10020701课件_生物化学_第1章_蛋白质化学

nullnull第一章 蛋白质化学 蛋白质的生物学意义 蛋白质的元素组成蛋白质的氨基酸组成肽蛋白质的结构蛋白质分子结构与功能的关系蛋白质的性质蛋白质的分类null蛋白质 是由许多不同的α-氨基酸按一定的序列通过酰胺键（肽键）缩合而成的，具有较稳定的构象并具有一定生物功能的大分子。null一、蛋白质的生物学意义1. 生物体的组成成分2. 酶3. 运输4. 运动5. 抗体6. 干扰素7. 遗传信息的控制8. 细胞膜的通透性9. 高等动物的记忆、识别机构null二、蛋白质的元素组成C（50~55%）、H（6~8%）、O（20~23%）、N（15~18%）、 S（0~4%）、…N的含量平均为16%——凯氏（Kjadehl）定氮法的理论基础null三、蛋白质的氨基酸组成氨基酸 是蛋白质的基本组成单位。从细菌到人类，所有蛋白质都由20种标准氨基酸（20 standard amino acids)组成。（一）氨基酸的结构通式：19种氨基酸具有一级氨基（-NH3+）和羧基（-COOH）结合到α碳原子（Cα），同时结合到（Cα）上的是H原子和各种侧链（R）；Pro具有二级氨基（α-亚氨基酸）nullCα如是不对称C（除Gly），则： 具有两种立体异构体 [D-型和L-型] 2. 具有旋光性 [左旋（-）或右旋（+）]null（二）氨基酸的分类根据R的化学结构 （1）脂肪族氨基酸：1）疏水性：Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Met、Cys；2）极性：Arg、Lys、Asp、Glu、Asn、Gln、Ser、Thr （2）芳香族氨基酸：Phe、Tyr （3）杂环氨基酸：Trp、His （4）杂环亚氨基酸：Pro根据R的极性 （1）极性氨基酸：1）不带电：Ser、Thr、Asn、Gln、Tyr、Cys；2）带正电：His、Lys、Arg；3）带负电：Asp、Glu （2）非极性氨基酸：Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Phe、Met、Pro、Trp3.根据酸碱性质（记忆） 3.根据酸碱性质（记忆） 1 中性氨基酸： 脂肪族：Gly, Ala, Val, Leu, Ile 芳香族：Phe, Tyr, Trp 含羟基：Ser, Thr 含硫： Cys, Met 亚氨基酸： Pro 含酰胺基：Asn, Gln 2 酸性氨基酸：Asp, Glu 3 碱性氨基酸：Arg, Lys, His 必需氨基酸：赖，色，苯丙，甲硫，苏，缬，亮，异亮 null（三）氨基酸的重要理化性质一般物理性质 无色晶体，熔点极高（200℃以上），不同味道；水中溶解度差别较大（极性和非极性），不溶于有机溶剂。两性解离和等电点 氨基酸在水溶液中或在晶体状态时都以离子形式存在，在同一个氨基酸分子上带有能放出质子的—NH3+正离子和能接受质子的—COO-负离子，为两性电解质。3. 化学性质（1）与茚三酮的反应：Pro产生黄色物质，其它为蓝紫色。在570nm（蓝紫色）或440nm（黄色）定量测定（几μg）。null调节氨基酸溶液的pH，使氨基酸分子上的—+NH3基和—COO-基的解离程度完全相等时，即所带净电荷为零，此时氨基酸所处溶液的pH值称为该氨基酸的等电点（pI）。 （当氨基酸相互连接成蛋白质时，只有其侧链基团和末端的α-氨基，α-羧基是可以离子化的。null（2）与甲醛的反应：氨基酸的甲醛滴定法中和滴定null（3）与2,4-二硝基氟苯(DNFB)的反应弱碱性DNP-氨基酸null（4）成盐反应（5）酰基化和烃基化反应null（6）成酯反应 HCl气当羧基变成乙酯后，羧基的化学性质就被掩蔽了，而氨基的化学性质就突出地显示出来。