GBT14701-2002B2

ics 65-120 B 46 石日 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 cB/T 14701-2002 代替 (;B/T 14701-1993 饲料中维生素B:的测定 Determination of vitamin B2 in feeds 2002一10一31发布 2003一04一01实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监 督检验检疫 总局 发 布 GB/T 14701-2002 月U 胃 本 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 修订了GB/T 14701-1993《饲料中维生素B:的测定》，修订后的 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 具有适用范围广、检测 限低、高效、快捷、准确的特点 本标准参考了美国“化学分析协会”第六十七期发表的《复合预混料中抗坏血酸、烟酸胺、毗哆醇、硫 胺素及核黄素的液相色谱分析方法》和美国公职分析化学家协会(199。版)《食物和维生素制品中的核 黄素荧光测定法》而制定。 本标准与GB/T 14701-1993的主要技术差异:标准规定了两种方法，方法1为荧光分光光度法， 保留GB/T 14701-1993的全部内容，在范围中补充了复合预混合饲料，将重复性允许差“相对相差”改 为“相对偏差”;方法2为高效液相色谱法，确定了试样的提取条件、色谱条件及重复性 要求 对教师党员的评价套管和固井爆破片与爆破装置仓库管理基本要求三甲医院都需要复审吗 ，并确定了该 法适用于维生素B:含量大于10 mg/kg的复合预混合饲料及维生素预混合饲料。 本标准规定了荧光分光光度法为仲裁法。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位:国家饲料质量监督检验中心(北京) 本标准主要起草人:李兰、陈必芳。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为:GB/T 14701-1993. GB/T 14701-2002 饲料中维生素B2的测定 范 围 本标准规定了用荧光分光光度仪和高效液相色谱仪测定饲料中维生素B:含量的两种方法。 本标准规定的方法 1适用于饲料原料、配合饲料、浓缩饲料、复合预混合饲料、维生素预混合饲料中 的维生素B,的测定。待测液中维生素Bz检测浓度为。.05 pg/mL-0.2 pg/mLo 本标准规定的方法2适用于维生素B:含量大于10 mg/kg的复合预混合饲料、维生素预混合饲料 中维生素 B，的测定 。 2 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 性 引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是 否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析 实验室 17025实验室iso17025实验室认可实验室检查项目微生物实验室标识重点实验室计划 用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料采样方法 方法1:荧光分光光度法(仲裁法) 1 1 原理 维生素B(即核黄素C,HaoN,Oa)在440 nm紫外光激发下产生绿色荧光，在一定浓度范围内其荧 光强度与核黄素含量成正比。用连二亚硫酸钠还原核黄素成无荧光物质，由还原前后荧光强度之差与内 标荧光强度的比值计算样品核黄素的含量。 3.2 试剂和溶液 除非另有说明，所用试剂均为分析纯的试剂，水为蒸馏水，符合GB/T 6682中3级用水或相当纯度 的水 。 3.2.1 氢氧化钠溶液，c(NaOH)=0.05 mol/L. 3.2.2 氢氧化钠溶液，c (NaOH)一1.0 mol/Lo 3.2.3 盐酸溶液，c(HCI)=0. 1 mol/L, 3.2.4 盐酸溶液，c(HCl)=1.0 mol/Lo 3.2.5 连二亚硫酸钠(Na2Sz0,)(保险粉)，防止吸潮。 3.2.6 高锰酸钾溶液，40 g/Lo I2.了 冰 乙酸 。 3.2.8 冰乙酸溶液，c(CH,COOH)=0.02 mol/L:将1. 