nullnull常用菌种管理和保存常用菌种管理常用菌种管理1.实验用菌的申购，应有科室负责人签字。申购单应注明菌种名称、菌号、数量及请购单位盖章。
2.菌种应有专人保管，管理人员应有较强的责任心。从指定单位购到的菌种，应先登记，一一核对菌种菌号、数量，无误后方可转种。
3.采用适宜的培养基将冻干菌粉稀释、转种、培养。经鉴定无误后可作为对照菌用。如有不符，不得使用。null4.实验菌种在使用过程中，应检查其生物学特性。如有变化或污染杂菌，均不得使用。发现染菌或变异、衰退现象时，应及时恢复或废弃。
5.实验菌种不得随意带出实验室。外单位索取菌种时，应有单位介绍信，经领导同意，包裹严密，妥善携带。菌种的保藏原理菌种的保藏原理 菌种的保藏原理是根据菌种的生理、生化特性，在人工创造的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细胞基本上处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但又不至于死亡，以降低菌种的变异率。低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代谢作用。因此低温、干燥、真空适用于菌种保藏的重要手段。菌种保藏菌种保藏 菌种的保藏是微生物检验工作中一项常规技术，科学的保藏和管理直接关系到检验结果的正确与否。
不同的微生物根据其特征选择最适宜的保存方法，菌种保存方法一般分四个阶段：
（1）挑选特征典型的纯菌菌落
（2）能产生孢子或芽孢的微生物应用其孢子或芽孢进行保存；
(3）选择最适宜的方法保存；
（4）定期对保存菌种进行检查。常用菌种保存方法常用菌种保存方法1.琼脂斜面低温保存法。
2.半固体高层穿刺培养。
3.甘油冷冻管保存法。
4.液体石蜡保存法。
5.冷冻真空保存法。
注意事项：保存菌种均应是新鲜纯菌培养物，至少是第三代的培养物。不同细菌用不同培养基，定期检查。菌种的检查与复壮菌种的检查与复壮1.定期检查：在一定时间内需重新复活、分离、纯化、鉴定再保存。
2.检查项目：菌落形态、革兰氏染色、菌体形态、生化 特性及血清学检查。
3.防止菌种的衰退：控制传代次数、创造适宜的培养条件、采用有效的保存方法。试验用菌种试验用菌种1.冷冻菌种的复活：将冷冻干燥的菌种定为0代。首先，用75%的酒精或碘伏棉球将安瓿擦拭一下，用砂轮在安瓿上部1/3处划痕，用干燥的无菌纱布包裹安瓿，将安瓿掰开，用无菌吸管吸取0.5~0.8ml适宜培养（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌用营养肉汤培养基；生孢梭菌用硫乙醇酸盐流体培养基；白色念珠菌、黑曲霉用改良马丁培养基）滴加到安瓿中，null轻轻旋转安瓿并吹打，使冻干菌粉完全溶解，再将菌悬液全部吸出，分别转种在相应的液体培养基中，细菌置350C培养18~24小时,真菌置250C培养3~5天，观察培养基是否混浊，如不混浊可适当延长培时间，细菌可延长7天，真菌可延长14天。仍未混浊，说明菌种复活失败，复活菌种用培养基应按有关
规定
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进行灭菌处理。
null2.菌种的确认：用无菌接种环取上述培养物1环，划线在相应的培养基平板上，置适宜温度培养后，挑取单一的纯菌落，进行革兰氏染色镜检，观察其染色特性及菌体形态，并作生化试验鉴定该菌种。
3.菌种的使用：对已通过确认鉴定的菌种，方可使用。用无菌接种环取上述纯菌落转种在相应的培养基琼脂斜面上，培养后，挑选几支菌苔较厚实的斜面进行菌种保藏，另外几只可放置在适宜的环境保存，作为日常检验用。null实验室菌种传代示意图
实验用菌液的制备实验用菌液的制备1.方法：常用的方法有两种，即液体培养物直接稀释法和细菌
标准
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浓度比浊法。
2.培养基：细菌用营养肉汤培养基；真菌用改良马丁培养基。
3.稀释剂：0.9%氯化钠溶液。
4.菌种的传代次数不得超过五代。null 接种黑曲霉的冻干菌粉，用75%的酒精或碘伏棉球将安瓿擦拭一下，用砂轮在安瓿上部1/3处划痕，用干燥的无菌纱布包裹安瓿，将安瓿掰开，用无菌吸管吸取0.5~0.8ml改良马丁培养基， 置23～28 ℃培养5～7天后，用无菌接种针挑取培养物，点种至改良马丁琼脂斜面培养基上，置23～28 ℃培养5～7天后，使其产生大量孢子，4 ℃冰箱保存备用。
null菌液制备:
取黑曲霉斜面培养物一支，加入3~5ml 0.9％无菌氯化钠溶液，振荡，洗下霉菌孢子，用无菌滴管（滴管口应包裹3~4层纱布）吸出菌液，取 1ml菌液加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-4～10-6，用平板计数法或细菌标准比浊管比浊，使菌数约为50~100cfu/ml。nullnull
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