仁术健胃颗粒对慢性萎缩性胃炎脾气_省略_证大鼠血清ET和NOS的实验研究_史淋峰

收稿日期:2011 － 12 － 26 基金项目:江苏省科技厅科技基础实施建 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 划项目(BM2009903 － KF04) 作者简介:史淋峰(1986 －) ，男，江苏人，硕士研究生，研究方向:中 药药理学。 通讯作者:朱萱萱(1952 －) ，女，江苏人，主任药师、教授，博士研究 生导师，研究方向:中药药理学。 － 1 参与 PCOS的发病。近年来，越来越多的证据 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明，在 人体卵巢中上存在 IGF—l 及 IGFBP － 1mRNA 的表达［6］。 IGF － l及 IGFBP － 1 对促性腺激素引起的卵泡发育及卵巢 性激素合成的调节作用已经逐步得到了证实。IGF － l 能 显著提高卵泡膜细胞对 LH 的敏感性，与 LH 协同作用，提 高卵泡膜细胞雄激素的合成［6］。IGFBP － l 主要由肝脏产 生，其合成受促性腺激素、IGF － 1 及 INS的调节。Debbie［7］ 认为，IGFBP － 1 水平下降导致卵泡内游离的 IGF － 1 及其 受体高度表达，启动多个小卵泡同时发育，是形成多囊卵巢 的重要原因。卵泡期 IGFBP － 1 抑制卵泡膜细胞 IGF － 1 诱导的雄激素的合成，促进颗粒细胞雌激素的合成，从而抑 制卵泡闭锁、不排卵。本实验通过 IGF － l 和 IGFBP － l 两 种特异性的指标对不同模型 PCOS 大鼠卵巢组织进行检 测。发现来曲唑造模后 IGF － l 在大鼠卵巢组织中表达增 强，而 IGFBP － l则普遍呈低表达。硫酸普拉睾酮钠与硫酸 普拉睾酮钠联合 HCG后 IGF － l在大鼠卵巢组织中表达均 增强，但 IGFBP － l在硫酸普拉睾酮钠组呈低表达，而硫酸 普拉睾酮钠联合 HCG组仅有少量表达且仅平均光密度值 有统计学意义。上述结果结合形态学观察，3 种造模组均 能诱导 SD雌性大鼠 PCOS动物模型，其卵巢病理改变与 P- COS病人相似。综上所述:采用来曲唑立 PCOS 大鼠动物 模型，其对卵巢形态学以及 IGF － l、IGFBP － l 因子的影响 更接近临床，是较为理想的 PCOS动物造模方法。 参考文献 ［1］ 杨正望，尤昭玲，冯光荣，等．多囊卵巢综合征动物模型的构 建及中药干预机制述评［J］． 湖南中医学院学报，2006，26 (I) :56 － 58． ［2］ Homburg R，Pariente C． Lunenfeld B，et al． The role of insulin － likegrowth hctor － l(IGF － I)and IGF binding protein － 1(IG- FBP － 1)in the pathogenesis of polycystic ovary syndrome［J］． Hum Reprod，1992，7:1379 － 1383． ［3］ Van DW，Roelfsema F，Helmerhorst FH，et al． Low amplitude and disorderly spontaneous growth hormone release in obese womLan with Or without polycystic ovary syndrome［J］． J Clin Endocrinol Metab，2002，87:4225 － 4230． ［4］ Silfen ME． Denburg MR，Maniho AM，et al． Early endocrine． met- abolic，and sonographic characteristics of polyCyStiC ovary syn － drome(PCOS) :comparison betweennonobese andobeseadoles- cents［J］． J Clin Endccrinol Metab，1999，88:4682 － 4688． ［5］ 田俊华，田秀珠，马淑状，等． IGF － I 和 TGF － B 在多囊卵巢 综合征大鼠卵巢中的表达及意义［J］． 