血清GP73及其它5种血清学标志物对原发性肝癌的诊断价值探讨_徐炜烽

收稿日期:2012 － 07 － 09 基金项目:国家重点基础研究发展 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 (973 计划)资助项目 (2012CB518900) ;国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 (81101485) ;吴阶平医学基金会肝病实验诊断研究基金 (LDWMF － SY － 2011C004) ;宁波市医学科技计划项目 (2010A02) 作者简介:徐炜烽(1971 －) ，男，浙江宁波人，副主任技师，研究方 向:临床生化与免疫学检验。 通讯作者:高国生(1978 －) ，湖北黄冈人，主管技师，研究方向:病 毒性肝炎及相关疾病研究。E-mail:ggswwn@ qq． com。 之分:肝肾阴虚于下，而木火刑金，“治法宜六味汤，补阴敛 阳，使肺气充实。”，若元阳下衰，水冷金寒，“治法宜八味 汤，温补真元，……使阴寒冰消，此治阳亏咳嗽之法也。”治 法皆不离乎肾。汪氏强调元气本虚，治疗上注重顾护正气。 指出咳嗽有外感、内伤之分，又有阴阳虚实之别，当分别图 之。 新安医学，肇始于宋，鼎盛于明清，根植于传统徽州文 化的沃土中，有着丰富的文献资源和深远的理论源泉。新 安医家人数众多，名医辈出，学术著作卷帖浩繁，浩如湮海， 本文就咳嗽论治稍作探析，但对于新安医家论治精华，尚不 足于窥其一斑。新安医学作为祖国医学宝库的重要组成部 分，其蕴含的丰富内容尚需不断整理挖掘，希冀在各同道的 不断努力下，必将使新安医学放射出新的异彩。 参考文献 ［1］ 王键，郜峦，黄辉．新安医学的形成因素和学术价值［J］．中医 文献杂志，2009，3(1) :1 － 4． ［2］ 彭波，李泽庚． 新安医家对肺系疾病研究的学术思想抉微 ［J］．北京中医药，2011，30(5) :358 － 360． 第 30 卷 第 12 期 2 0 1 2年 1 2 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 30 No． 12 Dec． 2 0 1 2 中 华 中 医 药 2635 学 刊 血清 GP73 及其它 5 种血清学标志物对 原发性肝癌的诊断价值探讨 徐炜烽1，高国生2，祝成亮3，徐晓珍2，胡耀仁2，翁彭剑2 (1．宁波市李惠利医院，浙江 宁波 315041;2．宁波市第二医院，浙江 宁波 315010; 3．武汉大学人民医院，湖北 武汉 430060) 摘 要:目的:探讨血清高尔基体蛋白 73(Golgi protein 73，GP73)及 AFP、ALP、GGT、LAP、AFU等血清学标志 物单项和联合检测对原发性肝癌(PHC)的诊断价值。 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 :收集 32 例慢性肝炎、36 例肝硬化、57 例原发性肝癌 (PHC)患者及 30 名健康体检者的血清，对 GP73 及 AFP、ALP、GGT、LAP、AFU等血清学标志物进行检测，并对检 测结果进行统计学分析。结果:Spearman相关分析表明血清 GP73 与 AFP、ALP、GGT、LAP、AFU均有一定的相关 性(均 P ＜ 0． 05)。GP73、AFP、ALP、GGT、LAP、AFU 在疾病组(包括慢性肝炎组、肝硬化组、PHC 组)和正常对照 组中的总体差异均有统计学意义(均 P ＜ 0． 05) ，疾病组血清水平均高于正常对照组;疾病组中又以 PHC 患者最 高，GP73 的血清水平均显著高于其他组(均 P ＜ 0． 05)。通过 logistic回归对上述指标构建新的预测模型，新的预 测因子的 AUC虽然高于其它单项指标，但与 GP73 的差异不大(P ＞ 0． 05) ，且这两者的 AUC均显著高于其它 5 种 血清学标志物(P ＜ 0． 05)。结论:GP73 单项检测对 PHC有较好的诊断作用，GP73 联合 AFP、AFU、GGT、LAP、ALP 检测对提高诊断效能帮助不大，GP73 是潜在的有可能取代 AFP的诊断 PHC的重要血清标志物。 关键词:原发性肝癌;高尔基体蛋白 73;ROC曲线 中图分类号:R735． 