苦参配方颗粒的高效液相色谱指纹图谱研究及定量分析

苦参配方颗粒的高效液相色谱指纹图谱研究及定量分析 王一奇l 马源源l 吴 雁2 张跃飞2 李发美＊l l 沈阳药科大学药学院 沈阳 ll00l6 2 深圳三九医药股份有限公司 深圳 5l8029 摘 要 研究了苦参配方颗粒的指纹图谱和含量测定 采用高效液相色谱法 在Cl8柱上以乙睛-磷酸氢二钠 水溶液 20 mmoI/L 磷酸调 pH7.l 进行梯度洗脱 柱温 35 C 检测波长 220 nm 用指标成分氧化苦参碱 氧 化槐果碱和苦参碱进行了定位 并在同一色谱条件下同时测定了它们的含量 确定了 l5 个共有峰 其中 7 8 和 ll号峰分别为氧化苦参碱 氧化槐果碱和苦参碱 l0批样品平均相似度为 0.99 以上 三个成分的含量分 别为 氧化苦参碱 50.0 ~79.8 mg/g 氧化槐果碱 l3.5 ~l8.l mg/g 苦参碱 l6.5 ~30.l mg/g 结果表明 指 纹图谱与指标成分含量测定相结合 可提高苦参配方颗粒的内在质量控制水平 关键词 苦参配方颗粒 高效液相气谱法 指纹图谱 苦参碱 氧化苦参碱 氧化槐果碱 2006-04-28 收稿 2006-08-08 接受 本文系 十五 国家科技攻关项目 No.200lBA70lA42-l 1 引 言 配方颗粒是一种新型的中药应用形式 其质量稳定 使用方便 可作为中药饮片的替代物 而配方颗 粒的质量控制则为中药现代化 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 化 产业化和国际化提供了保证 指纹图谱 l 2 和含量测定在中药 质量控制中发挥着重要作用 苦参配方颗粒是用水煎煮提取方法及制剂新工艺精制而成的单方颗粒 剂 主要有效成分为氧化苦参碱 氧化槐果碱 苦参碱等 目前 关于苦参中生物碱的研究已有一些报 道 3 ~6 但常测定苦参碱或氧化苦参碱 或只局限于指纹图谱研究 本实验首次将苦参制剂中 3 个指标 成分的含量测定与指纹图谱结合起来 为苦参配方颗粒的质量控制提供了依据 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 ll00 高效液相色谱仪 含四元梯度泵 自动进样器 DAD检测器 Chemsation 色谱工作站 美国 AgiIent公司 DL-l80 超声波清洗机 浙江省海天电子仪器厂 苦参配方颗粒 深圳三九医药股份有 限公司 氧化苦参碱对照品 氧化槐果碱对照品和苦参碱对照品 中国药品生物制品检验所 乙睛 HPLC级试剂 水为二次蒸馏水 其它试剂均为分析纯 2.2 实验方法 2.2.1 忧化后的色谱条件 DiamonsiICl8柱 4.6 mmX200 mm 5 -m 流动相 A为 20 mmoI/L Na2HPO4 H3PO4调 pH7.l 溶液 B为乙睛 梯度洗脱程序 0 ~5 min 0% B 5 ~l0 min 0% B~l2% B l0 ~33 min l2% B~30% B 33 ~40 min 30% B 流速 l.0 mL/min 柱温 35 C 检测波长 220 nm 进样 量 20 -L 2.2.2 对照品溶液的制备 准确称取氧化苦参碱 氧化槐果碱和苦参碱对照品 用水溶解定容 得到浓 度分别为 0.l020 0.0275 0.0606 g/L的对照品溶液 2.2.3 供试品溶液的制备 准确称取研细的苦参配方颗粒 0.lg 置具塞锥形瓶中 准确加入水 50 mL 密塞 超声处理 l5 min 过滤 取续滤液作为供试品溶液 3 结果与讨论 3.1 不同仪器以及色谱往的选择 比较了AgiIentll00 和Jasco高效液相色谱仪 DiamonsiICl8 200 mmX4.6 mm 5 -m KromasiICl8 第 34 卷 2006 年 l2 月 分析化学 FENXIHUAXUE 研究简报 ChineseJournaIofAnaIyticaIChemistry 第 l2 期 l79l ~l793 200 mmX4.6 mm 5 -m 和 O BAXE en Cl8 l50 mmX4.6 mm 3 种色谱柱 结果表明 本实验确 定的色谱条件 见 2.2.l 节 在不同仪器上的重现性较好 在 DiamonsiICl8柱上苦参配方颗粒中各个成 分能在较短洗脱时间内达到较好的分离 3.2 参照物色谱峰的鉴定和选择 用 2.2 项下色谱条件测定对照品氧化苦参碱 氧化槐果碱和苦参碱 并与样品指纹图谱中相应色谱 峰进行比较 发现样品指纹图谱中的 7 8 和 ll 号峰的保留时间及紫外光谱图分别与氧化苦参碱 氧化 槐果碱及苦参碱一致 苦参碱色谱峰保留时间和峰面积居中 与相邻色谱峰分离良好 有助于辨认和评 价色谱指纹图谱的特征 故选取苦参碱色谱峰为参照峰 见图 l 图 l 氧化苦参碱 氧化槐果碱和苦参碱对照品 a 和苦参配方颗粒 的HPLC图 Fig.l Chromatogramofo ymatrine o ysophocarpine matrine a ushen ispensinggranuIes sampIe a l.