（7）酰氯化反应使氨基酸的羧基活化，易于另一氨基酸的氨基结合，在合成肽的工作上常用。null（8）成酰胺反应H2N—CHR—COOC2H5 + HNH2体外无水有机体内：Asp（Glu）+NH4+Asn（Gln）Asn（Gln）合成酶ATP（9）脱羧反应H2N—CHR—COOH脱羧酶null（10）迭氮反应H2N-CHR-COOHNH2NH2（-CH3OH）HNO2null四、肽 一个氨基酸的α-羧基和另一个氨基酸的α-氨基脱水缩合而成的化合物。 氨基酸之间脱水后形成的键称肽键（酰胺键）。 当两个氨基酸通过肽键相互连接形成二肽，在一端仍然有游离的氨基和另一端有游离的羧基，每一端连接更多的氨基酸。氨基酸能以肽键相互连接形成长的、不带支链的寡肽（25个氨基酸残基以下）和多肽（多于25个氨基酸残基）。多肽仍然有游离的α-氨基和α-羧基。肽链写法：游离α-氨基在左，游离α-羧基在右，氨基酸之间用“-”表示肽键。H2N-丝氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-COOHSer-Leu-Phe（S-L-F）null（一）谷胱甘肽（GSH）2GSHGSSG（二）催产素和升压素 均为9肽，第3位和第9位氨基酸不同。催产素使子宫和乳腺平滑肌收缩，具有催产和促使乳腺排乳作用。升压素促进血管平滑肌收缩，升高血压，减少排尿。null（三）促肾上腺皮质激素（ACTH） 39肽，活性部位为第4~10位的7肽片段： Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly。（四）脑肽脑啡肽具有强烈的镇痛作用（强于吗啡），不上瘾。Met-脑啡肽 Tyr-Gly-Gly-Phe-Met Leu-脑啡肽 Tyr-Gly-Gly-Phe-Leuβ-内啡肽（31肽）具有较强的吗啡样活性与镇痛作用。null（五）胆囊收缩素（六）胰高血糖素由胰岛α-细胞分泌（β-细胞分泌胰岛素），29肽。胰高血糖素调节 维持血糖浓度。null五、 蛋白质的结构 蛋白质是氨基酸以肽键相互连接的线性序列。在蛋白质中，多肽链折叠形成特殊的形状（构象）（conformation）。在结构中，这种构象是原子的三维排列，由氨基酸序列决定。蛋白质有四种结构层次：一级结构（primary），二级结构（secondary），三级结构（tertiary）和四级结构（quaternary）（不总是有）。（一）蛋白质的一级结构（化学结构）一级结构就是蛋白质分子中氨基酸残基的排列顺序，即氨基酸的线性序列。在基因编码的蛋白质中，这种序列是由mRNA中的核苷酸序列决定的。一级结构中包含的共价键（covalent bonds）主要指肽键（peptide bond）和二硫键（disulfide bond）null牛胰岛素的化学结构null一级结构确定的原则：将大化小，逐段分析，制成两套肽片段，找出重叠位点，排出肽的前后位置，最后确定蛋白质的完整序列。目前往往采用从待测蛋白质的基因序列反推出蛋白质的一级结构。（二）蛋白质的空间结构（构象、高级结构）——蛋白质分子中所有原子在三维空间的排列分布和肽链的走向。null由于羰基碳-氧双键的靠拢，允许存在共振结构（resonance structure），碳与氮之间的肽键有部分双键性质，由CO-NH构成的肽单元呈现相对的刚性和平面化，肽键中的4个原子和它相邻的两个α-碳原子多处于同一个平面上。氨基的H与羰基的O几乎总是呈反式（trans）而不是顺式（cis）。