7 文献标识码:A 文章编号:1673 － 7717(2012)12 － 2635 － 03 Diagnosis Evaluation of Primary Hepatocellular Carcinoma by Combined Determination of Golgi Protein 73 and Other Five Serum Markers XU Wei-feng1，GAO Guo-sheng2，ZHU Cheng-liang3，XU Xiao-zhen2，HU Yao-ren2，WENG Peng-jian2 (1． Ningbo Lihuili Hospital，Ningbo 315041，Zhejiang，China; 2． Ningbo No． 2 Hospital ，Ningbo 315010，Zhejiang，China; 3． Renmin Hospital of Wuhan University，Wuhan 430060，Hubei，China) Abstract:Objective:To explore the clinical diagnosis and combined diagnosis values of Golgi protein 73(GP73)and alpha － fetoprotein(AFP) ，Alkaline phosphatase(ALP) ，Gamma － glutamyl transpeptidase(GGT) ，Leucine Aminopeptid- ase(LAP) ，a － L － fucosidase(AFU)for primary hepatocellular carcinoma(PHC)． Methods:The serum GP73 and AFP， ALP，GGT，LAP and AFU were detected by enzyme － linked immunosorbent assay and microparticle chemiluminescent im- munoassay in patients(32 hepatitis，36 cirrhosis and 57 primary hepatocellular carcinoma)and 30 healthy controls． Then a 5362 第 30 卷 第 12 期 2 0 1 2年 1 2 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 30 No． 12 Dec． 2 0 1 2 中 华 中 医 药 2636 学 刊 statistical analysis was made on these results． Results:There were some correlations between the serum GP73 and AFP， ALP，GGT，LAP and AFU by spearman correlation analysis(all P ＜ 0． 05)． The difference of GP73，AFP，ALP，GGT，LAP and AFU had statistical significance between the patients and healthy controls(all P ＜ 0． 05)． The serum levels of the pa- tients were significantly higher than those of healthy controls(all P ＜ 0． 05) ，and the patients with PHC had the highest se- rum levels，especially the serum GP73 was much higher than that of other patients(all P ＜ 0． 05)． The area under the curve(AUC)of the new combining predictor established by the logistic model was bigger than the other serum markers，but the difference with GP73 had no statistical significance(P ＞ 0． 05)． Meanwhile ，the area under the curve(AUC)of the new combining predictor and GP73 was much bigger than that of the others(all P ＜ 0． 