讯http:wwwcqvipcom第卷第期年月分析试验室ChineseJournalofAnalysislaboratoryV..No.r大学仪器厂)高速离心机(美国MICRO)真空干燥箱(德国MMMGROUP)。.色谱条件色谱柱:AgilentZorbaxSBC(.mlnxmlni.d../xrn)流动相:(乙腈):V(%甲酸水)=:溶液流速:.mJmin柱温:oC进样量:。.质谱参数离子源为电喷雾离子源(ESI)毛细管电压(Capillary)V毛细管出口电压(CapillaryExit).v雾化气压力(Nebulizer):.XPa干燥气流量:L/min干燥气温度:oC离子化模式:正离子化(positive)扫描方式为多重反应监测(MRM)。用于定量分析的离子分别为m/z(西替利嗪)和m/z(替米沙坦)。.对照品溶液及内标溶液准确称取盐酸西替利嗪标准品适量(相当于西替利嗪.mg)置于mL容量瓶中用(乙腈):V(水)=:混合溶液定容即配制成.g/L的西替利嗪贮备液贮存于cI=冰箱避光保存备用。试验前按试验所需稀释成相应浓度的标准工作液。另配制tLg/L的内标替米沙坦乙(a).O\、【~。。H.f⋯lt腈溶液。.血浆样品处理取含药血浆.mL的带塞磨口玻璃锥形离心管中加入tLg/L的替米沙坦乙腈溶液快速振荡s加入.mol/L枸橼酸钠水溶液(pH).mL振荡s再加入(乙酸乙酯):(cHC)=:混合溶液mL密塞旋涡振荡minr/min下离心min吸取有机层置mL的带塞磨口玻璃锥形离心管内cI=真空干燥箱中干燥至干。进样前加入(乙腈):(水)=:混合溶液tLL快速振荡s使残渣溶解r/min下离心min吸取上清液进样。结果与讨论.质谱分析西替利嗪和内标物替米沙坦在电喷雾离子化方式下主要生成MH准分子离子峰分别为m/z和m/z。对MH进行产物离子扫描(见图)生成的主要碎片离子分别为m/z(西替利嗪)和m/z(替米沙坦)将这些主要碎片离子作为定量分析时监测的产物离子。OOOm/zI~l/Z图西替利嗪(a)和内标物替米沙坦(b)的二级质谱图.ThefullMSMSspectraofcelirhfme(a)andtelnfisartan(b).方法专属性分别取名受试者的空白血浆.mL分别按照上述的血浆样品前处理操作进行分析。结果表明空白血浆样品中内源性物质不干扰西替利嗪及内标替米沙坦的测定。志愿者给药后采集的血浆样品色谱图见图。OO一维普资讯http:wwwcqvipcom第卷第期年月分析试验室ChineseJournalofAnalysislaboratoryV..No.r..。lO.O.............m/Zm/z图多重反应监测模式下西替利嗪(a)和内标物替米沙坦(b)的离子流程图Fig.Chromatogramsofcefirizineandtelmisartan(Is)bymultiplereactionmonitoring(MRM)scanmode.Bloodpla~aasampleafterintranasaladministration.标准曲线和线性范围取空白血浆.mL共份分别加入、、、、、、和t~g/L的西替利嗪标准溶液(式份)振荡s使血浆药物浓度相当于、.、.、.、.、、和Ot~g/L然后按“.血浆样品处理”项处理。经HPLC.MS/MS分析以血浆西替利嗪质量浓度()为纵坐标药物西替利嗪峰面积与内标峰面积之比(F)为横坐标用最小二乘法进行回归分析结果表明血浆中西替利嗪质量浓度在.~t~g/L范围呈良好的线性关系回归方程及相关系数分别为:P=.F.r=.(rt=)。最低定量下限浓度为.t~g/L平行对浓度为.t~g/L的个含药血浆样品处理后进行色谱分析其提取回收率平均为.%RSD为.%。检出限为.L(S/N=)。.回收率及精密度试验按.节分别配制低(.L)、中(g/L)和高浓度(,g/L)的西替利嗪血浆溶液各份分为批每批份并与每批的标准曲线同时进行检测依“.血浆样品处理”项处理后进行分析。同时将空白血浆加入溶剂萃取处理后再加入相应浓度的西替利嗪和替米沙坦按.节处理后进样分析。以每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算提取回收率见表。结果表明本法的回收率稳定能满足样品分析的需要。表LCMS检测血浆中的西替利嗪的回收率与日内、日间精密度Tab.RecoveryandprecisionoftheLCMSmethodfordeterminationofcetirizineinhumanplasma.稳定性按.节分别配制低(.L)、中(,g/L)、高浓度(t~g/L)的质控样品每个浓度样品分析分为两组每组每个浓度个样品。考察了样品分别经室温放置h和h、一oC下冻存d和d、冻融次的稳定性。不同浓度样品检测结果的RSD均小于%。.质控样品的制备和控制方法按.节分别配制低(.,g/L)、中(,glL)、高浓度(,g/L)的血浆样品置一(】o【=冻存备用。检测每批血浆样品前需做随行标准曲线并同时检测质控样品。