蛋白质构象稳定的原因：1）酰胺平面；2）R的影响。null1. 蛋白质的二级结构——指蛋白质多肽链本身的折叠和盘绕方式（1）α-螺旋（α-helix）Pauling和Corey于1965年提出。结构 要点 综治信访维稳工作要点综治信访维稳工作要点2018综治平安建设工作要点新学期教学工作要点医院纪检监察工作要点 ： 1）螺旋的每圈有3.6个氨基酸，螺旋间距离为0.54nm，每个残基沿轴旋转100°。2）每个肽键的羰基氧与远在第四个氨基酸氨基上的氢形成氢键（hydrogen bond），氢键的走向平行于螺旋轴，所有肽键都能参与链内氢键的形成。3.613 (ns)null3)R侧链基团伸向螺旋的外侧。4）Pro的N上缺少H，不能形成氢键，经常出现在α-螺旋的端头，它改变多肽链的方向并终止螺旋。null（2）β-折叠结构（β-pleated sheet）是一种肽链相当伸展的结构。肽链按层排列，依靠相邻肽链上的羰基和氨基形成的氢键维持结构的稳定性。肽键的平面性使多肽折叠成片，氨基酸侧链伸展在折叠片的上面和下面。β-折叠片中，相邻多肽链平行或反平行（较稳定）。null（3）β-转角（β-turn）为了紧紧折叠成紧密的球蛋白，多肽链常常反转方向，成发夹形状。一个氨基酸的羰基氧以氢键结合到相距的第四个氨基酸的氨基氢上。β-转角经常出现在连接反平行β-折叠片的端头。null（4）自由回转没有一定规律的松散肽链结构。酶的活性部位。2. 超二级结构和结构域*超二级结构是指若干相邻的二级结构中的构象单元彼此相互作用，形成有规则的，在空间上能辨认的二级结构组合体。是蛋白质二级结构至三级结构层次的一种过渡态构象层次。结构域是球状蛋白质的折叠单位。多肽链在超二级结构的基础上进一步绕曲折叠成紧密的近似球行的结构，具有部分生物功能。对于较大的蛋白质分子或亚基，多肽链往往由两个以上结构域缔合而成三级结构。null3. 蛋白质的三级结构——指多肽链上的所有原子（包括主链和侧链）在三维空间的分布。肌红蛋白4. 蛋白质的四级结构——多肽亚基（subunit）的空间排布和相互作用。亚基间以非共价键连接。血红蛋白null共价键次级键化学键 肽键一级结构氢键二硫键二、三、四级结构疏水键盐键范德华力三、四级结构（三）蛋白质分子中的共价键与次级键null六、蛋白质分子结构与功能的关系蛋白质分子具有多样的生物学功能，需要一定的化学结构，还需要一定的空间构象。（一）蛋白质一级结构与功能的关系1. 种属差异蛋白质一级结构的种属差异十分明显，但相同部分氨基酸对蛋白质的功能起决定作用。根据蛋白质结构上的差异，可以断定它们在亲缘关系上的远近。2.分子病——蛋白质分子一级结构的氨基酸排列顺序与正常有所不同的遗传病。null镰状细胞贫血（sick-cell anemia） 从患者红细胞中鉴定出特异的镰刀型或月牙型细胞。β-链 1 2 3 4 5 6 7 Hb-A Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Lys… Hb-S Val-His-Leu-Thr-Pro-Val-Lys… Val 取代GluO2O2null（二）蛋白质构象与功能的关系别（变）构作用：含亚基的蛋白质由于一个亚基的构象改变而引起其余亚基和整个分子构象、性质和功能发生改变的作用。因别构而产生的效应称别构效应。血红蛋白是别构蛋白，O2结合到一个亚基上以后，影响与其它亚基的相互作用。null七、蛋白质的性质（一）蛋白质的相对分子量蛋白质相对分子量在10 000~1 000 000之间。测定分子量的主要方法有渗透压法、超离心法、凝胶过滤法、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。