05)． Conclusions:The detection of serum GP73 is helpful in the diagnosis of PHC，but combined determination of CP73 and AFP，ALP，GGT，LAP and AFU can not improve the diagnosis efficiency． Serum GP73 can become a potential important PHC tumor marker，which may substitute for AFP ． Key words:primary hepatocellular carcinoma;Golgi protein 73;ROC curve 近年来，基因技术、蛋白质组学、肿瘤免疫等相关研究 飞速发展，研究者筛选出一些潜在的新的肿瘤标志物，其 中，高尔基体蛋白 73(GP73)是最值得期待的血清标志物 之一，已有多篇文献报道 GP73 很可能成为诊断肝癌的重 要标志物［1 － 3］，但 GP73 联合其它血清学标志物对原发性 肝癌(PHC)的诊断研究报道较少。本研究通过检测血清 GP73 及 AFP、ALP、GGT、LAP、AFU 等常用原发性肝癌 (PHC)血清学标志物在不同类型肝脏疾病中的表达情况， 试图探明血清 GP73 与 AFP、ALP、GGT、LAP、AFU等 5 种血 清学标志物的单项和联合检测对原发性肝癌的诊断价值。 现将结果报道如下。 1 对象与方法 1． 1 对象 所有血清标本来源于本院 2010 年 1 月 － 2010 年 10 月的住院患者，其中慢性肝炎患者 32 例，其中男 26 例，女 6 例，平均年龄(37． 44 ± 12． 42)岁;肝硬化患者 36 例，其中男 24 例，女 12 例，平均年龄(57． 42 ± 10． 78)岁; 原发性肝癌患者 57 例，其中男 50 例，女 7 例;平均年龄 (54． 42 ± 10． 78)岁。所有患者的诊断 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 均符合 2000 年 第十次全国病毒性肝炎与肝病学术会议修订的《病毒性肝 炎防治 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 》［4］及第 4 届全国肝癌学术大会讨论通过的原 发性肝癌诊断标准［5］，且半年内未使用免疫调节剂和抗病 毒治疗。 1． 2 标本采集 受检者均采集清晨空腹静脉血 3mL，分离 后的血清于 － 20℃冰箱保存待测，所有标本无溶血现象。 1． 3 检测方法 GP73 测定采用酶联免疫吸附试验(定 量)检测，试剂盒由北京热景生物技术有限公司提供;AFP 检测采用美国雅培 AXSYM 免疫化学发光仪;AFP、ALP、 GGT、LAP、AFU检测采用 OLYMPUS 2700 全自动生化分析 仪。 1． 4 统计学处理 采用 SPSS 16． 0 软件。计量资料如为 正态性分布采用 珋x ± s表示，否则采用中位数(四分位数)表 示。正态分布且方差齐的多组均数比较采用方差分析和 LSD － t检验;非正态分布的数据进行转换(取平方根)后行 方差分析和 LSD － t 检验。双变量间相关性采用 Spearman 相关分析。ROC 曲线分析参照文献［6］。P ＜ 0． 05 为差异 有统计学意义。 2 结 果 2． 1 血清 GP73 与其它 5 种血清学标志物的相关性分析 对血清 GP73 及 AFP、AFU、GGT、LAP、ALP 进行 Spearman 相关分析，结果表明血清 GP73 与其它 5 种血清学标志物 均有一定的相关性(均 P ＜ 0． 05) ，特别是与 AFP的相关性 较高(r为 0． 606，P ＜ 0． 01)。见表 1。 表 1 血清 GP73 与 5 种血清学标志物的相关性分析 项目 AFP ALP GGT LAP AFU r值 0． 606 0． 203 0． 297 0． 292 0． 233 P值 0． 000 0． 024 0． 001 0． 002 0． 012 2． 2 血清 GP73 与其它 5 种血清学标志物在疾病组与正常 对照组中的检测结果比较 经过方差分析(GP73 和 AFP 取平方根进行数据转换) ，各组血清 GP73 与其它 5 种血清 学标志物的总体差异均有统计学意义(GP73:F = 44． 17， AFP:F = 5． 19，ALP:F = 11． 88，GGT:F = 6． 71，LAP:F = 7． 55，AFU:F = 5． 18，P 均 ＜ 0． 05) ，疾病组(包括慢性肝炎 组、肝硬化组、PHC 组)血清水平均高于正常对照组，疾病 组中又以 PHC患者最高，而且 GP73 的血清水平均显著高 于其他组(P ＜ 0． 05)。见表 2。 