8 ml冰乙酸用水稀释至1 000 mLo 3.2.9 过氧化氢溶液,100 mL/I，现用现配。 3.2-10 维生素B:标准溶液: 3.2-10. 1 维生素B:储备液工:核黄素纯品(中国药典参照标准)于五氧化二磷干燥器中干燥24 h,溶 解于冰乙酸溶液((3-2-8)中，在蒸气浴上恒速搅动直至溶解，冷却后稀释至500 mL。盛人棕色瓶滴加甲 苯覆盖，冰箱4C保存，保存期6个月。该溶液含0. 1 mg/m工维生素Bie 3.2.10.2 维生素B:贮备液ll:取维生素B贮备液「(3-2. 10. 1)10 mL用冰乙酸溶液((3-2-8)稀释至 100 mL,盛于棕色瓶中滴加甲苯覆盖，冰箱4C保存，保存期3个月，该溶液中含10 pg/mL维生素Bio I GB/T 14701-2002 3.2-10.3 维生素B:标准工作液:取维生素B,贮备液1 (3. 2.10.2)10 ml，用水稀释至 100 mL，现用 现配。该溶液中含1 pg/ml一维生素B,o 3.2门1 荧光素标准溶液: 3.2.11.1 荧光素贮备液:称取荧光素。. 050 g，用水稀释至1 000 mL,盛于棕色瓶中冰箱4C保存。该 溶液中含50 pg/mL荧光素。 3.2.11.2 荧光素标准工作液:取1 ml荧光素贮备液((3.2.11.1)，用水定容至1 000 MI，盛人棕色瓶 中，低温保存。该溶液每毫升中含。.05 pg荧光素 3.2-12 嗅甲酚绿pH指示剂 取澳甲酚绿0. 1 g，加氢氧化钠溶液((3-2.1)2.8 ml_使之溶解，再加水稀释至200 ml。变色范围 pH3. 6一5.2. 3.3 仪器、设备 3.3.1 荧光分光光度计。 3.3.2 分析天平:感量0.。001 g 3.3.3 电热恒温水浴。 3.3.4 具塞玻璃刻度试管，15 mL. 3.4 试样的制备 按GB/T 14699.1采样，选取具有代表性的样品至少500 g，四分法缩减至 100 g，磨碎，通过 0. 28 mm孔筛，混匀，装人密闭容器中，避光低温保存备用。 I5 分析步骤 注意:全部操作避光进行。 15.1 称样 原料、配合饲料、浓缩饲料、复合预混合饲料称取Ig-2g，精确至0. 001 g;维生素预混合饲料称取 0. 25 g-0. 50 g，精确至0. 0 001 g，将试样置于100 ml、容量瓶中。 3.5.2 试样溶液的制备 向盛试样的容量瓶中加65 mL盐酸溶液((3.2.3)，于沸水浴中加热30 min(或于 121 C-1230C 15 kg高压釜中加热30 min)，开始加热5 min-10 min时常摇动容量瓶，以防试样结块。冷却至室温后， 用氢氧化钠溶液((3-2-2)调节pH至6.。一冬5，然后立即加稀盐酸溶液((3.2.4)使pH值约为4.5(嗅甲 酚绿指标剂变为草绿色)。用水稀释至刻度。通过中速无灰滤纸过滤，弃去最初5 ml,一 10 ml-溶液，收 集滤液于100 mL锥形瓶中。取整份清液，滴加稀盐酸检查蛋白质，如有沉淀生成，继续加氢氧化钠溶 液，剧烈振摇，使之沉淀完全 对高含量样品，取整份的澄清液，用水稀释至一定体积使维生素B:约为 0. 1 pg/mL. 15.3 杂质氧化 于a,b,c三支 15 mL刻度试管(3-3. 4)中各吸入试样溶液((3. 5. 2) 10 ml -，同时做平行，向试管a中 加人1 mL蒸馏水，向试管b中加人 1 m工_维生素B工作液(3-2-10-3)。然后各加入冰乙酸(3.2.7) 1 ml，旋摇混匀后逐个加高锰酸钾溶液((3.2.6)0.5 mL，旋摇混匀，静置2 min，再逐个加人过氧化氢溶 液((3.2.9)0.5 mL旋摇，使高锰酸钾颜色在10s内消褪。加盖摇动，使试管中的气体逸尽 15.4 测定 用荧光素((3-2-11-2)调整荧光仪，使其稳定于一定数值，作为仪器工作的固定条件。调整激发波长 440 nm,测定试管a,b的荧光强度，试样溶液在仪器中受激发照射不超过10s。在试管c中加人20 mg 连二亚硫酸钠((3-2-5)，摇动溶解，并使试管中的气体逸出，迅速测定其荧光强度作为空白。若溶液出现 浑浊，不能读数。 I6 结果计算 3.6.， 计算公式:试样中维生素B,含量按式(1)计算: GB/T 14701-2002 m V 入 — X - X n m vI (1) ? ?? ? ?? 