葎草不同部位总黄酮含量的测定_石秀梅

收稿日期:2011 － 06 － 17 基金项目:牡丹江医学院科研项目(2010 － 31) 作者简介:石秀梅(1964 － ) ，女，黑龙江牡丹江人，教授，硕士，研 究方向:中草药中生物活性成分的化学研究。 时间较长，对冠脉结扎致大鼠急性心肌缺血损伤具有一定 的保护作用。 近年来心肌缺血损伤机制的研究发现大量氧自由基生 成及脂质过氧化反应是心肌缺血损伤的主要机制之一［10］。 氧自由基不但通过生物膜中 PUFA 的过氧化引起细胞损 伤，而且还能通过脂质过氧化物的分解产物引起细胞损伤。 MDA是脂质过氧化的中间代谢产物。因而测试 MDA的量 常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞 受损的程度。具有减少 MDA 生成的药物都有助于减轻心 肌超微结构的损伤，从而减轻心肌缺血。与模型组相比，阳 性药地尔硫卓对照组和豨莶草提取液组血清中 MDA 含量 降低，说明豨莶草提取液对冠脉结扎致大鼠急性心肌缺血 的损伤有一定保护作用。 4． 2 结论 本实验研究结果显示，豨莶草提取液可使结扎冠状动 脉左前降支造成急性心肌缺血的大鼠心电图 ST 段抬高幅 度呈现下降的趋势，并使其心肌梗死面积呈现减小的趋势， 且可使血清中 MDA含量降低。提示豨莶草提取液对大鼠 急性心肌缺血有一定保护作用，但尚需要进行更为深入的 实验研究。 参考文献 ［1］ 肖文良，张红，王士昌．目前对缺血性心肌病的认识［J］．河北 医学院学报，1995，16(6) :378 － 380． ［2］ 高学敏．中药学［M］． 2 版． 北京:中国中医药出版社，2004: 219 － 220． ［3］ 周文武，林玲，陈军，等．冠脉结扎法制做大鼠心肌缺血模型 ［J］．中国实验动物学报，2004，12(4) :226 － 230． ［4］ 李贻奎，宁可永，梁嵘，等．大鼠冠状动脉结扎心肌缺血模型 方法的改进［J］．中国新药杂志，2005，14(4) :427 － 428． ［5］ 周文武，林玲，陈军，等．冠脉结扎法制做大鼠心肌缺血模型 ［J］．中国实验动物学报，2004，12(4) :226 － 230． ［6］ 唐铁军．抗心肌缺血中药实验研究进展［J］．中国中西医结合 杂志，2001，21(3) :118． ［7］ 陆英，陈运贤，钟雪云，等．电凝烧灼状动脉制作大鼠心肌梗 死动物模型［J］．中山大学学报(医学科学版) ，2004，25(1) : 52 － 4． ［8］ 徐苒．中药在心肌缺血再灌注损伤防治方面的应用［J］．实用 医技杂志，2005，12(8) :2206 － 2207． ［9］ 朴晋华，董培智，高天红，等．益心酮片对大鼠心肌缺血的保 护作用［J］．中国中药杂志，2003，28(5) :442 － 446． ［10］ 钟玲，叶款荣． 刺五加对大鼠实验性缺血心肌的保护作用 ［J］．中国病理生理杂志，1995，2(4) :366 － 369． 第 30 卷 第 11 期 2 0 1 2年 1 1 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 30 No． 11 Nov． 2 0 1 2 中 华 中 医 药 2545 学 刊 葎草不同部位总黄酮含量的测定 石秀梅，刘璇，刘佳维 (牡丹江医学院，黑龙江 牡丹江 157011) 摘 要:目的:葎草不同部位总黄酮含量的测定。方法:以芦丁为对照品，采用超声提取法提取总黄酮，用亚 硝酸钠 －氯化铝 －氢氧化钠显色法。通过紫外可见分光光度计测定律草不同部位总黄酮的含量。结果:检测波 长为 510nm，芦丁在浓度 0． 024 ～ 0． 064mg /mL 范围内呈良好的线性关系，回归方程:y = 0． 0817x － 0． 0018(R2 = 0. 9995) ，1h 内基本稳定(RSD = 0． 364%) ，重复性较好(RSD = 0． 600%) ，加样回收率为 99． 46% (RSD = 1. 685%)。结论:葎草中花冠总黄酮含量最高，叶次之，总黄酮含量最低的是种子。 关键词:葎草;不同部位;总黄酮;紫外可见分光光度法;芦丁 中图分类号:R281． 