最准确可靠的方法是超离心法（Svedberg于1940年设计）：蛋白质颗粒在25~50*104 g离心力作用下从溶液中沉降下来。*沉降系数（s）：单位（cm）离心场里的沉降速度。 v =沉降速度（dx/dt） ω=离心机转子角速度（弧度/s） x =蛋白质界面中点与转子中心的距离（cm）沉降系数的单位常用S，1S=1×10-13（s）null（二）蛋白质的两性电离及等电点蛋白质在其等电点偏酸溶液中带正电荷，在偏碱溶液中带负电荷，在等电点pH时为两性离子。电泳：带电颗粒在电场中移动的现象。分子大小不同的蛋白质所带净电荷密度不同，迁移率即异，在电泳时可以分开。1. 自由界面电泳：蛋白质溶于缓冲液中进行电泳。2. 区带电泳：将蛋白质溶液点在浸了缓冲液的支持物上进行电泳，不同组分形成带状区域。（1）纸上电泳：用滤纸作支持物。null（2）凝胶电泳：用凝胶（淀粉、琼脂糖、聚丙烯酰胺）作支持物。1）圆盘电泳：玻璃管中进行的凝胶电泳。2）平板电泳：铺有凝胶的玻板上进行的电泳。null等电聚焦电泳：当蛋白质在其等电点时，净电荷为零，在电场中不再移动。通电null（三）蛋白质的胶体性质布郎运动、丁达尔现象、电泳现象，不能透过半透膜，具有吸附能力蛋白质溶液稳定的原因：1）表面形成水膜（水化层）； 2）带相同电荷。null（四）蛋白质的沉淀反应1. 加高浓度盐类（盐析）：加盐使蛋白质沉淀析出。分段盐析：调节盐浓度，可使混合蛋白质溶液中的几种蛋白质分段析出。血清球蛋白（50%(NH4)2SO4饱和度），清蛋白（饱和(NH4)2SO4)。2. 加有机溶剂3. 加重金属盐4. 加生物碱试剂单宁酸、苦味酸、钼酸、钨酸、三氯乙酸能沉淀生物碱，称生物碱试剂。null（五）蛋白质的变性天然蛋白质受物理或化学因素的影响，其共价键不变，但分子内部原有的高度规律性的空间排列发生变化，致使其原有性质发生部分或全部丧失，称为蛋白质的变性。变性蛋白质主要标志是生物学功能的丧失。溶解度降低，易形成沉淀析出，结晶能力丧失，分子形状改变，肽链松散，反应基团增加，易被酶消化。变性蛋白质分子互相凝集为固体的现象称凝固。有些蛋白质的变性作用是可逆的，其变性如不超过一定限度，经适当处理后，可重新变为天然蛋白质。null  （六）蛋白质的颜色反应—OHNnull本章较全面地介绍了蛋白质化学的基本知识，重点阐述了氨基酸和蛋白质的结构、性质和功能间的依存关系。在学习氨基酸的结构时应联系有机化学的羧酸结构，在学习氨基酸的化学性质时应联系氨基酸的结构，再将氨基酸的结构和特性与蛋白质的结构和特性联系起来。认识蛋白质的重要生物学意义。提要蛋白质的分子结构 蛋白质的分子结构 1.蛋白质的一级结构 * 组成蛋白质的多肽链数目. * 多肽链的氨基酸顺序 多肽链内或链间二硫键的数目和位置。其中最重要的是多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白质生物功能的基础。书写从N-末端到C-末端。用AA的3字母缩写符号或单字母符号连续排列 null2.蛋白质的二级结构 二级结构：蛋白质主链折叠产生的，由氢键维系的有规则的构象。不包括与肽链其他区段的相互关系及侧链构象。 常见的有：α-螺旋、β-折叠、β-转角、无规卷曲等 -螺旋-螺旋A．多肽链的主链围绕一个“中心轴”螺旋上升，每隔3.6个AA上升一圈，螺距0.54nm，每个肽键的C＝O与前面第4个肽键的N-H之间成氢键。 B．螺圈间氢键的取向与中心轴平行，是维系α-螺旋的主要作用力。 C．R侧链在螺旋的外侧 D. 蛋白质分子多为右手-螺旋。nullnull-折叠的结构特征 A.