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日粮中添加及停用恩拉霉素对断奶仔猪生长性能和消化吸收功能的影响.pdf

日粮中添加及停用恩拉霉素对断奶仔猪生长性能和消化吸收功能的影响

ziyouren
2013-06-03 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《日粮中添加及停用恩拉霉素对断奶仔猪生长性能和消化吸收功能的影响pdf》,可适用于农林牧渔领域

动物营养学报():.ChineseJournalofAnimalNutritiondoi:./j.issn.x...日粮中添加及停用恩拉霉素对断奶仔猪生长性能和消化吸收功能的影响罗亚波L邹成义。陈洪L。余冰陈代文。(.教育部动物抗病营养重点实验室雅安.四川农业大学动物营养研究所雅安.四JII省畜牧科学研究院饲料研究所成都)摘要:本试验旨在研究添加和停用恩拉霉素对断奶仔猪生长性能以及消化酶活性、肠道形态、肠黏膜钠/葡萄糖共转运载体(SGLT)和二肽转运载体(PepT)mRNA表达量的影响。选取日龄断奶体重相近性别一致的PIC仔猪共O头随机分成个处理每个处理个重复每重复头猪。对照、处理、处理和处理的日粮中分别添加、、和mg/kg恩拉霉素饲喂周。第周各处理仔猪停用恩拉霉素饲喂基础日粮。第天清晨所有仔猪腹腔注射mg/kg脂多糖(LPS)注射后第天屠宰取样测定消化酶活性、肠道形态、SGLTlmRNA和PepTmRNA表达量。结果表明前周处理和处理的仔猪日增重与对照组相比有升高的趋势(P>.)处理的仔猪日增重显著低于处理和处理(P<O.)第周各处理日增重和采食量均无显著差异(P>O.)。仔猪日粮中连续周添加恩拉霉素、停用周后显著降低了各处理空肠淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶的活性(P<O.)显著降低了十二指肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度比(P<.)并显著升高了SGLT、PepTmRNA的表达量(P<O.)。本试验表明日粮中添加mg/kg的恩拉霉素对仔猪具有一定的促生长作用停用恩拉霉素并受到应激的条件下会降低断奶仔猪消化酶活性损坏肠黏膜结构降低仔猪消化吸收功能。关键词:停用恩拉霉素消化酶肠道形态转运载体中图分类号:$$.文献标识码:A文章编号:X(J抗生素作为促生长剂在动物生产上的应用已有近年的历史抗生素的促生长作用已得到大家的认可口。恩拉霉素是一种多肽类抗生素对革兰氏阳性菌有较强的抑制作用。它不易被机体吸收且在动物体内无残留不易产生耐药性。在国外被广泛用作促生长剂。抗生素能提高机体养分消化、吸收功能已得到大多数学者的肯定。饲喂抗生素可提高猪、鸡日粮的代谢能提高畜禽对蛋白质的消化率。。但是停用抗生素对畜禽生长性能及消化生理的影响目前还未见报道。因此本试验在停用恩拉霉素后研究其对猪的生长及消化吸收功能的影响。材料与方法.试验材料恩拉霉素有效含量为%先灵葆雅公司提供。.试验日粮参照美国NRC()~lkg仔猪的营养需要标准配合粉状全价料基础日粮组成及营养水平见表。.试验设计与饲养管理选取日龄断奶体重相近性别一致的PIC仔猪共头随机分成个处理每个处理个重复每重复头猪。试验采用单因子试验设计对照、处理、处理和处理的日粮中分别添加、、O和mg/kg恩拉霉素。试验前周各组分别饲喂不同添加剂量的恩拉霉素日粮。第周各处理仔猪停用恩拉霉素饲喂基础日粮停药期为周。第天清晨所有仔猪腹腔注射mg/kg脂多糖(LPS)造成免疫应激应激后第天屠宰取样。所有仔猪自由采食和饮水试验期间每天记录采食量、每周称重。计算日平均采食量、日增重和耗料增重比。收稿日期:基金项目:教育部创新团队“猪抗病营养的分子机制(IRT)”作者简介:罗亚波(一)男四川I珙县人硕士主要从事猪的营养方面研究。Email:luoyabo.tom*通讯作者:陈代文教授E.mail:chendwzsicau.edu.cn动物营养学报卷表基础日粮组成及营养水平(风干基础)TableCompositionandnutrientlevelsofbasaldiets(airdrybasis%)项目Items含量Content原料Ingredients玉米Corn膨化玉米PuffingCorn麦麸Wheatbran膨化大豆Puffingsoybean乳清粉Wheypowder酵母细胞提取物Yeastextract发酵豆粕Fermentationsoybeanmeal进口蒸汽鱼粉Importedsteamfishmeal去皮豆粕Decorticationsoybeanmeal石粉Limestone磷酸氢钙CaHPODL一蛋氨酸DLMet赖氨酸盐酸盐LysHC苏氨酸Thr甜味剂Sweetingagent氯化胆碱Cholinechloride(O%)抗氧化剂Antioxidant微量元素预混剂Mineralpremix”复合维生素Multivitaminpremix复合酶制剂Multienzyme合计Total营养水平Nutrientlevels消化能DE(MJ/kg)粗蛋白质CP粗脂肪EE钙Ca有效磷AP灰分Ash粗纤维CF赖氨酸Lys蛋氨酸Met半胱氨酸Cys苏氨酸Thr.O.O.O.O.OO..O.OO.OO..O....O.O.O...O.O....O.......”