山西医科大学学报， 2009，40(8) :702 ［6］ Leonid P． Nicholas A，Cataldo ZR，et al． The Insulln － Related O- varian Regulatory System in Health and Disease［J］． Endocrine Reviews，1999，20:535 － 582． ［7］ Debbie． Willis，Hazel Waston et al． Premature response to lutein- izing hormone of granulose cells from anovulatory women with P- COS:Relevance to mechanism of anovulation［J］． J Clin Endo- crinol Metab，1998(83) :3484 － 3991． 第 30 卷 第 5 期 2 0 1 2 年 5 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 30 No． 5 May 2 0 1 2 中 华 中 医 药 1058 学 刊 仁术健胃颗粒对慢性萎缩性胃炎脾气虚证 大鼠血清 ET和 NOS的实验研究 史淋峰1，朱萱萱2，顾和亚2 (1．南京中医药大学，江苏 南京 210029;2．南京中医药大学附属医院，江苏 南京 210029) 摘 要:目的:通过观察仁术健胃颗粒对慢性萎缩性胃炎(CAG)脾气虚证大鼠内皮素(ET)和一氧化氮合酶 (NOS)的影响，探讨仁术健胃颗粒预防和治疗慢性萎缩性胃炎的机制。方法:大鼠(除正常组)采用自由饮用 MNNG溶液，灌胃 40%的酒精，饥饱失常，疲劳运动相结合的方法复制 CAG 脾气虚证模型。然后将 CAG 脾气虚 证模型大鼠随机分为相应各组。实验末检测各组大鼠血清中的 ET和 NOS水平。结果:CAG脾气虚证模型组大 鼠 ET和 NOS水平与正常组比较都显著升高(P ＜ 0． 05) ;仁术健胃颗粒 12g /kg可显著降低 CAG大鼠 ET水平(P ＜ 0． 05) ，6g /kg和 3g /kg剂量组剂量组可显著降低 CAG大鼠 NOS的水平(P ＜ 0． 05)。结论:仁术健胃颗粒治疗 慢性萎缩性胃炎脾气虚证与降低机体 ET和 NOS水平有关。 关键词:仁术健胃颗粒;NOS;ET;CAG;脾气虚证 中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1673 － 7717(2012)05 － 1058 － 03 Effect of Renzhu Jianwei Granula on ET and NOS Contents in CAG Rats with Spleen －Qi Deficiency SHI Lin-feng1，ZHU Xuan-xuan2，GU He-ya2 (1． Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210029，Jiangsu，China; 8501 第 30 卷 第 5 期 2 0 1 2 年 5 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 30 No． 5 May 2 0 1 2 中 华 中 医 药 1059 学 刊 2． Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210029，Jiangsu，China) Abstract:Objective:To observe the effect of Chinese medicine Renzhu Jianwei Granula on ET and NOS contents in chronic atrophic gastritis(CAG)rats with spleen － Qi deficiency and explore the mechanism of protecting CAG． Method: CAG