HJ77.4-2008 土壤和沉积物 二噁英类的测定 同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱法

HJ 中华人民共和国国家环境保护 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 HJ 77.4－2008 土壤和沉积物 二噁英类的测定 同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱法 Soil and sediment Determination of polychlorinated dibenzo-p-dioxins （PCDDs）and polychlorinated dibenzofurans（PCDFs） Isotope dilution HRGC-HRMS （发布稿） 本电子版为发布稿。请以中国环境科学出版社出版的正式标准文本为准。 2008 -12 -31 发布 2009 -04 -01 实施 环 境 保 护 部 发布 ww w. bz fx w. co m I 目 次 前 言.................................................................... II 1 适用范围................................................................... 1 2 规范性引用文件............................................................. 1 3 术语和定义、符号和缩略语................................................... 1 4 方法原理................................................................... 4 5 试剂和材料................................................................. 5 6 仪器和设备................................................................. 6 7 采样....................................................................... 7 8 样品预处理................................................................. 8 9 样品前处理................................................................. 8 10 样品净化.................................................................. 9 11 仪器分析................................................................. 11 12 数据处理................................................................. 14 13 报告..................................................................... 17 14 质量控制和质量保证....................................................... 19 15 废物处理................................................................. 22 16 注意事项................................................................. 22 附录 A (规范性附录) 二噁英类分析 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 图 ...................................... 23 附录 B (资料性附录) 二噁英类内标物质使用示例 ................................ 24 附录 C (资料性附录) 标准溶液浓度序列示例 .................................... 25 附录 D (资料性附录) 仪器设定条件示例 ........................................ 26 附录 E (资料性附录) 报告格式示例 ............................................ 27 II 前 言 为贯彻《中华人民共和国环境保护法》，保护环境，保障人民健康，规范土壤及沉积物 中二噁英类的测定方法，制定本标准。 本标准规定了土壤及沉积物中二噁英类的同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱测定 法。 本标准是对《多氯代二苯并二噁英和多氯代二苯并呋喃的测定 同位素稀释高分辨毛细 管气相色谱/高分辨质谱法》（HJ/T 77-2001）的修订。自本标准实施之日起，替代 HJ/T 77-2001 中土壤及沉积物样品测定部分。 本标准的附录A为规范性附录，附录B、附录C、附录D、附录E为资料性附录。 