为每千克日粮提供Providedperkgofdiet:氨基酸铁ferricaminoacids(美国金宝ZINPROAmerica%)mgCuSO·HO(%)mgMnSO·HO(.%)mg氨基酸锌zincaminoacids(美国金宝ZINPROAmerica%)mgNaSeO·HO(O.%)mgKI(%)mg。为每千克日粮提供Providedperkgofdiet:VAIUVDIUVEmgVKmgVBmgVBmgVBmgVBg泛酸pantothenicacidmg叶酸folicacid.mg生物素bioting。.样品采集与制备试验结束后将头仔猪全部颈动脉放血屠宰取空肠前端食糜于液氮中速冻转入一℃冰箱保存备用。取空肠中段cm于液氮中速冻一℃保存备用。另取十二指肠、空肠中段cm于福尔马林溶液中保存观察肠道形态。.测定指标及测定方法..消化酶活力的测定采用试剂盒法对空肠近端内容物中的胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性进行测定试剂盒均购于南京建成生物工程研究所按试剂盒说明书进行测定。..肠道黏膜形态的测定将空肠样品经固定、修整、脱水包埋、切片和HE染色制成切片光镜下用显微测微尺测定绒毛长度和隐窝深度。绒毛高度以肠腺开口至绒毛顶端垂直高度为准隐窝深度以肠腺开口至最底部垂直深度为准。..钠/葡萄糖共转运载体(sodiumglucosetransporterSGLT)和二肽转运载体(peptidetransporterPepT)mRNA表达量的测定采用实时荧光定量法测定SGLT和PepT的表达丰度。具体步骤如下:...总RNA的提取取一℃保存的空肠组织~mg转移至用液氮预冷的研钵中研磨成粉末状转入EP管中。加入mLRNAisoplus(TaKaRaBiotechnologyJapan)混匀至样品完全融化。提取过程参照TaKaRaBiotechnology公司试剂盒说明书进行。总RNA通过凝胶电泳检测其完整性。用核酸蛋白仪(BeckmanCoulterDUusA)测定和nm处的值。所有样本oD。。/OD。。值均在.~.之间。...RTPCR反应将提取的g总RNA在℃反转录min反应体系为L。包括xPrimeScriptBuffer(TaKaRaBitechnologyJapan)LPrimeScriptRTEnzymeMixI(TaKaRaBiotechnologyJapan).t~mol/Lrandomhexamerprimer(TaKaRaBiotechnologYJapan)和t~mol/LOligodTPrimer(TaKaRaBiotechnologyJapan)。反应以℃S结束。RT反应在MasterCyclerGradient(EppendorfGermany)上操作执行。定量PCR分析仪为PTC·ChromoRea.TimeDetector(美国伯乐公司)。每个样品均做个重复以』.actin作为内参基因。反应体系为L包括.LSYBRPremixExTaq(TaKaRa期罗亚波等:日粮中添加及停用恩拉霉素对断奶仔猪生长性能和消化吸收功能的影响BiotechnologyJapan).~.t~mol/L引物模板ng用ddHo补足至ffL。采用两步法PCR扩增标准程序:℃预变性S℃S~℃~S。...引物设计与合成采用Primer软件设计引物由上海生工生物技术有限公司合成引物序列及参数见表。表基因引物序列TableGenecDNAsequence.数据处理结果以平均值±标准差表示数据处理与分析采用SASv的GLM程序进行以Duncan氏多重比较进行显著性检验以P<O.作为差异显著性判断标准。结果与分析.生长性能日粮中添加恩拉霉素对断奶仔猪生长性能的影响见表。在试验前周处理的仔猪日增重显著低于处理和处理(P<O.)平均日采食量也有降低的趋势处理和处理的仔猪日增重较对照组有提高的趋势(P>O.)同时恩拉霉素还有提高处理和处理的仔猪平均日采食量、改善饲料利用效率的趋势(P>.)。在试验第周恩拉霉素停用周与对照组相比各处理仔猪日增重和平均日采食量无显著差异(P>.)处理的仔猪料重比显著高于对照组(P<.)处理和处理的仔猪料重比也有升高的趋势。