1 文献标识码:A 文章编号:1673 － 7717(2012)11 － 2545 － 02 Determination of the Total Flavones Content of Different Parts of Humulus SHI Xiu-mei，LIU Xuan，LIU Jia-wei (Department of Pharmacy，Mudanjiang Medical University，Mudanjiang 157011，Heilongjiang，China) Abstract:Objective:The content of the total flavones of different parts of Humulus was determined． Methods:With the rutin as the reference substance，the total flavones was extracted by Ultrasonic extraction． It was a good condition that the concentrations of NaNO2，AlCl3 and NaOH were 5%，10% and 4% respectively． And the UV － Vis spectrophotometry was used in the determination of the concentration of the total flavones of different parts of Humulus． Result:The concen- tration of the flavones in Humulus was detected when the wavelength was 510nm． The rutin concentration within the scope of 0． 024 ～ 0． 064mg /mL had a good linear relation． The regression equations:y = 0． 0817x － 0． 0018(R2 = 0． 9995)． The stability was good within 1 hour(RSD = 0. 364%)． The degree of the precision was good(RSD = 0. 600%)． And the re- covery rate was 99． 46%(RSD = 1． 685%)． Conclusion:The concentration of the total flavones of the corona of Humulus 5452 第 30 卷 第 11 期 2 0 1 2年 1 1 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 30 No． 11 Nov． 2 0 1 2 中 华 中 医 药 2546 学 刊 is the highest，that of the leaf is the second and that of the seeds is the lowest． Key words:Humulus;different parts;total flavones;UV － Vis spectrophotometry;rutin 葎草［Humulus scandends (lour．)Merr．］是桑科葎草 属一年生缠绕草本植物，野生于田间路边，又名拉拉秧、拉 拉藤等［1］。由于葎草的药理作用主要涉及抗菌和抗结核 等作用，且其药理功能的发挥多与其自身的黄酮类物质有 关［2］，故本实验以葎草总黄酮为研究对象，从其不同部位 中提取总黄酮，以为今后更好地利用葎草资源提供参考。 1 实验仪器与材料 1． 1 仪器 752N －紫外可见分光光度计(上海精密科学 仪器有限公司) ;SK8200HP ULTRASONIC INSTRUMENT (上海科导超声仪器有限公司) ;AX200 万分之一电子天平 (SHMADZU CORPORATION JAPAN)。 1． 2 材料 芦丁标准品(由中国生物制品检定所鉴定) ; 葎草(10 月采摘于牡丹江市北山) ;亚硝酸钠、三氯化铝、氢 氧化钠和乙醇等(所用试剂均为分析纯)。 2 实验方法 2． 1 芦丁对照品溶液的制备 精密称取经干燥至恒重的 芦丁标准品 20mg，置于 100mL容量瓶中，加 80%乙醇至刻 度，摇匀，即得对照品溶液［3］。 2． 2 葎草供试品溶液的制备 取葎草样品放入研钵中粉 碎过筛(40 目) ，精密称取约 1g并置于索氏提取器中，加石 油醚 100mL，回流加热，至提取液无色，弃去石油醚提取液。 待药渣挥散干后，干燥至恒重，转移到平底烧瓶中，加 80% 乙醇 50mL密塞称重，超声提取 0． 5h，加活性炭脱色，过滤， 取滤液。连续提取 5 次，合并各分滤液。 2． 3 测定波长的选择 取芦丁对照品溶液 5mL 置于 25mL容量瓶中并加入 5%亚硝酸钠溶液 1mL 摇匀，放置 6min，加 10%氯化铝溶液 1mL摇匀，放置 6min，再加 4%氢 氧化钠溶液 8mL摇匀，然后用 80%乙醇定容至刻度线，摇 匀，放置 10min。