是由两条或多条几乎完全伸展的肽链平行排列为折叠片，肽链的主链呈锯齿状折叠。 -sheet-折叠B．相邻肽链上的-CO-与-NH形成氢键，氢键几乎垂直于肽 链，维持片层间结构稳定。 C．肽链的R侧链基团在肽平面上、下交替出现。 -转角 -turn β-弯曲 发夹结构-转角 -turn β-弯曲 发夹结构β-转角是多肽主链回转180℃所形成的部分，它改变肽链的走向。由四个AA残基组成; β-转角的第一个氨基酸残基的 -C=O 和第四个残基的 –N-H 形成氢键，维系β-转角的稳定。 β-转角中Gly与Pro出现频率高。 这类结构主要存在于球状蛋白分子中。null无规卷曲 （Random coil，自由回转） 指不能纳入明确的二级结构的多肽区段。 虽然这些区段存在少数柔性的无序区段，但往往既不是卷曲，也非无规。 角蛋白 Keratin角蛋白 Keratin-角蛋白主要由-螺旋构象的多肽链组成。螺旋由二硫键交联起来，一般认为每四个螺圈有一个二硫键。 三股右手α-螺旋缠绕成原纤维，“9＋2”形成电缆式结构－微原纤维，成百根微原纤维结合成的纤维束(大纤维φ=200nm)结构。一根毛发周围是一怪鳞状细胞，中间为皮层细胞(φ=20μm），大纤维沿轴向排列。角蛋白的二硫键与烫发角蛋白的二硫键与烫发 烫发是一项生物化学工程，烫发剂（还原剂）打开-S-S-，固定液（氧化剂）使形成新的-S-S-（不与处理前的相同），新的二硫交联键，使α-螺旋束发生扭曲。 -角蛋白-角蛋白丝心蛋白这是蚕丝和蜘蛛丝的一种蛋白质。丝心蛋白具有抗张强度高，质地柔软的特性，但不能拉伸。丝蛋白是由伸展的肽链沿纤维轴平行排列成反向-折叠结构。丝蛋白的肽链通常是由多个六肽单元重复而成。由于堆积层之间是由非键合的范德华力所维系，因而丝具有很柔软的特性。-（Gly-Ser-Gly-Ala-Gly-Ala）n-3.蛋白质的三级结构 ——肽链非几何形的进一步折叠 3.蛋白质的三级结构 ——肽链非几何形的进一步折叠 蛋白质的三级结构是指在二级结构基础上，肽链的不同区段的侧链基团相互作用在空间进一步盘绕、折叠形成的特定构象，包括主链和侧链在内所有原子的空间排布，但不包括不同肽链间的相互关系， 。 维系三级结构的力有氢键、二硫键、疏水作用、离子键和范德华力等。尤其是疏水作用。四）四级结构－亚基之间的相互关系 四）四级结构－亚基之间的相互关系 蛋白质的四级结构(Quaternary Structure)：由两条或两条以上的各具有三级结构的多肽借非共价键聚合而成的特定构象称为蛋白质的四级结构。 蛋白质分子中最小的共价单位通常称为亚基或亚单位Subunit，一般由一条肽链构成。 维持亚基之间的化学键主要是疏水力。 多个亚基聚集而成的蛋白质常称为寡聚蛋白。 往往这些亚基聚合成完整的构象才体现生物活性。null镰刀状细胞贫血病;蛋白质中AA序列在决定它的三维结构及其生物功能。 血红蛋白(-链） HbA Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Glu-Lys- HbS Val-His-Leu-Thr-Pro-Val-Glu-Lys- 镰刀状细胞血红蛋白可形成纤维状沉淀，在缺氧时，病人细胞呈镰刀状，输氧能力下降，引起贫血。 蛋白质结构与功能的统一性． 了解三维结构是理解蛋白质如何行使功能的基础，而这种三维结构则取决于一级结构—AA序列。 煤气中毒的机制煤气中毒的机制一氧化碳（CO）也能与血红素Fe原子结合。其能力是O2的200倍，人体吸入少量的CO即可完全抑制血红蛋白与O2的结合，造成缺氧死亡。急救法是尽快将病人转移到富含O2的环境中，使与血红素结合的CO被O2置换出来。