rats with spleen － Qi deficency model were established with the comprehensive methods． Then the rats were randomly divided into CAG spleen － Qi deficiency model group，Weifuchun granule treatment group，high，middle and low dose of Renzhu Jianwei granule treatment groups． At the end of experiments ET and NOS contents were detected to observe the effect of Renzhu Jianwei Granula and explore the mechanism of protecting CAG． Results:Compared with the normal group， ET and NOS levels were significantly increased(P ＜ 0． 05)in CAG rats with spleen － Qi deficiency model group;ET and NOS levels in Renzhu Jianwei granule groups decreased significantly compared with those in model group(P ＜ 0． 05)． Conclusion:Renzhu Jianwei granule can reduce ET and NOS levels which may be the mechanism of treating chronic a- trophic gastritis． Key words:Renzhu Jianwei granule;NOS;ET;CAG;spleen － Qi deficency 仁术健胃颗粒现为江苏省中医院院内制剂，临床上治 疗 CAG脾气虚证患者疗效显著，长期服用无明显的不良反 应。本实验采用致癌剂 N －甲基 － N －硝基 － N －亚硝基 胍(MNNG)［1 － 2］，配合饥饱失常，疲劳耗气，破气泻下的方 法建立 CAG脾气虚证模型［3 － 6］，给予仁术健胃颗粒进行治 疗，观察仁术健胃颗粒的治疗效果和治疗 CAG脾气虚证的 机制。 1 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与方法 1． 1 实验药物 N － 甲基 － N － 硝基 － N － 亚硝基胍 (MNNG) :东京仁成工业株式会社制造，批号:GNGMH;破 气泻下煎剂:生大黄，生厚朴，生枳实以 1 ∶ 1 ∶ 1 的比例，煎 煮并浓缩为每毫升含 1g 生药。生大黄饮片、生厚朴饮片: 安徽省万生中药饮片有限公司，批号:110301;生枳实饮片: 安徽省万生中药饮片有限公司，批号:110401;胃复春片:杭 州胡庆余堂药业有限公司，批号:110469;仁术健胃颗粒:江 苏省中医院制剂部提供，批号:110502。 1． 2 试剂与仪器 FA1004 型电子分析天平:上海精科天 平厂;大小鼠疲劳仪:中国医学科学院药物研究所，型号: DXP － 2;酶标仪:瑞士 TECAN 公司，型号:SUNRISE。ET 和 NOS 试剂盒，购自南京建成生物工程研究所，批号 110630。 1． 3 实验动物及分组 SD 大鼠 70 只，120 ～ 140g，雌雄各 半，由南通大学动物中心提供，合格证号:SCXK(苏)2008 － 0010。 1． 4 造模及实验方法 正常组，仅以生理盐水同等条件下 灌胃，造模大鼠适应性饲养 3 天，第 4 天开始给予 150ug / mL的 MNNG溶液自由饮用，每周两次按 1mL /100g灌胃给 予 40%的酒精，每天以 170ug /mL的 MNNG溶液 1mL /100g 灌胃攻击，连续 10 周;第 5 周开始结合饥饱失常(逢单禁 食，逢双饱食) ，每天灌胃 1 次破气泻下煎剂 2mL /100g，复 制脾虚证，同时采用大鼠疲劳仪配合每天训练 30min /天以 致脾气虚证，连续 5 周。