本标准由环境保护部科技标准司组织制订。 本标准起草单位：国家环境分析测试中心。 本标准环境保护部2008年12月31日批准。 本标准自2009年4月1日起实施。 本标准由环境保护部解释。 ww w. bz fx w. co m 1 土壤和沉积物 二噁英类的测定 同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱法 Soil and sediment Determination of polychlorinated dibenzo-p-dioxins （PCDDs）and polychlorinated dibenzofurans（PCDFs） Isotope dilution HRGC-HRMS 1 适用范围 1.1 本标准规定了采用同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱联用法（HRGC-HRMS）对 2,3,7,8-位氯取代的二噁英类以及四氯至八氯取代的多氯代二苯并-对-二噁英（PCDDs）和多 氯代二苯并呋喃（PCDFs）进行定性和定量分析的方法。 1.2 本标准适用于全国区域土壤背景、农田土壤环境、建设项目土壤环境评价、土壤污染事 故以及河流、湖泊与海洋沉积物的环境调查中的二噁英类分析。 1.3 方法检出限取决于所使用的分析仪器的灵敏度、样品中的二噁英类浓度以及干扰水平等 多种因素。2,3,7,8-T4CDD 仪器检出限应低于 0.1pg，当土壤及沉积物取样量为 100g 时，本 方法对 2,3,7,8-T4CDD 的最低检出限应低于 0.05 ng/kg。 2 规范性引用文件 本标准内容引用了下列文件或其中的条款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用 于本标准。 GB 8170 数值修约规则 GB 17378.3 海洋监测规范 第 3 部分 样品采集储存与运输 GB 17378.5 海洋监测规范 第 5 部分 沉积物分析 HJ/T 166 土壤环境监测技术规范 3 术语和定义、符号和缩略语 3.1 术语和定义 7 3.1.1 二噁英类 polychlorinated dibenzodioxins（PCDDs）and polychlorinated dibenzofurans （PCDFs） 多氯代二苯并-对-二噁英（PCDDs）和多氯代二苯并呋喃（PCDFs）的统称。 3.1.2 异构体 isomer 在本标准中，具有相同化学组成但氯取代位置不同的二噁英类互为异构体。 3.1.3 同类物 congener 2 二噁英类所有化合物互为同类物。二噁英类共有210种同类物。 3.1.4 2,3,7,8-位氯代二噁英类 isomer substituted at 2,3,7,8-positions 所有2,3,7,8-位置被氯原子取代的二噁英类同类物。包括7种四～八氯代二苯并-对-二噁 英类以及10种四～八氯代二苯并呋喃，共有17种见 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1。 表1 2,3,7,8-位氯代二噁英类 序号 异构体名称 简称 1 2,3,7,8-四氯代二苯并-对-二噁英类 2,3,7,8-T4CDD 2 1,2,3,7,8-五氯代二苯并-对-二噁英类 1,2,3,7,8-P5CDD 3 1,2,3,4,7,8-六氯代二苯并-对-二噁英类 1,2,3,4,7,8-H6CDD 4 1,2,3,6,7,8-六氯代二苯并-对-二噁英类 1,2,3,6,7,8-H6CDD 5 1,2,3,7,8,9-六氯代二苯并-对-二噁英类 1,2,3,7,8,9-H6CDD 6 1,2,3,4,6,7,8-七氯代二苯并-对-二噁英类 1,2,3,4,6,7,8-H7CDD 7 八氯代二苯并-对-二噁英类 O8CDD 8 2,3,7,8-四氯代二苯并呋喃 2,3,7,8-T4CDF 9 1,2,3,7,8-五氯代二苯并呋喃 1,2,3,7,8-P5CDF 10 2,3,4,7,8-五氯代二苯并呋喃 2,3,4,7,8-P5CDF 11 1,2,3,4,7,8-六氯代二苯并呋喃 1,2,3,4,7,8-H6CDF 12 1,2,3,6,7,8-六氯代二苯并呋喃 1,2,3,6,7,8-H6CDF 13 1,2,3,7,8,9-六氯代二苯并呋喃 1,2,3,7,8,9-H6CDF 14 2,3,4,6,7,8-六氯代二苯并呋喃 2,3,4,6,7,8-H6CDF 15 1,2,3,4,6,7,8-七氯代二苯并呋喃 1,2,3,4,6,7,8-H7CDF 16 1,2,3,4,7,8,9-七氯代二苯并呋喃 1,2,3,4,7,8,9-H7CDF 17 八氯代二苯并呋喃 O8CDF 3.1.5 二噁英类内标 internal standard for PCDDs/PCDFs analysis 浓度已知的同位素（13C或37Cl）标记的二噁英类标准物质壬烷（或癸烷、甲苯等）溶液， 见表2。 3.1.6 毒性当量因子 toxicity equivalency factor（TEF） 指各二噁英类同类物与2,3,7,8-四氯代二苯并-对-二噁英对Ah受体的亲和性能之比。 3.1.7 毒性当量 toxic equivalent quantity（TEQ） 各二噁英类同类物浓度折算为相当于2,3,7,8-四氯代二苯并-对-二噁英毒性的等价浓度， 毒性当量浓度为实测浓度与该异构体的毒性当量因子的乘积。 