脲酶
测定原理：
脲酶存在于大多数细菌，真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶，能酶促有机物质分子中肽键的水解。脲酶的作用是极为专性的：它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和碳酸。土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量，有机物质含量，全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性
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征土壤的氮素状况。
土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反映后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法是测定生成的氨量。
试剂配制：
（1）10%尿素溶液：称取10g尿素，用水溶至100ml。
（2）甲苯：取一定量甲苯原液备用。
（3）柠檬酸缓冲液（pH6.7）：称取368g柠檬酸溶于600ml水；称取295g氢氧化钾溶于1L水中。将二液合拼，用1N氢氧化钠调至pH6.7，并用水稀释至2L。
（4）苯酚钠溶液：①称取62.5g苯酚，溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml；②称取27g氢氧化钠溶于100lm水中。将两液保存在冰箱中，使用前将①与②各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。
（5）次氯酸钠溶液：将次氯酸钠用水稀释至活性氯的浓度为0.9%,溶液稳定。
（6）1N氢氧化钠溶液：称取40g氢氧化钠，用水溶至1L。
（7）硫酸铵标准溶液：①称取0.4714g硫酸铵，用水溶至1000ml（1ml含100ug氮）；②往500ml容量瓶中分别注入10,25,40,60,70和90ml溶液①，并又水稀释至刻度（1ml含2,5,8,12,15和18ug氮）。
绘制标准曲线：取6个50ml容量瓶，分别加入10ml②溶液，再加入4ml苯酚钠，仔细混合，加入3ml次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟，用水稀释至刻度。将着色液在光电比色计上用1cm液槽于578nm处进行比色测定，以标准溶液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲线图。
操作步骤
（1）称取10g过一毫米筛的风干土样于100ml三角瓶中。
（2）往三角瓶中加入2ml甲苯（以能全部使土样湿润位度）并放置15分钟。
（3）之后加入10ml10%尿素溶液和20ml柠檬酸缓冲液（PH6.7），并仔细混合。
（4）三角瓶放入37℃恒温箱中，培养24小时。
（5）用热至38℃水稀释至刻度，仔细摇荡，并将悬液用甲苯滤纸于三角瓶中。
（6）显色：吸取1ml滤液于50ml容量瓶中，加入10ml蒸馏水，充分摇荡，然后加入4ml苯酚钠，仔细混合，再加入3ml次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟，用水稀释至刻度，溶液呈现靛酚的蓝色。
（7）在光电比色计上用1cm液槽，于578nm处将显色液进行比色测定。
(8)无土对照：不加土样，其他操作与样品试验相同。
（9）无基质对照：以等体积的水代替基质，其他操作与样品试验相同。
结果计算：
土壤脲酶活性以24小时后100g土壤中NH3—N的毫克数表示。
M=（X样品-X无土-X无基质）*100*10
式中：M—土壤脲酶活性值；
X样品—样品试验的光密度值在标准线上对应得NH3—N毫克数；
X无土—无土对照试验中的光密度值在标准曲线上对应的NH3—N毫克数；
X无基质—无基质对照试验中的光密度值在标准曲线上对应的NH3—N毫克数；
100—样品定容的体积与测定时吸取量的比值；
10—酶活性单位的土重之比值。
注意事项：
（1）不同土壤脲酶素活性相差较大，对不同土壤培养时间可适当地增长或缩短，以求得理想的结果。
（2）在比色过程中，一般可采用1cm液槽，如颜色较浅，可改用2—4cm液槽测定，再经过相应的换算。
（3）近来有人通过测定未水解的尿素量来求得脲酶活性。此法有很多优点，另有专文介绍。
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