表 2 血清 GP73 与 5 种血清学标志物在疾病组与正常对照组中的检测结果比较 组别 例数 GP73(ng /mL) AFP(ng /mL) ALP(U/L) GGT(U/L) LAP(U/L) AFU(U/L) 慢性肝炎组 32 117． 00(69． 68 ～ 134． 80)▲● 9． 00(3． 75 ～ 60． 50)● 99． 45 ± 38． 89△● 113． 23 ± 62． 82▲ 60． 93 ± 29． 52▲ 33． 57 ± 15． 51▲ 肝硬化组 36 112． 00(87． 45 ～ 126． 85)▲● 13． 00(5． 75 ～ 54． 00)● 142． 97 ± 66． 95★▲ 100． 61 ± 171． 40●▲ 53． 43 ± 71． 41●▲ 34． 70 ± 15． 51▲ PHC组 57 195． 00(133． 80 ～ 345． 70)★△▲ 74． 00(9． 00 ～ 503． 00)★△▲ 161． 12 ± 93． 38★▲ 163． 86 ± 147． 64△▲ 86． 73 ± 65． 92△▲ 38． 40 ± 14． 53▲ 正常对照组 30 41． 00(33． 20 ～ 64． 10)★△● 6． 20(3． 30 ～ 7． 10)● 68． 09 ± 15． 24△● 21． 55 ± 10． 55★△● 21． 46 ± 5． 66★△● 21． 95 ± 6． 86★△● 注:与慢性肝炎组比较，★P ＜ 0． 05;与肝硬化组比较，△P ＜ 0． 05;与 PHC组比较，●P ＜ 0． 05;与正常对照组，▲P ＜ 0． 05。 2． 3 血清 GP73 和其它 5 种血清学标志物单项及联合检 测诊断 PHC 的 ROC 曲线分析 对 GP73 和其它 5 种血清 学标志物进行多因素 logistic 回归分析(引入标准:P ＜ 0． 05，剔除标准:P ＞ 0． 10)构建新的预测模型，并得到联合 预测因子(PRE)。利用 ROC 曲线分析 GP73、其它 5 种血 清学标志物及新的预测因子对 PHC的诊断效能，新的预测 6362 第 30 卷 第 12 期 2 0 1 2年 1 2 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 30 No． 12 Dec． 2 0 1 2 中 华 中 医 药 2637 学 刊 因子的 AUC 虽然高于其它单项指标，但与 GP73 的差异不 大(P ＞ 0． 05) ，且两者均显著高于其它 5 种血清学标志物 (P ＜ 0． 05)。见表 3 和 4，图 1。 表 3 GP73 和其它 5 种血清学标志物 logistic回归分析结果 指标 偏回归系数 Wald值 OR值(95%可信区间) P值 GP73 0． 020 21． 876 1． 020(1． 012 ～ 1． 029) 0． 000 AFP 0． 000 1． 095 1． 000(1． 000 ～ 1． 001) 0． 295 ALP 0． 006 2． 126 1． 006(0． 998 ～ 1． 014) 0． 145 GGT － 0． 014 2． 401 0． 986(0． 968 ～ 1． 004) 0． 121 LAP － 0． 028 4． 731 1． 037(0． 993 ～ 1． 083) 0． 048 AFU 0． 005 2． 448 0． 972(0． 939 ～ 1． 007) 0． 118 Constant － 3． 935 19． 927 0． 020 0． 000 表 4 GP73、其它 5 种血清学标志物及 新的预测因子诊断 PHC的 AUC 指标 AUC(95%可信区间) P值 GP73 0． 878(0． 817 ～ 0． 940) 0． 000 AFP 0． 755(0． 671 ～ 0． 839) 0． 000 ALP 0． 693(0． 597 ～ 0． 789) 0． 000 GGT 0． 755(0． 676 ～ 0． 834) 0． 000 LAP 0． 743(0． 662 ～ 0． 825) 0． 000 AFU 0． 595(0． 497 ～ 0． 694) 0． 061 预测因子(PRE) 0． 895(0． 836 ～ 0． 954) 0． 000 图 1 GP73、其它 5 种血清学标志物及新的 预测因子诊断 PHC的 ROC曲线 3 讨 论 临床上现有的 PHC标志物众多，包括 AFP、ALP、GGT、 LAP、AFU等，但都不甚理想，其中 AFP作为目前最有效、最 常用的原发性肝癌的诊断标志物，应用于临床数十年，但其 敏感性仅 40% ～ 65%不等，特异性仅 76% ～ 96%不等，无 法满足临床早期诊断的需要。