ww w. bz fx w. co m 3 表 2 可供选用的二噁英类内标 氯取代数 PCDDs PCDFs 13C12-1,2,3,4-T4CDD 13C12-2,3,7,8-T4CDF 13C12-2,3,7,8-T4CDD 13C12-1,2,7,8-T4CDF 四氯 37Cl4-2,3,7,8-T4CDD 13C12-1,2,3,7,8-P5CDD 13C12-1,2,3,7,8-P5CDF 五氯 13C12-2,3,4,7,8-P5CDF 13C12-1,2,3,4,7,8-H6CDD 13C12-1,2,3,4,7,8-H6CDF 13C12-1,2,3,6,7,8-H6CDD 13C12-1,2,3,6,7,8-H6CDF 13C12-1,2,3,7,8,9-H6CDD 13C12-1,2,3,7,8,9-H6CDF 六氯 13C12-2,3,4,6,7,8-H6CDF 13C12-1,2,3,4,6,7,8-H7CDD 13C12-1,2,3,4,6,7,8-H7CDF 七氯 13C12-1,2,3,4,7,8,9-H7CDF 八氯 13C12-1,2,3,4,6,7,8,9-O8CDD 13C12-1,2,3,4,6,7,8,9-O8CDF 3.2 符号和缩略语 3.2.1 PCDDs polychlorinated dibenzo-p-dioxins 多氯代二苯并-对-二噁英。有75种同类物。 3.2.2 PCDFs polychlorinated dibenzofurans 多氯代二苯并呋喃。有135种同类物。 3.2.3 T4CDDs tetrachlorodibenzo-p-dioxins 四氯代二苯并-对-二噁英。有22种异构体。 3.2.4 P5CDDs pentachlorodibenzo-p-dioxins 五氯代二苯并-对-二噁英。有14种异构体。 3.2.5 H6CDDs hexachlorodibenzo-p-dioxins 六氯代二苯并-对-二噁英。有10种异构体。 3.2.6 H7CDDs heptachlorodibenzo-p-dioxins 七氯代二苯并-对-二噁英。有2种异构体。 3.2.7 O8CDD octachlorodibenzo-p-dioxin 八氯代二苯并-对-二噁英。有1种异构体。 3.2.8 T4CDFs tetrachlorodibenzofurans 四氯代二苯并呋喃。有38种异构体。 3.2.9 P5CDFs pentachlorodibenzofurans 4 五氯代二苯并呋喃。有28种异构体。 3.2.10 H6CDFs hexachlorodibenzofurans 六氯代二苯并呋喃。有16种异构体。 3.2.11 H7CDFs heptachlorodibenzofurans 七氯代二苯并呋喃。有4种异构体。 3.2.12 O8CDF octachlorodibenzofuran 八氯代二苯并呋喃。有1种异构体。 3.2.13 RRF relative response factor 相对响应因子。 3.2.14 HRGC high-resolution gas chromatography 高分辨气相色谱法。 3.2.15 HRMS high-resolution mass spectrometry 高分辨质谱法。 3.2.16 HRGC － HRMS high-resolution gas chromatography and high-resolution mass spectrometry 高分辨气相色谱－高分辨质谱联用法。 3.2.17 PFK perfluorokerosene 全氟代煤油。 3.2.18 SIM selective ion monitoring 选择离子检测。 3.2.19 EI electron impact ionization 电子轰击离子化。 3.2.20 S/N Signal/Noise ratio 信噪比。 3.2.21 PCBs polychlorinated biphenyls 多氯联苯。 4 方法原理 本方法采用同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱法测定土壤及沉积物中的二噁英 类，规定了土壤及沉积物中二噁英类的采样、样品处理及仪器分析等过程的操作步骤以及整 个分析过程的质量管理措施。按相应采样规范采集样品并干燥。加入提取内标后使用盐酸处 理。分别对盐酸处理液和盐酸处理后样品进行液液萃取和索氏提取，萃取液和提取液溶剂置 ww w. bz fx w. co m 5 换为正己烷后合并，进行净化、分离及浓缩操作。加入进样内标后使用高分辨色谱-高分辨 质谱法（HRGC-HRMS）进行定性和定量分析，见附录A“二噁英类分析流程图”。 5 试剂和材料 除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的农残级试剂，并进行空白试验。有机溶剂 浓缩10000倍不得检出二噁英类。 5.1 甲醇 5.2 丙酮 5.3 甲苯 5.4 正己烷 5.5 二氯甲烷 5.6 壬烷或癸烷 5.7 水：用正己烷(5.4)充分洗涤过的蒸馏水。除非另有说明，本标准中涉及的水均指经过上 述处理的蒸馏水。 5.8 25%二氯甲烷—正己烷溶液：二氯甲烷（5.5）与正己烷（5.4）以体积比 1:3 混合。 5.9 提取内标：二噁英类内标物质(溶液)，一般选择 13C 标记或 37Cl 标记化合物作为提取内 标，参见附录 B，每样品添加量一般为：四氯-七氯取代化合物 0.4 ng～2.0ng，八氯取代化 合物 0.8ng～4.0ng，并且以不超过定量线性范围为宜。 5.10 进样内标：二噁英类内标物质(溶液)，一般选择 13C 标记或 37Cl 标记化合物作为进样内 标，参见附录 B，每样品添加量为 0.4ng～2.0ng。 