造模开始后每天观察大鼠的表现， 以出现以下症状为造模成功:精神委靡，嗜卧，拱背，蜷缩扎 堆、眼眯，被毛憔悴，耳尾色白、毛无光泽、抓取时挣扎无力、 软便或塘便，泄泻，食欲减退，体肌瘦削，体温不变或略有降 低。将 CAG脾气虚证模型大鼠随机分为 CAG脾气虚证模 型组(给予等量 NS) ，胃复春组(0． 86g /kg) ，仁术健胃颗粒 高剂量组:12g /kg，中剂量组:6g /kg 和低剂量组:3g /kg，每 组给予相应的药物连续治疗 5 周，正常组给予等量 NS。实 验末将大鼠麻醉后，腹主动脉取血，离心取血清，按照试剂 盒检测 说明书 房屋状态说明书下载罗氏说明书下载焊机说明书下载罗氏说明书下载GGD说明书下载 检测 ET和 NOS水平。 1． 5 统计学处理 应用 SPSS 16． 0 统计软件，数据用 珋x ± s 表示，P ＜ 0． 05 为有统计学意义。 2 实验结果 2． 1 仁术健胃颗粒对大鼠体重的影响 CAG 模型组在使 用 MNNG造模第 1 周结束时体重就降低，与正常组比较存 在显著性差异(P ＜ 0． 05) ;使用胃复春治疗组治疗第 2 周 时，体重增高明显，与模型组比较存在显著性差异(P ＜ 0． 05) ;使用仁术健胃颗粒 12g /kg治疗第 2 周时，体重增高 明显，与模型组比较存在显著性差异(P ＜ 0． 05) ;使用仁术 健胃颗粒 6g /kg治疗第 1 周结束时，体重增高明显，与模型 组比较存在显著性差异(P ＜ 0． 05) ;使用仁术健胃颗粒 3g / kg治疗第 1 周结束时，体重增高明显，与模型组比较存在 显著性差异(P ＜ 0． 05)。结果见表 1。 表 1 仁术健胃颗粒对大鼠体重(g)的影响(n = 10，珋x ± s) 组别 剂量(g /kg) 初始体重 1 周体重 2 周体重 3 周体重 4 周体重 正常组 － 135． 63 ± 17． 41 175． 00 ± 24． 50 213． 75 ± 31． 37 246． 88 ± 35． 35 266． 88 ± 34． 53 CAG脾气虚证模型组 － 130． 63 ± 9． 43 143． 75 ± 9． 91 163． 75 ± 8． 35 173． 13 ± 9． 98 184． 38 ± 13． 74 胃复春组 0． 86 133． 75 ± 6． 94 146． 88 ± 7． 99 161． 88 ± 9． 61 176． 88 ± 11． 00 186． 25 ± 13． 02 仁术健胃颗粒高剂量组 12 133． 13 ± 3． 72 144． 38 ± 7． 29 160． 00 ± 9． 64 175． 63 ± 8． 63 186． 25 ± 11． 26 仁术健胃颗粒中剂量组 6 131． 88 ± 3． 72 148． 13 ± 6． 51 169． 38 ± 13． 21 183． 75 ± 15． 53 200． 00 ± 20． 70 仁术健胃颗粒低剂量组 3 132． 50 ± 10． 00 146． 25 ± 14． 82 163． 75 ± 14． 58 179． 34 ± 20． 60 189． 38 ± 20． 26 5 周体重 6 周体重 7 周体重 8 周体重 9 周体重 10 周体重 301． 25 ± 46． 19 314． 38 ± 19． 89 343． 75 ± 60． 58 350． 63 ± 62． 82 365． 63 ± 66． 79 358． 75 ± 69． 48 187． 50 ± 17． 32 190． 00 ± 20． 53 189． 38 ± 18． 02 201． 88 ± 21． 37 206． 88 ± 26． 31 210． 00 ± 13． 89 196． 88 ± 16． 02 199． 38 ± 14． 74 204． 38 ± 14． 50 215． 00 ± 12． 82 225． 63 ± 18． 21 230． 00 ± 15． 81 201． 88 ± 18． 50 203． 75 ± 16． 64 208． 13 ± 23． 44 224． 38 ± 14． 99 236． 88 ± 23． 29 243． 