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荧光光度法测血清镁.ppt

荧光光度法测血清镁

sany绿儿
2013-06-04 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《荧光光度法测血清镁ppt》,可适用于自然科学领域

实验十三荧光光度法测定血清镁医学检验系临床生物化学与检验教研室某些物质受到光照射时吸收某种波长的光之后会发射出比原来吸收波长更长的光当激发光停止照射这种光线也随之消失此种光称为荧光(fluorescence)。主要组成及部件的功能荧光分光光度计工作原理及仪器结构框图光源氙灯激发单色器样品池光电倍增管数据处理仪器控制发射单色器一、原理在乙醇醋酸溶液中血清中的镁和羟基喹啉在激发波长nm时发出特异性荧光。在同样条件下与镁的标准液比较即可求得血清镁的含量。在pH的乙醇醋酸溶液中镁发出的特异性荧光强度为镁在pH的乙醇醋酸溶液中发出的特异性荧光强度的倍。因此可用pH的乙醇醋酸溶液作调零管免去用其他作为空白调零以简化操作过程。二、试剂.羟基喹啉无水乙醇溶液:在g羟基喹啉(AR)中加入ml无水乙醇。此液应新鲜配制。.pH醋酸缓冲液(mmolL):取冰醋酸ml加入ml双蒸水用molLNaOH调pH至±然后加双蒸水至ml。.pH醋酸缓冲液(mmolL):称取无水醋酸钠g加入ml双蒸水用冰醋酸调pH至±然后加双蒸水至ml。.试剂A:pH醋酸缓冲液份羟基喹啉无水乙醇溶液份无水乙醇份双蒸水份混匀。.试剂B:pH醋酸缓冲液份羟基喹啉无水乙醇溶液份无水乙醇份双蒸水份混匀。.镁标准贮存液(mmolL):精确称取醋酸镁g加蒸馏水溶解并定容至ml。.镁标准应用液(mmolL)三、操作按下加入试剂。混匀用力振摇分钟离心min(rmin)。取上清液进行荧光测定。激发波长nm发射波长nm。用各自A管调零读取相应B管的荧光强度。血清镁(mmolL)=测定B管荧光强度读数标准B管荧光强度读数×计算参考范围:血清镁:~mmolL.荧光在室温下放置小时稳定小时后荧光强度读数呈逐渐增加的趋势。因此测定最好在小时内完成。.标本应避免溶血因红细胞内含镁量为血清的倍血红蛋白大于gL时出现正干扰。.所用器材要防止镁的污染。.所用试管应经稀盐酸处理及去离子水清洗、干燥。四、注意事项五、临床意义.血清镁降低镁摄入减少和丢失增多都可产生低镁血症。其最主要的原因是长期进食不良长期消化液丢失和长期只靠输液而无镁的补充。一般镁缺乏都产生血钙过高镁缺乏的症状表现为神经肌肉和心脏的兴奋性升高。.血清镁升高()高镁血症的一个主要原因是服用治疗剂(如硫酸镁)过量。肾功能不全特别是尿少的患者接受镁剂注射后(少数可因口服或灌肠)容易发生镁中毒(当血清镁离子高于mmolL时通常会出现中毒症状)。镁过多的症状表现为拮抗神经冲动传递导致肌肉无力。()尿毒症、急性和慢性肾衰、慢性肾小球肾炎。()内分泌疾病如甲状腺功能减退症、甲状旁腺功能减退症、艾迪生病和糖尿病昏迷。()多发性骨髓瘤严重脱水症红斑狼疮等。六、方法学评价.线性范围为~mmolL,高于甲基百里香酚蓝法(~mmolL)及胶束增容分光光度法(~mmolL)。.精密度()批内CV:一份混合血清样品平行测定次x=mmolLs=mmolLCV=。()日间CV:取三份血清样品每份血清每天上、下午各测一次共次。日间CV~平均日间CV。.回收试验:每ml血清加入mlmmolL镁标准贮存液。共做五份血清每份血清做四次。回收率为~,平均回收率为。.干扰试验:当镁浓度为mmolL钙浓度小于mmolL时钙对荧光光度法测定镁的干扰很小(<)。当钙浓度在mmolL以上时可产生左右的正值误差。因此在正常血清钙浓度(~mmolL)时钙对荧光光度法测定血清镁的干扰极小。.方法学比较:用本法及原子吸收分光光度法(岛津AAG)对例血清进行血镁浓度平行。结果表明荧光光度法(x=mmolLs=mmolL)与原子吸收分光光度法(x=mmolLs=mmolL)的差异无显著意义(t=P>)。r=。

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