5.11 标准溶液：指以壬烷(或癸烷、甲苯等)为溶剂配制的二噁英类标准物质与相应内标物质 的混合溶液。标准溶液的浓度精确已知，且浓度序列应涵盖 HRGC－HRMS 的定量线性范 围，包括 5 种浓度梯度，参见附录 C。 5.12 盐酸：优级纯。 5.13 浓硫酸：优级纯。 5.14 无水硫酸钠：分析纯以上，在 380°C 温度下处理 4h，密封保存。 5.15 氢氧化钾：优级纯。 5.16 硝酸银：优级纯。 5.17 硅胶：层析填充柱用硅胶（0.063 mm～0.212mm，70 目～230 目)，在烧杯中用甲醇(5.1) 洗净，甲醇挥发完全后，在蒸发皿中摊开，厚度小于 10mm。130°C 下干燥 18h，然后放入 干燥器冷却 30min，装入试剂瓶中密封，保存在干燥器中。 6 5.18 2%氢氧化钾硅胶：取硅胶(5.18)98g，加入用氢氧化钾(5.16)配制的 50g/L 氢氧化钾溶液 40mL，在旋转蒸发装置中约 50°C 温度下减压脱水，去除大部分水分后，继续在 50°C～80°C 减压脱水 1h，硅胶变成粉末状。所制成的硅胶含有 2%(w/w)的氢氧化钾，将其装入试剂瓶 密封，保存在干燥器内中。 5.19 22%硫酸硅胶：取硅胶(5.18)78g，加入浓硫酸(5.14)22g，充分震荡后变成粉末状。将所 制成的硅胶装入试剂瓶密封，保存在干燥器中。 5.20 44%硫酸硅胶：取硅胶(5.18)56g，加入浓硫酸(5.14)44g，充分震荡后变成粉末状。将所 制成的硅胶装入试剂瓶密封，保存在干燥器中。 5.21 10%硝酸银硅胶：取硅胶(5.18)90g，加入用硝酸银(5.17)配制的 400g/L 硝酸银溶液 28mL， 在旋转蒸发装置中约 50°C 温度下减压充分脱水。配制过程中应使用棕色遮光板或铝箔遮挡 光线。所制成的硅胶含有 10%(w/w)的硝酸银，将其装入棕色试剂瓶密封，保存在干燥器中。 5.22 氧化铝：层析填充柱用氧化铝(碱性，活性度 I)，可以直接使用活性氧化铝。必要时可 以如下步骤活化。将氧化铝在烧杯中铺成厚度小于 10mm 的薄层，在 130°C 温度下处理 18h， 或者在培养皿中铺成厚度小于 5mm 的薄层，在 500°C 下处理 8h，活化后的氧化铝在干燥器 内冷却 30min 后，装入试剂瓶密封，保存在干燥器中。氧化铝活化后应尽快使用。 5.23 活性炭或活性炭硅胶： 活性炭可选用下述二种配制方法，或使用市售活性炭硅胶成品。 5.23.1 Carbopack C/Celite 545 (18%)。混合 9.0g 的 Carbopack C 活性碳与 41g 的 Celite545 于 附聚四氟乙烯内衬螺帽的 250mL 玻璃瓶中混合均匀，使用前于 130℃活化 6h，冷却后储于 干燥箱内保存备用。 5.23.2 AX-21/Celite 545 (8%)。混合 10.7g 的 AX-21 活性碳与 124g 的 Celite545 于附聚四氟乙 烯内衬螺帽的 250mL 玻璃瓶中，充分震荡搅拌，使其完全混合，使用前于 130℃活化 6h， 冷却后储于干燥箱内保存备用。 使用前，以甲苯为溶剂索氏提取48h以上，确认甲苯不变色，若甲苯变色，重复索氏提 取。索氏提取后，在180°C温度下干燥4h，再用旋转蒸发装置干燥1h(50°C)。在干燥器中密 封保存备用。 5.24 石英棉：使用前在 200 摄氏度下处理 2h，密封保存。 以上材料均可选择符合二噁英类分析 要求 对教师党员的评价套管和固井爆破片与爆破装置仓库管理基本要求三甲医院都需要复审吗 的市售商业产品。 6 仪器和设备 6.1 采样装置 7 6.2.1 采样工具：应符合 HJ/T 166 及 GB 17378.3 的要求，并使用对二噁英类无吸附作用的 不锈钢或铝合金材质器具。 6.2.2 样品容器：应符合 HJ/T 166 及 GB 17378.3 的要求，并使用对二噁英类无吸附作用的 不锈钢或玻璃材质可密封器具。 6.2 前处理装置 样品前处理装置要用碱性洗涤剂和水充分洗净，使用前依次用甲醇(或丙酮)、正己烷(或 甲苯或二氯甲烷)等溶剂冲洗，定期进行空白试验。所有接口处严禁使用油脂。 6.2.1 索氏提取器或性能相当的设备。 6.2.2 浓缩装置：旋转蒸发装置、氮吹仪以及K-D浓缩装置等。 6.2.3 填充柱：内径8mm～15mm，长200mm～300mm的玻璃填充柱管。 6.3 分析仪器 使用高分辨毛细管柱气相色谱-高分辨质谱法(HRGC-HRMS)对二噁英类进行分析。 6.3.1 高分辨毛细管柱气相色谱：应满足 11.1.1 要求并具有下述功能： 6.3.1.1 进样口：具有不分流进样功能，最高使用温度不低于 280°C。也可使用柱上进样或程 序升温大体积进样方式。 6.3.1.2 柱温箱：具有程序升温功能，可在 50°C～350°C 温度区间内进行调节。 6.3.1.3 毛细管色谱柱：内径 0.10mm～0.32mm，膜厚 0.10μm～0.25μm，柱长 25m～60m。 可对 2,3,7,8-位氯代二噁英类化合物进行良好的分离，并能判明这些化合物的色谱峰流出顺 序。 6.3.1.4 载气：高纯氦气，99.999%。 6.3.2 高分辨质谱仪：应为双聚焦磁质谱，满足 11.1.2 的要求并具有下述功能： 6.3.2.1 具有气质联机接口。 6.3.2.2 具有电子轰击离子源，电子轰击电压可在 25V～70V 范围调节。 6.3.2.3 具有选择离子检测功能，并使用锁定质量模式(Lock mass)进行质量校正。 6.3.2.4 动态分辨率大于 10000(10%峰谷定义，下同)并至少可稳定 24h 以上。当使用的内标 包含 13C-O8CDF 时，动态分辨率应大于 12000。 