氧化苦参碱 o ymatrine 2.氧化槐果碱 o ysophocarpine 3.苦参碱 matrine 7.氧化苦参碱 o ymatrine 8.氧化槐果碱 o ysophocarpine ll.苦参碱 matrine 图 2 l0 批样品指纹图谱 Fig.2 Fingerprintchromatogramsofl0 atchesof sampIes 3.3 指纹图谱分析!数据处理及相似度 用 2.2 项下色谱条件测定了 l0 批苦参配方颗粒指纹 图谱 见图 2 找到 l5 个共有峰 其相对保留时间的 sD 均小于 0.7% 采用国家药典委员会的中药色谱指纹图 谱相似度评价系统软件 建立共有模式 计算样品与共有 模式之间的相似度 均不小于 0.99 结果见表 l 3.4 指纹图谱的精密度!重复性与稳定性试验 取同一份供试品溶液 连续进样 6 次 测定指纹图谱 精密度 各色谱峰相对保留时间及相对峰面积的 sD均 小于 3% 取同一批号的供试品 6 份 按供试品溶液的制 备方法制备供试品溶液 测定指纹图谱重复性 各色谱峰 相对保留时间及相对峰面积的 sD均小于 3% 取同一份供试品溶液 分别在 0 4 8 l2 24 h 测定指 纹图谱稳定性 各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的 sD均小于 3% 样品在 24 h内稳定 表 l l0批样品相似度 a Iel simiIarityofl0 atchesofsampIes 批次 Batch 050l 0502 0503 0504 0505 0506 060l 0602 0603 0604 相似度 simiIarity 0.994 0.999 0.998 l.000 l.000 l.000 l.000 l.000 0.998 0.999 3.5 苦参配方颗粒中氧化苦参碱!氧化槐果碱和苦参碱的含量测定 氧化苦参碱 氧化槐果碱 苦参碱回归方程和相关系数分别为 A l.74 Xl04C 22.0 r 0.9999 A 2.40 Xl04C 2.6l r 0.9999 A l.52 Xl04C 4.97 r 0.9999 线性范围分别为 5l ~255 -g l4 ~69 -g和 30 ~l52 -g 平均回收率分别为 l03.2% sD l.5% n 9 96.4% sD l 7% n 9 和 99.0% sD 2.l% n 9 l0 批样品测得结果见表 2 297l 分 析 化 学 第 34 卷 表 2 l0批苦参配方颗粒中氧化苦参碱~氧化槐果碱和苦参碱的含量 a Ie2 Contentofo ymatrine,o ysophocarpinean matrinein l0 atchesof ushen espensinggranuIes 批号 Batch 氧化苦参碱 O ymatrine(mg/g> 氧化槐果碱 O ysophocarpine(mg/g> 苦参碱 Matrine(mg/g> 总碱 AI aIoi s(mg/g> 050l 50.0 l3.5 30.l 93.6 0502 79.8 l8.l l8.4 ll6.2 0503 77.3 l7.7 l6.5 lll.5 0504 67.7 l6.7 24.8 l09.l 0505 66.8 l5.7 23.5 l05.9 0506 65.7 l5.4 22.6 l03.7 060l 7l.l l7.2 22.6 ll0.9 0602 7l.l l6.9 22.0 ll0.0 0603 68.8 l6.7 23.3 l08.8 0604 7l.8 l7.3 23.l ll2.l 综上所述,所建立的苦参配方颗粒HPLC指纹图谱具有比较好的稳定性和重复性0 l0 批样品的指 纹图谱的相似度都在 0.99 以上0 使用同一色谱条件既进行苦参配方颗粒的指纹图谱分析,又同时测定 氧化苦参碱~氧化槐果碱和苦参碱的含量,这样的指纹图谱有定性鉴别和定量测定的双重作用,可提高 苦参配方颗粒的内在质量控制水平0 References l ChaiYifeng(柴逸峰>,LuoGuoan (罗国安>,OiaoshanIei(乔善磊>, hu henyu (朱臻宇>,Lu Feng(陆 峰>,Wang Jianjun(王建军>.Chinesej.Anal.Chem.!