表恩拉霉素对断奶仔猪生长性能的影响TableEffectsofenramycinongrowthperformanceinweanlingpiglets同行数据肩标相同字母或无字母表示差异不显著(P>O.)不同小写字母表示差异显著(P<O.)。下表同。Inthesamerow。valueswithsameletterornolettersuperscriptsmeannosignificantdifference(P>.)andwithdifferentsmalllettersuperscriptsmeansignificantdifference(P<O.).Thesameasbelow..空肠食糜消化酶活力恩拉霉素连续饲喂周、停用周后空肠食糜消化酶活力的变化见表。与对照组相比各处理仔猪脂肪酶和胰蛋白酶的活性显著降低(P<.)且处理和处理的仔猪淀粉酶的活性显著降低(P<O.)处理的仔猪淀粉酶的活性也有降低的趋势(P>O.)。动物营养学报卷脂肪酶Lipase淀粉酶Amylase胰蛋白酶Trypsin.±.O.±.±.±.O.±.。±.±..±.±.±..±.±.肠壁组织结构恩拉霉素连续饲喂周、停用周后对断奶仔猪肠道组织形态的影响见表。与对照组相比处理的仔猪十二指肠绒毛高度显著降低(P<.)处理和处理的绒毛高度也有降低的趋势(P>.)处理和处理的仔猪绒毛高度/隐窝深度比值均显著低于对照组(Pd.)。与对照组相比各处理空肠绒毛高度、隐窝深度及绒毛高度/隐窝深度均无显著变化(P>.)但处理和处理的仔猪绒毛高度/隐窝深度比值有降低的趋势而处理的仔猪绒毛高度/隐窝深度较对照组高并显著高于处理和处理(P<O.)。表恩拉霉素对断奶仔猪肠道黏膜形态的影响TableEffectsofenramycinontheintestinalmucosalmorphologyinweanlingpiglets(m).养分转运载体由图和图可知恩拉霉素显著增加了处理的仔猪SGLTmRNA的表达量(P<O.)显著增加了处理的仔猪PepTmRNA的表达量(Pd.)。与对照组相比其余各处理SGLTmRNA和PepTmRNA的表达量也有增加的趋势(P>.)。藿遗二耨捌百∽!攀.至器塞主.OlO.恩拉霉素添加量Thelevelofenramycin(mg/kg)图对断奶仔猪空肠二肽转运载体(PepT)表达量的影响Fig.EffectsofenramycinonrelativeexpressionofPepTmRNAfromthejejunumofweanlingpiglets讨论.日粮中添加恩拉霉素对断奶仔猪生长性能的影响本试验发现恩拉霉素添加量为~mg/kgOllO《ZElQc口∞邶辱毒餐期罗亚波等:日粮中添加及停用恩拉霉素对断奶仔猪生长性能和消化吸收功能的影响时对仔猪具有一定的促生长作用表现为日增重增加料重比下降与前人的研究一致l。高剂量组(mg/kg)仔猪日增重显著降低生产性能低于其余各组。但高剂量恩拉霉素降低生产性能的原因还有待进一步研究。.停用恩拉霉素对断奶仔猪生长性能及消化生理的影响停用恩拉霉素后仔猪表现出日增重降低料重比增加的趋势。停药后造成断奶仔猪生长性能下降的原因可能与本试验降低了断奶仔猪的消化生理功能有关。消化酶是消化过程中具有独特功能的物质动物的消化力与消化道中消化酶的活性密切相关。一些学者认为抗生素能抑制肠道有害菌的生长促进有益菌的优势。而有益菌能分泌一部分消化酶帮助宿主消化其不能消化的物质g。本试验发现停用恩拉霉素后与对照组相比应激使饲喂过抗生素的仔猪空肠消化酶活性显著降低。停用抗生素可能打破肠道微生态平衡使肠道有益菌减少病原菌大量繁殖造成消化功能紊乱从而降低消化酶的合成及分泌口引。抗生素能抑制肠道内微生物产生的毒素和有害的代谢产物减弱对肠壁细胞的刺激从而使肠壁变薄、肠黏膜结构得到改善。本试验结果证明停用恩拉霉素使和Omg/kg恩拉霉素组仔猪肠绒毛高度变短隐窝加深绒毛高度/隐窝深度比值降低。说明停用恩拉霉素使仔猪肠道病原微生物迅速繁殖产生大量的毒素和有害病原产物。mg/kg恩拉霉素组仔猪绒毛高度/隐窝深度比值增加的原因可能是由于停药时问太短造成的。从生长性能来看添加mg/kg恩拉霉素也具有明显的促生长作用。钠/葡萄糖共转运载体SGLT在机体葡萄糖的吸收转运过程中起主导作用口。蛋白质在体内主要是以二肽(dipeptide)形式被吸收而二肽经肠上皮细胞二肽转运载体PepT转运是机体蛋白质吸收的主要途径。本试验发现机体在受到应激的情况下恩拉霉素处理仔猪sGLTmRNA和PepTmRNA表达量均显著高于对照组(P<.)。Tanaka等】报道小肠小肽转运蛋白活性不会受肠组织损伤和口服氟尿嘧啶(一种抗癌药物)的影响而其他刷状缘酶和养分转运蛋白损伤十分严重。Erickson等认为对PepT的调控主要在转录水平上小肽转运蛋白活性的维持可能与PepT基因表达上调有关这可能是一种反馈性的适应机制。