6.3.2.5 高分辨状态(分辨率>10000)下能够在 1s 内重复监测 12 个选择离子。 6.3.2.6 数据处理系统：能够实时采集、记录及存储质谱数据。 7 采样 7.1 制定采样 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 8 在实施土壤或沉积物采样之前，应制定采样方案，采样方案包括采样目的和要求、采样 程序、安全和质量保证、采样记录等。必要时对现场进行事前调查。 7.2 采样方法 土壤样品采集参照 HJ/T 166 执行，沉积物样品采集参照 GB 17378.3 执行。 采样人员应熟悉上述标准中关于土壤样品及沉积物采样的技术要求。采样工具应保持清 洁，采样前应使用水和有机溶剂清洗，避免采集的样品间的交叉污染。 采样时应记录样品的名称、来源、采样量、保存状况、采样点位、采样日期、采样人员 等信息。采样人员应及时填写采样记录或采样报告。 样品应尽快送至实验室进行样品制备和样品分析。 8 样品预处理 8.1 样品的风干及筛分 土壤及沉积物样品风干及筛分参照 HJ/T 166 及 GB 17378.5 相关部分进行操作。采集样 品风干及筛分时应避免日光直接照射及样品间的交叉污染。 8.2 含水率的测定 称取 5g 以上的土壤及沉积物样品，105°C～110°C 烘 2 小时后放在干燥器中冷却至室温，称重。使用下式计算含水率（w，%）。 100%w −= ×干燥前样品重量 干燥后样品重量 干燥前样品重量 9 样品前处理 9.1 添加提取内标 在样品处理之前添加0.5ng～2.0ng提取内标。如果样品提取液需要分割使用（如样品中 二噁英类预期浓度过高需要加以控制或者需要预留保存样），则提取内标添加量应适当增加。 9.2 盐酸处理 称取一定量样品，用 2mol/L 的盐酸处理。盐酸的用量为每 1g 样品至少加 20mmolHCl。 搅拌样品，使其与盐酸充分接触并观察发泡情况，必要时再添加盐酸，直到不再发泡为止。 用布氏漏斗过滤盐酸处理液，并用水充分冲洗滤筒，再用少量甲醇（或丙酮）淋洗去除滤筒 及样品中的水分，将冲洗好的滤筒放入烧杯中转移至洁净的干燥器中充分干燥。 9.3 样品提取 9.3.1 液液萃取 9 将样品前处理的处理液（9.2）合并，按照每 1L 盐酸处理液使用 100mL 二氯甲烷的比 例进行震荡萃取，重复 3 次，萃取液使用无水硫酸钠脱水干燥。 9.3.2 样品提取 滤筒及样品充分干燥后以甲苯为溶剂进行索氏提取，提取时间应在 16h 以上。 将 9.3.1 和 9.3.2 各部分萃取液和提取液溶剂置换为正己烷后合并。 若样品中不含碳状物，可以省略盐酸处理，直接进行提取操作。实验室可以通过分析有 证参考物质或参加国际能力验证的方法对快速溶剂萃取等其他提取方法的使用进行评估。 9.4 提取液的分割 可根据样品中二噁英类预期浓度的高低分取 25%～100%(整数比例)的提取液作为样品 储备液，样品储备液应转移至棕色密封储液瓶中冷藏贮存。 10 样品净化 样品净化可以选择硫酸处理-硅胶柱净化（10.1）或多层硅胶柱净化（10.2）方法。对干 扰物的分离净化可以选择氧化铝柱净化(10.3)或活性炭硅胶柱净化(10.4)方法。 10.1 硫酸处理-硅胶柱净化 10.1.1 将样品溶液浓缩至 1mL～2mL。 10.1.2 将浓缩液用 50mL～150mL 正己烷洗入分液漏斗，每次加入适量（10 mL～20mL）浓 硫酸，轻微振荡，静置分层，弃去硫酸层。根据硫酸层颜色的深浅重复操作 1～3 次，直到 硫酸层的颜色变浅或无色为止。 10.1.3 正己烷层每次加入适量的水洗涤，重复洗至中性。正己烷层经无水硫酸钠脱水后，浓 缩至 1mL～2mL。 10.1.4 层析填充柱底部垫一小团石英棉，用 10mL 正己烷冲洗内壁。在烧杯中加入 3g 硅胶 和 10mL 正己烷，用玻璃棒缓缓搅动赶掉气泡，倒入层析填充柱，让正己烷流出，待硅胶层 稳定后，再充填约 10mm 厚的无水硫酸钠，用正己烷冲洗管壁上的硫酸钠粉末。 10.1.5 用 50mL 正己烷淋洗硅胶柱，然后将浓缩液定量转移到硅胶柱上。用 150mL 正己烷 淋洗，调节淋洗速度约为 2.5mL/min(大约 1 滴/s)。 10.1.6 洗出液浓缩至 1mL～2mL。 10.2 多层硅胶柱净化 10.2.1 在层析填充柱底部垫一小团石英棉，用 10mL 正己烷冲洗内壁。依次装填无水硫酸钠 4g，硅胶 0.9g，2%氢氧化钾硅胶 3g，硅胶 0.9g，44%硫酸硅胶 4.5g，22%硫酸硅胶 6g，硅 10 胶 0.9g，10%硝酸银硅胶 3g，无水硫酸钠 6g，用 100mL 正己烷淋洗硅胶柱。 10.2.2 将样品溶液浓缩至 1mL～2mL。 10.2.3 将浓缩液定量转移到多层硅胶柱上。 10.2.4 用 200mL 正己烷淋洗，调节淋洗速度约为 2.5mL/min(大约 1 滴/s)。 10.2.5 洗出液浓缩至 1mL～2mL。若多层硅胶柱颜色加深较多，应重复上述 10.2.1～10.2.5 净化操作。样品含硫量较高时，可在索氏提取器的蒸馏烧瓶中加入 5g～10g 铜珠或在多层硅 胶柱上端加入适量铜粉。 10.3 氧化铝柱净化 10.3.1 在层析填充柱底部垫一小团石英棉，用 10mL 正己烷冲洗内壁。在烧杯中加入 10g 氧 化铝和 10mL 正己烷，用玻璃棒缓缓搅动赶掉气泡，倒入层析填充柱，让正己烷流出，待硅 胶层稳定后，再充填约 10mm 厚的无水硫酸钠，用正己烷冲洗管壁上的硫酸钠粉末。用 50mL 正己烷淋洗硅胶柱。 10.3.2 将经过初步净化的样品浓缩液定量转移到氧化铝柱上。首先用 100mL 的 2%二氯甲烷 -正己烷溶液淋洗，调节淋洗速度约为 2.5mL/min(大约 1 滴/s)。