GP73 是 Kladney 等［7］在研 究成人巨细胞性肝炎病原学时首次被发现的一种相对分子 质量为 7． 3 × 104Da的跨膜糖蛋白，该蛋白的编码基因位于 第 9 号染色体，全长 3042bp。2005 年，Schwegler 等［8］应用 糖蛋白组学手段发现了 GP73 与原发性肝癌之间的密切相 关性，原发性肝癌患者血清中 GP73 蛋白表达显著增强。 本研究结果表明，疾病组(包括慢性肝炎组、肝硬化 组、PHC组)血清 GP73 与其它 5 种血清学标志物水平均高 于正常对照组;疾病组中又以 PHC 患者水平最高，而且 GP73 的血清水平均显著高于其他组(P ＜ 0． 05)。这提示 GP73 与其它 5 种血清学标志物血清水平在 PHC时表达升 高，它们对 PHC的诊断均有一定的价值，而且上述指标的 联合检测有可能提高诊断效能。 为此，我们对 GP73 和其它 5 种血清学标志物进行多 因素 logistic回归分析以构建新的预测模型，并得到联合预 测因子(PRE)。结果表明新的预测因子的 AUC 虽然高于 其它单项指标，但与 GP73 的差异不大(P ＞ 0． 05) ，且这两 者的 AUC(均接近 0． 90)均显著高于其它 5 种血清学标志 物(P ＜ 0． 05)。这说明，血清 GP73 的单独检测对 PHC 的 诊断已经有较好的提示作用，多种血清标志物(AFP、AFU、 GGT、LAP、ALP)的联合检测对 PHC 诊断效能的提高帮助 不大。这与 Marrero等［9］报道的 GP73 和 AFP 联合检测可 以提高诊断效能的观点并不一致。究其原因，本文 57 例 PHC患者中 55 例为乙型肝炎病毒感染，而 Marrero 等的研 究对象为欧美较为流行的丙型肝炎病毒感染相关性 PHC。 而且 Spearman相关分析结果也表明血清 GP73 与其它 5 种 血清学标志物均有一定的相关性(均 P ＜ 0． 05) ，特别是与 AFP的相关性较高(r 为 0． 606，P ＜ 0． 01)。换言之，血清 GP73 高者相当一部分血清 AFP、AFU、GGT、LAP、ALP也会 高表达，它们之间的互补性并不理想。 所以，我们认为 GP73单项检测对 PHC有较好的诊断作 用，GP73联合 AFP、AFU、GGT、LAP、ALP检测对提高诊断效 能帮助不大，GP73是潜在的有可能取代 AFP的诊断 PHC的 重要血清标志物。由于本文所选择的病例有限，更确切的结 论还需要多中心、大样本的实验数据对其进行支持。 参考文献 ［1］ Giannelli G，Antonaci S． New frontiers in biomarkers for hepatocel- lular carcinoma［J］． Dig Liver Dis，2006，38(11):854 －859． ［2］ RIENER M 0，STENNERF，LIEWEN H，et al． Golgi phosphopro- tein 2 expression in liver tumors and its value as a serum marker in hepatocellular carcinoma［J］． Hepatology，2009，49(5) :1602 － 1609． ［3］ 石玉玲，曾兰兰，李林海，等．高尔基体蛋白 73 及其基因检测 对原发性肝癌诊断的价值［J］． 中华检验医学杂志，2010，33 (6) :507 － 512． ［4］ 中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会．病毒性 肝炎防治方案［S］．中华传染病杂志，2001，19(1) :56 － 62． ［5］ 中国抗癌协会肝癌专业委员会．原发性肝癌诊断标准［S］．中 华肝脏病杂志，2000，8(3) :135． ［6］ 赵发林，候艳，李康．临床试验 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 的 ROC 分析方法［J］． 中 国卫生统计，2007，24(4) :349 － 351． ［7］ Kladney RD，Bulla GA，Guo L，et al． GP73，a novel Golgi － local- ized protein upregulated by viral infection［J］． Gene，2000，249 (1 － 2) :53 － 65． ［8］ Schwegler EE，Cazares L，Steel LF，et al． 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