分析化学"# 2005# 33!ll"$ l599 ~l602 2 shaoOing(邵 青>,ChengYiyu 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Iength of220 nm.Fifteen common pea sin thefingerprintsWerepositione With in e componentofmatrine. hecontentsofo ymatrine,o ysophocarpinean matrineWere etermine simuItaneousIy.AVeragesimiIarity ofl0 sampIesWasoVer0.99. hecontentsofo ymatrine, o ysophocarpinean matrineWere50.0 79.8 mg/g,l3.5 l8.l mg/gan l6.5 30.l mg/g,respectiVeIy.Com ining etermination ofin e compo- nentsWith fingerprintanaIysis,theguaIityof ushen espensinggranuIescan eassesse . keywords Kushen espensinggranuIes, high performanceIigui chromatography, fingerprint, matrine, o ymatrine, o ysophocarpine ( eceiVe 28 ApriI2006 accepte 8 August2006> 397l第 l2 期 王一奇等 苦参配方颗粒的HPLC指纹图谱研究及定量分析 苦参配方颗粒的高效液相色谱指纹图谱研究及定量分析 作者： 王一奇， 马源源， 吴雁， 张跃飞， 李发美， Wang Yiqi， Ma Yuanyuan， Wu Yan ， Zhang Yuefei， Li Famei 作者单位： 王一奇,马源源,李发美,Wang Yiqi,Ma Yuanyuan,Li Famei(沈阳药科大学药学院,沈阳 ,110016)， 吴雁,张跃飞,Wu Yan,Zhang Yuefei(深圳三九医药股份有限公司,深圳 ,518029) 刊名： 分析化学 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY 年，卷(期)： 2006,34(12) 被引用次数： 4次 参考文献(6条) 1.柴逸峰;罗国安;乔善磊;朱臻宇,陆峰,王建军 中药色谱指纹图谱相似度计算中保留时间校正方法的研究[期 刊 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 ]-分析化学 2005(11) 2.邵青;程翼宇 复方丹参提取物高效液相色谱-紫外-蒸发光散射检测指纹图谱的建立[期刊论文]-分析化学 2006(06) 3.Li K;Wang H J 查看详情 2004 4.Jong T T;Lee M R;Chiang Y C;Chiang S T Using LC/MS/MS to determine matrine, oxymatrine, ferulic acid, mangiferin, and glycyrrhizin in the Chinese medicinal preparations Shiau-feng-saan and Dang-guei-nian-tong-tang.[外文期刊] 2006(2) 5.马仁玲;周红华;于喜水;盛龙生 苦参注射液生物碱类成分指纹图谱的研究[期刊论文]-中国中药杂志 2003(09) 6.张磊;陈晓辉;王玺;毕开顺 离子对RP-HPLC同时测定复方苦参注射液中氧化苦参碱和苦参碱含量[期刊论文]- 中成药 2004(11) 本文读者也读过(2条) 1. 曾志.杨东晖.宋力飞.杨挺.刘乡乡.袁敏.曾和平 高效液相色谱指纹图谱应用于板蓝根的鉴定[期刊论文]- 分析化学2002,30(7) 2. 赵焕霞 苦参片中苦参碱和氧化苦参碱的含量测定[期刊论文]-中国实验方剂学杂志2008,14(2) 引证文献(4条) 1.孙叔宝.孙哲.徐妍.樊宝明.吴学民 1%苦参碱可溶液剂高效液相色谱分析[期刊论文]-农药 2009(2) 2.孙国祥.张静娴 系统指纹定量法鉴别龙胆泻肝丸质量[期刊论文]-分析化学 2009(8) 3.吴志娇.赵红.薛英.胡新明.毛一卿.谭焕然 HPLC法同时测定氧化槐果碱、槐定碱和苦参碱[期刊论文]-中国 科学院研究生院学报 2011(3) 4.柴逸峰.朱臻宇.李翔 药物分析 (Ⅰ)[期刊论文]-分析试验室 2008(8) 本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_fxhx200612030.aspx