洗出液为第一组分。 10.3.3 然后用 150mL 的 50%二氯甲烷-正己烷溶液淋洗氧化铝柱(淋洗速度约为 2.5mL/min)， 得到的洗出液为第二组分，该组分含有分析对象二噁英类。 10.3.4 将第二组分洗出液浓缩至 1mL～2mL。 10.4 活性炭硅胶柱净化 10.4.1 在层析填充柱底部垫一小团石英棉，用 10mL 正己烷冲洗内壁。干法充填约 10mm 厚 的无水硫酸钠和 1.0g 活性炭硅胶。注入 10mL 正己烷，敲击层析填充柱赶掉气泡，再充填 约 10mm 厚的无水硫酸钠，用正己烷冲洗管壁上的硫酸钠粉末。用 20mL 正己烷淋洗硅胶柱。 10.4.2 将经过初步净化的样品浓缩液定量转移到活性炭硅胶柱上。首先用 200mL 的 25%二 氯甲烷-正己烷溶液淋洗，调节淋洗速度约为 2.5mL/min(大约 1 滴/s)。洗出液为第一组分。 10.4.3 然后用 200mL 甲苯溶液淋洗活性炭硅胶柱(淋洗速度约为 2.5mL/min)，得到的洗出液 为第二组分，该组分含有分析对象二噁英类。 10.4.4 将第二组分洗出液浓缩至 1mL～2mL。 10.5 其他样品净化方法 可以使用凝胶渗透色谱（GPC）、高压液相色谱（HPLC）、自动样品处理装置以及其他 净化方法或装置等进行样品的净化处理。使用前应用标准样品或标准溶液进行分离和净化效 果试验，并确认满足本方法质量控制/质量保证要求。 11 10.6 上机样品制备 10.6.1 样品的浓缩 由 10.3.4 或 10.4.4 所得的第二组分洗出液用高纯氮吹除多余的溶剂，浓缩至微湿。 10.6.2 添加进样内标 添加 0.4ng～2.0ng 进样内标（5.10），加入壬烷(或癸烷、甲苯)定容至适当体积，使进样 内标浓度同制作相对响应因子的标准曲线进样内标浓度相同，转移至进样瓶后作为上机样 品。 11 仪器分析 11.1 仪器条件 11.1.1 高分辨气相色谱条件设定 选择适当操作条件来分离2,3,7,8-位氯代二噁英类化合物，推荐条件为： 进样方式：不分流进样1μL 进样口温度： 270℃ 载气流量： 1.0mL/min 色质接口温度：270℃ 色谱柱：固定相 5%苯基95%聚甲基硅氧烷，柱长60m , 内径0.25mm, 膜厚0.25μm 程序升温：初始温度140℃，保持1分钟后以20℃/分钟的速度升温至200℃，停留1分钟 后以5℃/分钟的速度升温至220℃，停留16分钟后以5℃/分钟的速度升温至 235℃后停留7分钟。以5℃/分钟的速度升温至310℃停留10分钟。 也可使用其他操作条件，参见附录D。 11.1.2 高分辨质谱条件设定 设置仪器满足如下条件，并使用标准溶液或标准参考物质确认保留时间窗口。 11.1.2.1 使用SIM法选择待测化合物的两个监测峰离子进行监测，如表3所示(37Cl-T4CDD仅 有一个监测峰离子)。 11.1.2.2 导入PFK得到稳定的响应后，优化质谱仪器参数使得表3中各质量范围内PFK峰离子 的分辨率大于10000，当使用的内标包含13C-O8CDF时，分辨率应大于12000。 11.2 质量校正 仪器分析开始前需进行质量校正。监测表3中各质量范围内PFK峰离子的荷质比及分辨 率，分辨率应全部达到10000以上，通过锁定质量模式进行质量校正。校正过程完成后保存 质量校正文件。 12 11.3 SIM 检测 11.3.1 按11.1节要求设置高分辨气相色谱－高分辨质谱联用仪条件。 11.3.2 注入PFK，响应稳定后，按11.1及11.2节要求进行仪器调谐与质量校正后进行样品分 析。每12小时对分辨率及质量校正进行验证。不符合11.1及11.2节要求时应重新进行调谐及 质量校正。 11.3.3 完成测定后，取得各监测离子的色谱图，确认PFK峰离子丰度差异小于20%，检查是 否存在干扰以及2,3,7,8-氯代二噁英类的分离效果，最后进行数据处理。按各化合物的离子荷 质比记录谱图。 11.4 相对响应因子制作 11.4.1 标准溶液测定 标准溶液浓度序列应有 5 种以上浓度，对每个浓度应重复 3 次进样测定。 表 3 质量数设定(监测离子和锁定质量数) 同类物 M+ (M+2)+ (M+4)+ T4CDDs 319.8965 321.8936 P5CDDs 355.8546 357.8517* H6CDDs 389.8157 391.8127* H7CDDs 423.7767 425.7737 O8CDD 457.7377 459.7348 T4CDFs 303.9016 305.8987 P5CDFs 339.8597 341.8568 H6CDFs 373.8207 375.8178 H7CDFs 407.7818 409.7788 O8CDF 441.7428 443.7398 13C12-T4CDDs 331.9368 333.9339 37Cl4-T4CDD 327.8847 13C12-P5CDDs 367.8949 369.8919 13C12-H6CDDs 401.8559 403.8530 13C12-H7CDDs 435.8169 437.8140 13C12-O8CDD 469.7780 471.7750 13C12-T4CDFs 315.9419 317.9389 13C12-P5CDFs 351.9000 353.8970 13C12-H6CDFs 383.8369 385.8610 13C12-H7CDFs 417.8253 419.8220 13C12-O8CDF 451.7860 453.7830 292.9825(四氯代二噁英类定量用) 354.9792(五氯代二噁英类定量用) 392.9760(六氯代二噁英类定量用) 430.9729(七氯代二噁英类定量用) PFK (Lock mass) 442.9729(八氯代二噁英类定量用) 注：* 可能存在 PCBs 干扰 11.4.2 离子丰度比确认 13 标准溶液中化合物对应的两个检测离子的离子丰度比应与理论离子丰度比一致，见表 4，变化范围应在±15%以内。 