因此可以推测试验组仔猪SGLTmRNA和PepTmRNA表达量高于对照组的原因可能是由于饲喂抗生素仔猪钠/葡萄糖共转运蛋白及小肽转运蛋白的损伤高于对照组而引起的。大量的研究表明抗生素具有抑制机体免疫的功能。Gordon试验发现饲喂抗生素的常规鸡其小肠黏膜内淋巴滤泡和游离浆细胞数目显著降低接近无菌鸡。常文环等口阳报道黄霉素、金霉素和杆菌肽锌均能使肉鸡小肠上皮细胞间浸润的淋巴细胞数减少。由于抗生素能抑制肠道黏膜免疫因此停用恩拉霉素后机体更易受到应激源的攻击使二肽转运载体蛋白和钠葡萄糖共转运载体蛋白受损更加严重。结论停用恩拉霉素后断奶仔猪在受到应激的情况下降低了空肠消化酶的活性降低了绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度比值并显著提高了空肠SGLTmRNA和PepTmRNA的表达量(P<.)。本试验条件下停用恩拉霉素会降低断奶仔猪的消化吸收功能。参考文献:DibnerJJRichardsJD.Antibioticgrowthpromotersinagriculture:historyandmodeofactioniJ}.PoultryScience:.卜仕金.多肽类抗生素饲料添加剂安来霉素J.中国兽医杂志():O.CervantesHMBafundoKWPestiGMeta.LiveandprocessingperformanceresponsesofbroilersfedlowandextralownutrientdensitywithdrawaldietssupplementedwithvirginiamycinJ.JournalofAppliedPoultryResearch:.CatronDVJensenAHHomeyerPGeta.Reeva.uationofproteinrequirementsofgrowingfatteningswineasinfluencedbyfeedinganantibioticJ.JournalofAnimalScience:.VisekWJ.ThemodeofgrowthpromotionbyantibioticsJ.JournalofAnimalScience:.EngbergRMHedemannMSLeserMSeta.EffectofzincbacitracinandsalinomycinonintestinalmicrofloraandperformanceofbroilersJ.PoultryScience:.胥传来周文卿.安来霉素在肉鸡日粮中的应用研究rJ.粮食与饲料工业:..杨幼慧AlanMM.卢一甘露聚糖酶的产酶菌种、条件及部分性质研究J.华南农业大学学报():.O常维山张春阳牛钟相.产蛋白酶枯草芽孢杆菌益生菌种的筛选与应用J.中国畜牧杂志().动物营养学报卷马晓军张晓君杨玲.支链淀粉酶产生菌的筛选及发酵条件的研究J.兰州大学学报():..佟建明.饲用抗生素的促生长作用机制及其替代技术研究J.饲料工业:.王修启陈杰.钠葡萄糖共转运载体(SGLT)研究进展rJ.中国畜牧兽医():..WalshMDMeGuckinMADevinePLeta.ExpressionofmucepithelialmueininbreastcarcinomaJ.JournalofClinicalPathology():.TanakaHMiyamotoKMoritaKeta.Regula·tionofthePepTpeptidetransporterintheratsmallintestineinresponsetofluorouracil.inducedinjuryJ.Gastrenteroogy:.EricksonRHGumJRLindstromMMeta.RegionalexpressionanddietaryregulationofratsmallintestinalpeptideandaminoacidtransportermRNAsJ.BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications():.GordonHA.Amorphologicalandbiochemicalapproachc.In:LobundInstitute.StudiesontheGrowthEffectofAntibioticsinGermfreeAnimals.SouthBendIndiana:UniversityofNotreDame.常文环李德发龚利敏.黄霉素对肉仔鸡促生长作用机理的研究R.农业部饲料工业中心年度科研报告:.EffectsofSupplementingandWithdrawingEnramycinonGrowthandDigestionAbsorptionFunctionofWeanlingPigletsLUOYabo·ZOUChengyi。。