同时配制未加对照品只加入显色剂的溶 液作为空白对照溶液。在 440 ～ 560nm 波长范围内扫描吸 收曲线。结果表明在 510nm处有最大吸光度。 2． 4 标准曲线的绘制 精密量取芦丁对照品溶液 0． 0、 3. 0、4． 0、5． 0、6． 0、7． 0、8． 0mL 分别置于 25mL 容量瓶，按 2. 3 操作［4］。在 510nm波长处测定吸光度值，以吸光度 A 为纵坐标，浓度 C 为横坐标绘制标准工作曲线，得回归方 程:y = 0． 0817x － 0． 0018，相关系数:R2 = 0． 9995。线性范 围 0. 024 ～ 0． 064mg /mL。 2． 5 稳定性试验 按 2． 3 操作配制 6 份芦丁对照品溶 液，显色后，放置 10、20、30、40、50、60min，在 510nm波长处 分别测定吸光度值［4］。测得吸光度 A 平均值为 0． 405，相 对标准偏差 RSD = 0． 364%。 2． 6 重复性试验 按 2． 3 操作先后配制 5 份芦丁对照品 溶液。在 510nm 波长处测定吸光度值［4］。测得吸光度 A 的平均值为 0． 408，相对标准偏差 RSD = 0． 600%。 2． 7 加样回收率试验 精密称取约 20mg 研细过筛的葎 草样品 5 份，按 2． 2 方法配制，分别置于 25mL容量瓶中，分 别加入 0． 5、1． 0、1． 5、2． 0、2． 5mL 的对照品溶液，按 2． 3 操 作。在 510nm波长处测定吸光度值［4］。测得总黄酮的加 样回收率为 99． 46%，相对标准偏差 RSD = 1． 685%。 2． 8 葎草不同部位黄酮含量的测定 取葎草不同部位各 3 份，按 2． 2 配制，按 2． 3 操作，在 510nm 波长处测定吸光 度值，见表 1。 表 1 葎草不同部位总黄酮含量 部位 重量 (g) 吸光度 黄酮质量 (mg) 黄酮 (%) 黄酮平均 (%) 1． 0034 0． 285 21． 9669 2． 1892 叶 1． 0172 0． 274 21． 1244 2． 0767 2． 1427 1． 0195 0． 286 22． 0435 2． 1623 1． 0105 0． 283 21． 8137 2． 1587 花冠 1． 0412 0． 321 24． 7242 2． 3746 2． 2494 1． 0295 0． 293 22． 5796 2． 2148 1． 0244 0． 372 14． 3152 1． 3974 茎 1． 0072 0． 282 10． 8686 1． 0790 1． 2931 1． 0422 0． 380 14． 6216 1． 4030 1． 0218 0． 318 12． 2472 1． 1986 种子 1． 0279 0． 309 11． 9026 1． 1580 1． 1555 1． 0102 0． 291 11． 2132 1． 1100 通过上表可知，葎草花冠、叶、茎、种子中总黄酮含量平 均值依次为:2． 2494%、2． 1427%、1． 2931%、1． 1555%。 2． 9 提净实验 分别取 2． 8 中 9 份提取黄酮后的葎草残 渣，再按 2． 2 提取 1 次，按 2． 3 操作。测吸光度值平均值为 0． 00001，表明用 50mL 80%乙醇超声提取 5 次葎草中的总 黄酮已基本提净。 3 结 果 实验结果表明用亚硝酸钠 －氯化铝 －氢氧化钠显色法 测定葎草中总黄酮含量最大吸收波长为 510nm。芦丁在 0． 024 ～ 0． 064mg /mL 范围内线性关系良好，线性回归方 程:y = 0． 0817x － 0． 0018，相关系数:R2 = 0． 9995。 此方法表明芦丁溶液在 1h 内基本稳定(RSD = 0. 364%) ，重复性较好(RSD = 0． 600%) ，提净完全，样品平 均加样回收率为 99． 46%(RSD = 1． 685%) ，表明该方法有 较高的准确度。 葎草中花冠总黄酮含量最高，叶次之，总黄酮含量最低 的是种子。 4 结 论 本实验采用亚硝酸钠 －氯化铝 －氢氧化钠显色法，以 芦丁为对照品，通过紫外可见分光光度计测定葎草中不同 部位总黄酮的含量，方法简便、快捷，结果准确、可靠。本 实验拟定的方法在一般分光光度计上即可进行，便于推广。 参考文献 ［1］ 朱有昌．东北药用植物［M］． 哈尔滨:黑龙江科学技术出版 社，1989:234． ［2］ 倪士峰，则惠，魏博，等． 葎草药学研究［J］． 吉林中医药， 2009，29(2) :162 － 163． ［3］ 蒋益花，陈敏明． 葎草总黄酮的提取工艺和含量测定研究 ［J］．浙江农业科学，2007(2) :150 － 153． 6452