11.4.3 信噪比确认 标准溶液浓度序列中最低浓度的化合物信噪比(S/N)应大于 10。取谱图基线测量值标准 偏差的 2 倍作为噪声值 N。也可以取噪声最大值和最小值之差的 2/5 作为噪声值 N。以噪声 中线为基准，到峰顶的高度为峰高(信号 S)。 表 4 根据氯原子同位素丰度比推算的理论离子丰度比 M M+2 M+4 M+6 M+8 M+10 M+12 M+14 T4CDDs 77.43 100.0 48.74 10.72 0.94 0.01 P5CDDs 62.06 100.0 64.69 21.08 3.50 0.25 H6CDDs 51.79 100.0 80.66 34.85 8.54 1.14 0.07 H7CDDs 44.43 100.0 96.64 52.03 16.89 3.32 0.37 0.02 O8CDD 34.54 88.80 100.0 64.48 26.07 6.78 1.11 0.11 T4CDFs 77.55 100.0 48.61 10.64 0.92 P5CDFs 62.14 100.0 64.57 20.98 3.46 0.24 H6CDFs 51.84 100.0 80.54 34.72 8.48 1.12 0.07 H7CDFs 44.47 100.0 96.52 51.88 16.80 3.29 0.37 0.02 O8CDF 34.61 88.89 100.0 64.39 25.98 6.74 1.10 0.11 注：(1)M 表示质量数最低的同位素; (2)以最大离子丰度作为 100%. 11.4.4 相对响应因子计算 各浓度点待测化合物相对于提取内标的相对响应因子(RRFes)由下式计算，并计算其平 均值和相对标准偏差，相对标准偏差应在±20%以内，否则应重新制作。 RRFes = es s s es Q A Q A × …………………………………………(1) 式中： Qs — 标准溶液中待测化合物的绝对量，pg； Qes — 标准溶液中提取内标物质的绝对量，pg； As — 标准溶液中待测化合物的监测离子峰面积之和； Aes — 标准溶液中提取内标物质的监测离子峰面积之和。 提取内标相对于进样内标的相对响应因子（RRFrs）由下式计算。 RRFrs = rs es es rs Q A Q A × …………………………………………(2) 14 式中： Qes — 标准溶液中提取内标物质的绝对量，pg； Qrs — 标准溶液中进样内标物质的绝对量，pg； Aes — 标准溶液中提取内标物质的监测离子峰面积之和； Ars — 标准溶液中进样内标物质的监测离子峰面积之和 。 11.5 样品测定 取得相对响应因子之后，对处理好的分析样品按下述步骤测定： 11.5.1 标准溶液确认 选择中间浓度的标准溶液，按一定周期或频次(每 12 小时或每批样品测定至少 1 次)测 定。浓度变化不应超过±35%，否则应查找原因，重新测定或重新制作相对响应因子。 11.5.2 测定样品 将空白样品和分析样品按照 11.3 所述的程序进行测定，得到二噁英类各监测离子的色 谱图。 12 数据处理 12.1 色谱峰确认 12.1.1 进样内标确认 分析样品中进样内标的峰面积应不低于标准溶液中进样内标峰面积的 70%。否则应查找 原因，重新测定。 12.1.2 色谱峰确认 在色谱图上，对信噪比 S/N 大于 3 的色谱峰视为有效峰。 12.1.3 峰面积：计算 12.1.2 中确认的色谱峰的峰面积。 12.2 定性 12.2.1 二噁英类同类物 二噁英类同类物的两个监测离子在指定保留时间窗口内，并同时存在且其离子丰度比与 表 4 所列理论离子丰度比一致，相对偏差小于 15%。同时满足上述条件的色谱峰定性为二噁 英类物质。 12.2.2 2,3,7,8-位氯代二噁英类 除满足 12.2.1 节要求外，色谱峰的保留时间应与标准溶液一致(±3s 以内)，同内标的相 对保留时间亦与标准溶液一致(±0.5%以内)。同时满足上述条件的色谱峰被定性为 2,3,7,8-位 氯代二噁英类。 12.3 定量 15 12.3.1 采用内标法计算分析样品中被检出的二噁英类化合物的绝对量(Q)，按下式计算 2,3,7,8-位氯代二噁英类化合物的 Q。对于非 2,3,7,8-氯代二噁英类，采用具有相同氯取代原 子数的 2,3,7,8-位氯代二噁英类 RRFes均值计算。 Q = es es es QA A RRF × …………………………………………(3) 式中： Q — 分析样品中待测化合物的量，ng； A — 色谱图待测化合物的监测离子峰面积之和； Aes —提取内标的监测离子峰面积之和； Qes —提取内标的添加量，ng； RRFes —待测化合物相对提取内标的相对响应因子。 12.3.2 用下式计算样品中的待测化合物浓度，结果修约为 2 位有效数字。 ρ = (1 ) Q m w− ……………………………………………(4) 式中： ρ — 样品中待测化合物的浓度，ng/kg； Q — 样品中待测化合物总量，ng； m — 样品量，kg； w —含水率，%。 12.4 提取内标的回收率 根据提取内标峰面积与进样内标峰面积的比以及对应的相对响应因子(RRFrs)均值，按公 式计算提取内标的回收率并确认提取内标的回收率在表 5 规定的范围之内。