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Folin_lowry法测定康克胶囊可溶性蛋白质含量.pdf

Folin_lowry法测定康克胶囊可溶性蛋白质含量

tianbo614
2013-04-12 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《Folin_lowry法测定康克胶囊可溶性蛋白质含量pdf》,可适用于高等教育领域

第卷 第期年月浙 江 中 医 学 院 学 报JOURNALOFZHEJIANGCOLLEGEOFTCM中药研究Folinlowry法测定康克胶囊可溶性蛋白质含量吴瑾瑾 石森林△(浙江省义乌市中医院 义乌  △浙江中医学院)  摘要 目的:建立测定康克胶囊中可溶性蛋白含量的方法。方法:采用Folinlowry法。结果:蛋白质在ugml~ugml范围内呈良好的线性关系,r≥,方法灵敏、准确、重复性好,平均回收率。结论:Folinlowry法可作为测定康克胶囊可溶性蛋白质含量的方法。  关键词 Folinlowry法 康克胶囊 含量测定  康克胶囊系主要以鳖甲、全蝎等为原料,采用超低温冷冻粉碎等最新技术精制而成,具有活血祛瘀、软坚散结之功效,主治各种肿瘤。其中(可溶性)蛋白质为其主要药效活性成分。本实验建立了Folinlowry法测定其可溶性蛋白质含量的方法,并对康克胶囊中的可溶性蛋白质含量进行了测定。 仪器与试药 仪器 紫外可见分光光度计(上海第三分析仪器厂),TL恒温水浴器(浙江省海宁医药器械厂),XWA漩涡混匀器(上海医科大学仪器厂)。 试药 牛血清白蛋白(Merok公司)、康克胶囊(自制)、氢氧化钠、碳酸氢钠、无水硫酸铜、酒石酸钾钠、二水钨酸钠、二水钼酸钠、磷酸、盐酸、硫酸锂皆为分析纯,Folin酚试剂甲、乙采用文献方法配制。 方法与结果 标准曲线制备 精密称取牛血清白蛋白mg,溶于蒸馏水并定容至ml,取支试管,分别加入,,,,,,,ul的标准蛋白质溶液(ugml),用蒸馏水补足至ml,加入ml试剂甲,混匀,于℃放置min。再加入ml试剂乙,立即混匀,在℃保温min,然后于nm处测定吸收度。以吸收度为纵坐标,蛋白质浓度为横坐标,绘制标准曲线,求得回归方程为:A=C,r=,在ugml~ugml范围内,蛋白质浓度与吸光度呈良好的线性关系。 重现性 取供试品(批号为),按法测定次,结果其蛋白质含量分别为、、、、、,RSD为。 稳定性 取已知含量的供试品(批号为)溶液,分别在h、h、h、h、h后测定,结果供试品溶液吸收度在h内稳定。 加样回收率 精密称取一定量的牛血清白蛋白,加入一定量已知蛋白含量的胶囊内容物中,按样品测定方法测定,共测批,结果平均回收率为,RSD为。 样品含量测定 三个批号(,,)的胶囊各粒,精密称量内容物重量后,将其转入ml三角烧瓶,加入ml蒸馏水,超声提取min,转分离心min,取不清滤过,收集滤液�沉渣转入ml三角烧瓶,加入ml蒸馏水,超声提取min,转分离心min,取上清过滤,收集滤液�。合并滤液�与�,以蒸馏水定容至ml。取样品ul于试管,以蒸馏水补足至ml,下同标准曲线制备法测定,根据回归方程计算即得。结果:批号为供试品可溶性蛋白含量平均值为(mgmg)(n=),平均值为,平均值为。 讨论我们曾用卡氏定氮法测定康克胶囊的蛋白质含量,作为经典定氮方法,卡氏定氮法虽然有准确性高等优点但是康克胶囊其主要药效物质是可溶性蛋白,卡氏定氮法对不溶性蛋白含量也有贡献,不能如实反应药效成分的含量,而且方法繁絮。Folinlowry法灵敏、准确、重复性好、回收率,线性范围、相关系数等都较理想,对不溶性蛋白质含量没有贡献,可以作为康克胶囊可溶性蛋白质的含量测定方法。参考文献 张龙翔生化实验方法和技术北京:人民卫生出版社,第版,~(收稿日期 )

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