ICS
C 5
07. 100.30
中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准
GB/T 4789.15-2003
代替GB/T 4789.15-1994
食品卫生微生物学检验
霉菌和酵母计数
Microbiological examination of food hygiene-
Enumeration of molds and yeasts
2003-08-11发布 2004-01-01实施
中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 *众
中国国家
标准
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化管理委员会 ‘ ’.‘
GB/T 4789.15-即03
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本标准对GB/T 4789. 15-1994《食品卫生微生物学检验 霉菌和酵母计数》进行修订。
本标准与GB/T 4789.15-1994相比主要修改如下:
— 按照GB/T 1. 1-2000对标准文本的格式和文字进行修改。
— 修改并规范原标准中的“设备和材料”。
— 删去培养基和试剂中“4. 3 高盐察氏培养基”。
本标准自实施之日起,GB/T 4789. 15-1994同时废止。
本标准的附录A是资料性附录。
本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。
本标准起草单位:中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。
本标准主要起草人:罗雪云、李风琴、李玉伟。
本标准于1984年首次发布,1994年第一次修订,本次为第二次修订。
GB/T 4789.15-2003
食品卫生微生物学检验
霉菌和酵母计数
范围
本标准规定了各类粮食、食品和饮料霉菌和酵母菌计数的检验
方法
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。
本标准适用于各类食品和饮料中霉菌和酵母菌的计数。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有
的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成
协议
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的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T 4789. 2 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定
GB/T 4789. 28---2003 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂
3 设备和材料
3.1 冰箱:0℃一40C。
3.2 恒温培养箱:250C ^-28 C ,
3.3 恒温振荡器。
3.4 显微镜:lox-loox。
3.5 架盘药物天平:0 8-500 g,精确至0.5 g,
3.6 灭菌具玻塞锥形瓶:300 mLo
3.7 灭菌广口瓶:500 mLo
3.8 灭菌吸管:1 mL(具0. 01 mL刻度),10 mL(具0. 1 ml,刻度)。
3.9 灭菌平皿:直径90 mm.
3. 10 灭菌试管:16 mm X160 mm.
3. 11 载玻片、盖玻片。
3. 12 灭菌牛皮纸袋、塑料袋。
3. 13 灭菌金属勺、刀等。
4 培养基和试剂
4.1
4.2
4-3
马铃薯一葡萄糖琼脂培养基,附加抗菌素:按GB/T 4789. 28-2003中4.78规定。
孟加拉红培养基:按GB/T 4789. 28-2003中4.80规定。
灭菌蒸馏水。
5 检验程序
检验程序见图
GB/T 4789.15-2003
检 样
粮 t 块状食品 粉状食品 液状食品 枷 状食 品
25 g+225 mL无菌水 25 mL+225 mL无菌水
做成几个适当倍数的栩释液
选择三个适宜稀释度,各取1 ML加入灭,平皿内
每皿加入适t培养基 (可选用马铃拼一葡萄呀
玻脂附加杭菌贵、高盆察氏培养墓或孟加拉红培养荃)
25r,- 28r- 15 d
苗落计敬
报 告
圈 1
6 操作步骤
6.1 以无菌操作称取检样25 g(mL),放人含225 ml.灭菌水的具玻塞锥形瓶中,振摇30 min,即为
1:10稀释液。
6.2 用灭菌吸管吸取1,10稀释液10 mL,注人灭菌试管中,另用1 mL灭菌吸管反复吹吸50次,使霉
菌抱子充分散开。
6.3 取1mL1,10稀释液注人含有9 mL灭菌水的试管中,另换一支1 mL灭菌吸管吹吸五次,此液
为1:100稀释液。
6.4 按上述操作顺序做10倍递增稀释液,每稀释一次,换用一支1 mL灭菌吸管,根据对样品污染情
况的估计,选择兰个合适的稀释度,分别在做10倍稀释的同时,吸取1 mL稀释液于灭菌平皿中,每个
稀释度做两个平皿,然后将晾至45℃左右的培养基注人平皿中,并转动平皿使之与样液混匀,待琼脂凝
固后,倒置于250C ---280C温箱中,3d后开始观察,共培养观察5 d.
6.5 计算方法:通常选择菌落数在10^-150之间的平皿进行计数,同稀释度的两个平皿的菌落平均数
乘以稀释倍数,即为每克(或毫升)检样中所含霉菌和酵母数。稀释度选择及菌落报告方式可参考
GB/T 4789. 2,
6.6 报告:每克(或毫升)食品所含霉菌和酵母数以cfu/g(ml,)表示。
7 耳菌直接镜检计数法
霉菌直接镜检计数法见附录Aa
GB/T 4789. 15-2003
附 录 A
(资料性附录)
.菌直接锐检计数法
常用的为郝氏霉菌计测法,本方法适用于番茄酱罐头。
A. 1
A.1.1
A 1.2
A. 1. 3
A. 1. 4
A. 1. 5
设备和材料
折光仪。
显微镜。
郝氏计测玻片:具有标准计测室的特制玻片。
盖玻片。
测微器:具标准刻度的玻片。
A. 2 操作步骤
A. 2. 1 检样的制备:取定量检样,加蒸馏水稀释至折光指数为1. 344 7~ 1. 346 0(即浓度为7.9%一
8.80o),备用。
A. 2.2 显微镜标准视野的校正:将显微镜按放大率 90倍一125倍调节标准视野,使其直径为
1. 382 mm.
A.2.3 涂片:洗净郝氏计测玻片,将制好的标准液,用玻璃棒均匀的摊布于计测室,以备观察。
A.2.4 观测:将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉菌观测,一般每一检样观察 50个视野,同
一检样应由两人进行观察。
A. 2.5 结果与计算:在标准视野下,发现有霉菌菌丝其长度超过标准视野(1. 382 mm)的六分之一或
三根菌丝总长度超过标准视野的六分之一(即测微器的一格)时即为阳性(+),否则为阴性(一),按100
个视野计,其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数,即为霉菌的视野百分数。