若提取内标的回 收率不符合表 5 规定的范围，应查找原因，重新进行提取和净化操作。 R = 100%es rs rs rs es A Q A RRF Q × × ………………………………(5) 式中： R — 提取内标回收率，%； Aes — 提取内标的监测离子峰面积之和； Ars —进样内标的监测离子峰面积之和； Qrs —进样内标的添加量，ng； RRFrs —提取内标相对于进样内标的相对响应因子； Qes — 提取内标的添加量，ng。 12.5 检出限 12.5.1 仪器检出限 选择制作相对响应因子的系列浓度标准溶液中最低浓度的标准溶液进行 5 次重复测定， 16 对溶液中二噁英类的 2,3,7,8-位氯代二噁英类进行定量，计算测定值的标准偏差 s，取标准偏 差的 3 倍(3s)，修约为 1 位有效数字作为仪器检出限。仪器检出限限值规定为四氯～五氯代 二噁英类 0.1pg，六氯～七氯代二噁英类 0.2pg，八氯代二噁英类 0.5pg。当测得仪器检出限 高于限值时，应查找原因，重新测定使其满足标准限值的要求。实验室应定期对仪器的检出 限进行检验和确认。 12.5.2 方法检出限 使用与实际采样操作相同的试剂，按照本方法进行提取，提取液中添加标准物质，添加 量为仪器检出限的 3～10 倍；然后进行与样品处理相同的净化、仪器分析、定性和定量操作。 重复上述操作空白测定，共计 5 次。计算测定值的标准偏差，取标准偏差的 3 倍修约为 1 位有效数字作为方法检出限。 表 5 提取内标回收率 内标 范围 内标 范围 四氯代 13C-2378-T4CDD 25%～164% 13C-2378-T4CDF 24%～169% 13C-12378-P5CDD 25%～181% 13C-12378-P5CDF 24%～185%五氯代 13C-23478-P5CDF 21%～178% 13C-123478-H6CDD 32%～141% 13C-123478-H6CDF 32%～141% 13C-123678-H6CDD 28%～130% 13C-123678-H6CDF 28%～130% 13C-234678-H6CDF 28%～136% 六氯代 13C-123789-H6CDF 29%～147% 13C-1234678-H7CDD 23%～140% 13C-1234678-H7CDF 28%～143%七氯代 13C-1234789-H7CDF 26%～138% 八氯代 13C-O8CDD 17%～157% 12.5.3 样品检出限 按下式计算样品检出限，样品检出限应在评价浓度的 1/10 以下。 1 1000 (1 ) L DL D m w ρ = × − ………………………………(6) 式中： ρDL — 样品检出限，ng/kg； DL — 方法检出限，pg； m — 称取样品量，kg； w —含水率，%。 17 13 报告 13.1 报告格式 结果报告宜采用表格的形式，表中应包括测定对象、实测浓度、采用的毒性当量因子以 及毒性当量浓度等内容（参见附录 E 中的例子）。 13.2 测定对象 测定对象包括 17 种 2,3,7,8-位氯代二噁英类、四氯代～八氯代二噁英类(T4CDDs～ O8CDD 和 T4CDFs～O8CDF)的同类物及其总和，见表 6。 13.3 计算 13.3.1 实测浓度 大于样品检出限的二噁英类同类物浓度直接记录，低于样品检出限的浓度记为低于样品 检出限(N.D.)。同类物总量浓度根据各异构体浓度累加计算，二噁英类总量浓度则根据各同 类物浓度累加计算。 13.3.2 等价毒性当量 2,3,7,8-位氯代二噁英类的实测浓度进一步换算为等价毒性当量浓度(TEQ)，毒性当量浓 度为实测浓度与该同类物的毒性当量因子(表 7)的乘积。对于低于样品检出限的测定结果如 无特别指明，使用样品检出限的二分之一计算毒性当量。 表 6 二噁英类测定对象的表示方法 氯取代数 PCDDs PCDFs 四氯 T4CDDs 2,3,7,8-T4CDD T4CDDs 总量 T4CDFs 2,3,7,8-T4CDF T4CDFs 总量 五氯 P5CDDs 1,2,3,7,8-P5CDD P5CDDs 总量 P5CDFs 1,2,3,7,8-P5CDF 2,3,4,7,8-P5CDF P5CDFs 总量 六氯 H6CDDs 1,2,3,4,7,8-H6CDD 1,2,3,6,7,8-H6CDD 1,2,3,7,8,9-H6CDD H6CDDs 总量 H6CDFs 1,2,3,4,7,8-H6CDF 1,2,3,6,7,8-H6CDF 1,2,3,7,8,9-H6CDF 2,3,4,6,7,8-H6CDF H6CDFs 总量 七氯 H7CDDs 1,2,3,4,6,7,8-H7CDD H7CDDs总量 H7CDFs 1,2,3,4,6,7,8-H7CDF 1,2,3,4,7,8,9-H7CDF H7CDFs 总量 18 八氯 O8CDD 1,2,3,4,6,7,8,9-O8CDD O8CDF 1,2,3,4,6,7,8,9-O8CDF 总 PCDDs 总 PCDFs Σ(四氯～八氯) Σ(PCDDs+PCDFs) 13.3.3 浓度单位 实测浓度单位以 ng/kg 表示，毒性当量浓度单位以 ng TEQ/kg 表示。 13.3.4 数值修约与表达 报告检出限按数值修约规则 GB 8170 修约为 1 位有效数字。浓度结果位数应不多于检 出限位数，按数值修约规则 GB 8170 修约为 2 位或 1 位有效数字。 表 7 二噁英类的毒性当量因子(TEF) 异构体 WHO-TEF(2005) I-TEF 2,3,7,8-T4CDD 1 1 1,2,3,7,8-P5CDD 1 0.5 1,2,3,4,7,8-H6CDD 1,2,3,6,7,8-