结果表明随行标准曲线线一Oll{一一维普资讯http:wwwcqvipcom第卷第期OO年月分析试验室ChineseJournalofAnalysislaboratoryVo..No.r性良好低、中、高个浓度质控样品的偏差均在%内符合体内药物分析要求本试验血浆样品的测定结果准确、可靠。.在药代动力学研究中的应用经医学伦理委员会批准选择健康志愿者名空腹h分别:服西替利嗪ng于给药前h及给药后.....及h经静脉留置针取前臂静脉血roL次cc离心分离血浆按“血浆样品前处理”方法进行色谱分析。将受试者单剂量试验后的血药浓度列表并计算均值及标准差绘制£COollllt/h图西替利嗪的平均血药浓度一时间曲线Fig.Meanpla~naconcentrationtimecurveofcelJrizineafteroraladmlnistralionofadoseofmgtohealthyvolunteers血药浓度一时间曲线如图所示。结论本文建立的LCMS方法采用MRM(多重反应监测)扫描方式同时对待测物的母离子和产物离子进行检测提高了方法的灵敏度和选择性(检出限为.L)样品分析时间短。西替利嗪为碱性化合物本文考察了不同碱化试剂对样品回收率的影响发现血浆样品经.mol/L枸橼酸钠水溶液碱化处理后经(乙酸乙酯):V(CHClz)::提取可获得稳定的提取回收率。同时采用乙酸乙酯一CHClz混合提取溶剂还易于操作缩短样品处理周期。参考文献ChongKookKim.KyuJeongYeonetal.JPharmaceuticalandBiomedicalAnalysis():JMoncfieff.JournalofChromatography:BiomedicalApplications():MTRosselRALefebvre.JChromatogr:BiomedicalApplications():ADdeJagerHKLHundtetal.JChromatogrB():孙黎刘晓琰费艳秋等.医药导报():姜云平曾仁杰吴苏澄等.中国医院药学杂志():DeterminationofcetirizineanditspharmacokineticsinHumanplasmaafteroraladministrationusingLCMSYULinghan’WENYuguanSONGZhiguangMUDehaiLiukunandYANGYurt)qtrt(.GuangdongKeylaboratoryofChemicalEmergencyTestChinaNationalAnalyticalCenterGuangzhou.StateKeyLaboratoryofOrganicGeochemistryGuangzhouInstituteofGeochemistryChineseAcademyofSciencesGuangzhou.GraduateSchoolofChineseAcademyofSciencesBeijing.DepartmentofClinicalPharmacologyGuangzhouBrainHospitalGuangzhou)FenxiShiyanshi():~Abstract:ArapidandsensitiveHPLC.MSmethodfortheanalysisofcetirizineinhumanplasmaafterintranasaladministrationWasdeveloped.Cetirizineandtelmisartan(internalstandardIS)wereextractedfromplasmasamplesandchromatographiedonaAgilentZorbaxSBC(.rain×ln/n.tan)columnanddetectedusingatandemmassspectrometerwithanESIinterfacewithamobilephaseofacetonitrile一%formicacidsolution(:byvolume)ataflowrateof.mL/min.AninjectionvolumeofLWasused.QuantitaionWasperformedusingmultiplereactionmonitoring(MRM)ofthem/z~forcetirizineandm/zfortelmisartan.ThelimitofquantificationofthemethodforcetirizineWas.ptg/L.Theanalyticalmethodforcetirizineisshowntobeaccuratesen’sitiveandsuitableforclinicalphannacokineticstudyofcetirizine.Keywords:Cetirizine:PharmacokineticsHPLC.MS一维普资讯http:wwwcqvipcom

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