75 ± 23． 26 205． 63 ± 24． 27 207． 50 ± 21． 71 222． 50 ± 20． 70 233． 13 ± 25． 90 240． 63 ± 30． 41 246． 25 ± 22． 64 198． 13 ± 22． 03 201． 25 ± 21． 51 211． 88 ± 21． 03 225． 63 ± 20． 43 236． 88 ± 20． 86 240． 63 ± 24． 12 9501 第 30 卷 第 5 期 2 0 1 2 年 5 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 30 No． 5 May 2 0 1 2 中 华 中 医 药 1060 学 刊 2． 2 仁术健胃颗粒对大鼠脾重和胃重的影响 CAG 模型 组胃指数高于正常组具有显著性差异(P ＜ 0． 01)。结果见 表 2。 表 2 仁术健胃颗粒对大鼠脾指数(g /100g)和胃指数 (g /100g)的影响(n = 10，珋x ± s) 组别 剂量(g /kg) 末次体重 脾脏指数 胃指数 正常组 － 358． 75 ± 69． 48 0． 23 ± 0． 03 0． 54 ± 0． 10 CAG脾气虚证模型组 － 210． 00 ± 13． 89 0． 24 ± 0． 07 0． 85 ± 0． 10 胃复春组 0． 8616 230． 00 ± 15． 81 0． 25 ± 0． 03 0． 79 ± 0． 10 仁术健胃颗粒高剂量组 12 243． 75 ± 23． 26 0． 23 ± 0． 03 0． 74 ± 0． 16 仁术健胃颗粒中剂量组 6 246． 25 ± 22． 64 0． 22 ± 0． 03 0． 71 ± 0． 07 仁术健胃颗粒低剂量组 3 240． 63 ± 24． 12 0． 25 ± 0． 05 0． 77 ± 0． 09 2． 3 仁术健胃颗粒对大鼠血清 ET 和 NOS 的变化 CAG 脾气虚证模型组 ET水平高于正常组具有显著性差异(P ＜ 0． 05) ;经采用仁术健胃颗粒干预，12g /kg 剂量组 ET 水平 低于 CAG脾气虚证模型组(P ＜ 0． 05) ，6g /kg和 3g /kg剂量 组 ET水平有降低的趋势，但无统计学意义。CAG 脾气虚 证模型组 NOS 活力高于正常组具有显著性差异(P ＜ 0． 05) ;胃复春组和仁术健胃颗粒 6g /kg 和 3g /kg 剂量组 NOS活力低于 CAG 脾气虚证模型组，具有显著性差异(P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01)。结果见表 3。 表 3 仁术健胃颗粒对 CAG脾气虚证大鼠血清 ET和 NOS的变化(n = 8，珋x ± s) 组别 剂量(g /kg) ET浓度(ng /L) NOS(nmol /mL) 正常组 － 300． 25 ± 42． 88 10． 05 ± 5． 47 CAG脾气虚证模型组 － 339． 44 ± 27． 20△ 16． 24 ± 4． 41△ 胃复春组 0． 86 326． 64 ± 23． 67 10． 30 ± 6． 67＊ 仁术健胃颗粒高剂量组 12 299． 42 ± 32． 09＊ 12． 91 ± 5． 78 仁术健胃颗粒中剂量组 6 317． 99 ± 52． 91 10． 07 ± 2． 28＊＊ 仁术健胃颗粒低剂量组 3 318． 22 ± 34． 90 10． 11 ± 0． 54＊＊ 注:与正常组比较△P ＜ 0． 05;与模型组比较＊P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01。 3 讨 论 慢性萎缩性胃炎是一种常见的消化系统疾病，胃部病 变的进程是从正常胃黏膜 －慢性胃炎 －萎缩性胃炎 －肠上 皮化生 －不典型增生 －胃癌的演变。胃癌的发生和发展是 一个多基因、多因素、多阶段的动态顺序演变过程，涉及多 种癌基因的激活、抑癌基因的失活及由此引起的细胞生物 学行为的改变。当前对胃黏膜保护机制的认识是个立体的 多层次的网络体系，是有自我调节能力的动态过程［7］。