CHENHong。YUBingCHENDaiwen。(.KeyLaboratoryofAnimalDiseaseresistanceNutritionMinistryofEducationYa’anChina.AnimalNutritionInstituteSichuanAgriculturalUniversityYa’anChina.SichuanAcademyofAnimalSciencesChengdu。China)Abstract:Thisexperimentwasconductedtostudytheeffectsofsupplementingandwithdrawingenramycinongrowthperformanceactivityofdigestiveenzymeintestinalmorphologyandexpressionofsodium·glucosetransporter(SGLT)mRNAandpeptidetransporter(PepT)mRNAinweanlingpigletsTwentyPICweanlingpigletsat一olddaywithsimi·larweightandgenderwererandomlyallocatedtodietarytreatmentswithreplicatesineachtreatmentofpigletofperreplicate.Thepigletswerefedabasaldietsupplementedwithenramycinatandmg/kgforweeksrespectively.Attheweekenramycinwaswithdrawedandallpigletsintreatmentswerereceivedbasaldietforweek.InthemorningondayallpigletsweregivenintraperitoneainjectionofLPSatmg/kgbodyweightandafterdaysofinjectionpigletswereslaughteredtodetermineactivitiesofdigestiveenzymeintestinalmorphologyandexpressionofsodiumglucoseSGLTmRNAandPepTmRNA.ResultsshowedthatduringthefirstweeksADGintreatmentandtreatmenttendedtobeimprovedandADGintreatmentsignificantlylowerthanthatintreatmentandtreatment(P<O.).ButatweekADGandADFIinaltreatmentswerenosignificantdifference(P>.).Withsupplementedwithenramycinforweeksthenwithdrawedforweekindietofpigletstheactivitiesoflipaseamylaseandtrypsininjejunumweresignificantlydepressed(P<O.)andtheratioofthevillusheighttothecryptdepthofduodenumweresignificantlyincreased(P<.)andexpressionofSGLTmRNAandPepTmRNAwasalsosignificantlyincreased(P<.).Inconclusionsupplementationwithenramycinofmg/kgindietcouldimprovegrowthofpigletswithdrawingenramycincoulddecreaseactivitiesofdigestiveenzymeanddamagestructureofintestinalmucosaanddepressthefunctionofdigestionandresorptioninpiglets.ChineseJournalofAnimalNutrition():Keywords:WithdrawingenramycinDigestiveenzymeIntestinalmorphologyTransporter*CorrespondingauthorprofessorE·mail:chendwzsicau.edu.cn(编辑姚琨)

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