实验三丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用一实验目的（ExperimentalObjectives）：1．掌握竞争性抑制作用的概念和特点。2．了解影响酶活性的其它因素。3．分析实验现象。二、实验原理(ExperimentalPrinciples)：影响酶活性的因素：温度pH值激活剂抑制剂对酶活性的抑制作用分类不可逆性抑制作用竞争性抑制作用反竞争性抑制作用可逆性抑制作用非竞争行抑制作用竞争性抑制作用抑制剂(I)与底物(S)的结构相似，能与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶底物复合物的形成，使酶的活性降低。这种抑制作用称为竞争性抑制作用。 反应模式[S]>>[I]：高浓度的底物可解除抑制竞争性抑制作用特点1、I结构常与S结构类似2、I/S与酶的结合部位相同:酶的活性中心3、[S]↑可以降低甚至消除抑制作用4、(表观）Km值增大，Vm值不变无氧 丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶甲烯蓝（MB）甲烯白（MBH2）+FAD三、实验材料、主要仪器和试剂（Equipments,MaterialsandAgents） （一）主要仪器：离心机、恒温水箱。 （二）主要试剂： 1．0.2mol/L琥珀酸 2．0.02mol/L琥珀酸 3．0.2mol/L丙二酸 4．0.02mol/L丙二酸 上述四中溶液调节pH值为7.4。 5．0.02%甲烯蓝 6．1/15mol/L的Na2HPO4四、操作步骤（OperatingProcedure）1酶的提取液的制备：将兔子处死，取出肝脏，切成碎片后，放入乳钵中，每组取8g左右，加入1/15mol/L的Na2HPO4溶液5ml研成糊状后，再加入5ml1/15mol/L的Na2HPO4溶液，混匀后，倒入离心管中，2000转/分钟离心4分钟，取上清液转入其它试管备用。2、取试管5支，按照下列表格操作：3、各管混匀后，沿试管的内壁加入石蜡油（隔绝空气），放置到37℃水浴中保温，观察各管甲烯蓝的褪色情况，并记录褪色的所需要的时间，解释其现象。五、结果与分析：（ResultsandAnalysis）根据实验的现象，观察得到的结果，并解释其相关的实验现象。为什么滴石蜡油？六、思考题：(Questions)什么叫酶的竞争性抑制作用？举例说明在医学上的应用。七.注意事项：(Notices)1．注意密切观察颜色变化。2．加入各种试剂要注意看清标签，不能混用各试剂瓶瓶盖。
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