有 文献报道，ET参与了 CAG的病理生理进程，其含量的变化 与萎缩的程度有关。在致病因素作用下，ET 释放增加，导 致胃黏膜血流量下降，黏膜损伤，而黏膜损伤又可能使 ET 大量释放，机体对其反应性增加，形成恶性循环，最终导致 黏膜萎缩［8］。 ET通过旁分泌和(或)自分泌方式调节血管张力和血 管血流，维持机体内环境的稳定。由于 ET 具有极强的血 管活性，而胃黏膜血流的稳定对于胃黏膜的完整性又具有 极其重要的作用。ET可通过收缩胃黏膜血管，降低胃黏膜 血流，影响胃壁平滑肌收缩，导致胃运动增强而使胃黏膜损 伤［9］。 ET和 NO是体内一对相互拮抗的血管活性物质。NOS 是催化、生成 NO 的活性酶，分为结构型 NOS(cNOS)和诱 生型 NOS(iNOS) ，cNOS 具有调节局部血流的作用;iNOS 在受到炎性因素刺激时可持续大量释放 NO，导致细胞损 害。NOS广泛存在于胃黏膜中，是 NO合成的关键酶，其活 性直接影响 NO的合成。研究表明，iNOS 诱导产生的大量 NO为其产生病理作用的基础［10］。随炎症的持续发展，大 量的 NO释放入组织，并且炎症病灶区存在许多激活的炎 性细胞，它们在各种内外刺激因素作用下，诱导炎性细胞产 生 iNOS，iNOS活性增强可产生大量 NO 和超氧化物，后两 种生成物可生成细胞毒性更强的过氧化亚硝酸盐，进一步 加重黏膜组织损伤［11］。 实验采用 MNNG建立慢性萎缩性胃炎大鼠模型，结合 饥饱失常，使大鼠营养不良，损伤其脾胃，结合疲劳仪使大 鼠过度运动致疲劳，在疲劳的基础上加用破气泻下煎剂使 气虚证侯更明显模拟临床 CAG 脾气虚证。实验结果表明 CAG脾气虚证大鼠除精神委靡，拱背，蜷缩扎堆、毛无光 泽、抓取时挣扎无力、软便或塘便，食欲减退，体肌瘦削，体 温不变或略有降低外，模型组大鼠的 ET 和 NOS 水平异常 升高，可能是造成胃部病变的原因之一。经仁术健胃颗粒 治疗后大鼠精神状态恢复良好，行动增多，扎堆数目减少， 皮毛整洁，大便成形，体重增加，同时可使异常升高的 ET 和 NOS水平降低。提示仁术健胃颗粒治疗 CAG 脾气虚证 除改善体症外，还可通过降低 CAG 脾气虚证大鼠 ET 水平 增加胃黏膜血流量，减轻缩血管作用，产生正常的胃肠蠕 动，缩短损伤因子在胃内的滞留，保护胃黏膜，恢复和提高 脾胃运化功能，以利于炎症的吸收，使胃黏膜损伤得以改 善。降低 NOS水平，减少机体 NO的产生，从而达到保护胃 黏膜和萎缩腺体的恢复。 参考文献 ［1］ 徐珊，周嘉鹤，王常松，等．慢性萎缩性胃炎证病结合模型的 复制［J］．中国中医药科技，2008，15(1) :6 － 9． ［2］ 朱晓东，林庚金．高盐饲料配合甲基硝基亚硝基肌诱发大鼠 胃癌［J］．上海实验动物科学，2003，23(2) :85 － 89． ［3］ 陈学习． 脾虚证动物模型复制方法研究概况、评价与思考 ［J］．中国当代医药，2010，17(33) :5 － 8． ［4］ 李军兰，方肇勤．气虚证动物模型造模方法综述［J］． 上海中 医药大学学报 2004，18(3) :56 － 60． ［5］ 王丽，毛智慧． 脾气虚证动物模型的复制方法及现状分析 ［J］．辽宁中医药大学学报，2011，13(6) :158 － 160． ［6］ 黄碧燕．关于病证结合动物模型研究现状的思考［J］．中国中 医药信息杂志，2010，17(1) :4 － 6． ［7］ 廖润玲，杨斌．一氧化氮及诱导型一氧化氮合酶的研究进展 ［J］．时珍国医国药，2007，18(4) :980． ［8］ 成映霞，段永强，朱立鸣，等．治萎防变胶囊对萎缩性胃炎大 鼠胃黏膜 NO /NOS和胃泌素、内皮素的影响［J］． 中国老年 学杂志，2011，2(31) :611 － 614． ［9］ 高利忠，陈丁丁，巢杰，等．次枸橼酸铋钾胃黏膜保护作用机 制研究［J］．中国临床药理学与治疗学，2006，11(9) :1069 － 1072． ［10］ 张学智，李超波，梁文郁，等．复方田七胃痛胶囊对胃溃疡大 鼠胃黏膜一氧化氮及内皮素的影响［J］．中国中西医结合消 化杂志，2008，16(5) :281 － 283． ［11］ 沈靖，王润田，徐希平． NO / iNOS 与胃癌关系的研究进展 ［J］．世界华人消化杂志，2000，8(3) :320 － 322． 0601