式 中: 叫一 一试样中维生素B:含量，单位为毫克每千克(mg/kg); 7'— 试管a(试液加水)的荧光强度; T2— 试管b(试液加标样)的荧光强度; T.,— 试管c(试液加连二亚硫酸钠)的荧光强度; ma— 加人维生素B2标样的量，单位为微克(pg); V— 试液的初始体积，单位为毫升(mL); V— 测定时分取试液的体积，单位为毫升(m工); m— 试样质量，单位为克(9); n- 稀释倍数。 T,一T, Tz一T值应在。.“一1.5，否则需调整样液的浓度。 3.6.2 平行测定结果用算术平均值表示，保留有效数字3位。 I7 重复性 同一分析者对同一试样同时或快速连续进行两次测定，所得结果的相对偏差: 维生素Bz含-9/(mg/kg) 相对偏差/(%) 簇5.。 (士15 >5. 0 镇士10 妻50 氢 十5 方法 2:高效液相 色谱法 4.1 原理 试样中维生素B:经酸性提取液在80C-v1000水浴煮沸提取后，经过滤离心后的试样溶液注人高 效液相色谱仪反相色谱系统中进行分离，用紫外(或二极管矩阵检测器)检测，外标法计算维生素B:的 含量 。 4.2 试荆和溶液 除特殊说明外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水，色谱用水为去离子水，符合GB/T 6682中1级 用水规定 。 4.2.1 乙二胺四乙酸二钠(EDTA), 4-2.2 庚烷磺酸钠(PICB7 ),优级纯。 4.2.3 冰乙酸，优级纯。 4.2.4 三乙胺，色谱纯。 4-2.5 甲醇，色谱纯。 4.2.6 提取液:在已装人约700 mL去离子水的1 000 mL容量瓶中，加人50 mg EDTA (4. 2. 1)待全 部溶解后，加人25 ml冰乙酸((4.2.3),5 ml_三乙胺((4.2.4)，用去离子水定容至刻度摇匀 4.2.7 流动相:在已装人约700 ml去离子水的1 000 ml、容量瓶中，称人50 mg(精确至。.001 g)ED- TA (4.2.1),1.1 g(精确至。001 g)庚烷磺酸钠((4.2.2)，待全部溶解后加人25 mL冰乙酸((4.2.3), 5 mL三乙胺((4.2.4)，用去离子水定容至刻度摇匀。用冰乙酸、三乙胺调节该溶液pH至3.4010.02，过 0. 45 Fam滤膜。取该溶液860 mL与140 ml一甲醇(4.2.5)混合，超声脱气，待用。 4.2.8 维生素B:标准溶液 4.2-8. 1 维生素B:标准贮备液:准确称取维生素B2 0'01009于200 mL棕色容量瓶中，加1 mL冰乙 GB/T 14701-2002 酸(4.3)在沸水浴80℃一100'C煮沸30 min，待冷至室温后，用去离子水定容至刻度。此溶液浓度为 50 I g/mL，冰箱4C避光保存，保存期6个月。 42.8.2 维生素B:标准工作液:准确吸取5. 0 MI维生素B:标准贮备液(4.2.8.1)于50 ml棕色容 量瓶中，用流动相((4.2.7)定容至刻度。该标准工作液浓度为5 pg/mL，待上机。 4-3 仪器 、设备 4.3. 1 实验室常用玻璃器皿。 4.12 pH计(带温控，精确至0. 01). 4.3.3 恒温水浴，0'C一loo-C. 4-3.4 针头过滤器，备0. 45 pcm(或0. 2 t=)滤膜。 4.3.5 高效液相色谱仪，带紫外或二极管矩阵检测器。 4}4 试样的制备 按GB/T 14699.1采样，选取有代表性的饲料样品至少500 g，四分法缩减至100 g，磨碎，全部通过 0. 28 mm孔筛，混匀，装人密闭容器中，避光低温保存备用。 4.5 分析步骤 注意:全部操作避光进行。 4-5门 试样溶液的制备 称取维生素预混合饲料。.25 g-0. 50 g,精确至0. 000 1 g;复合预混合饲料1 g-5 g,精确至 0. 001 g，于100 ml棕色容量瓶中，加人三分之二体积的提取液(4-2.6)于WC-100℃水浴中煮沸 30 min，待冷却后，加人14 mL甲醇(4-5)，用提取液定容至刻度，混匀、过滤。维生素预混合饲料样液需 由提取液进一步稀释5倍~10倍，取部分滤液过0. 45 pm(或。.21 cm)滤膜，待上机。 4.5.2 测 定 4,5.2.1 高效液相色谱条件 色谱柱:长150 mm，内径3.9 mm，不锈钢柱。 固定相:NoVa-pak C,R,粒度4 ym，或相当的C,，柱。 流动相流速:0. 80 ml,/min; 温度:25'C~ 28 C。 进样体积:10 pL, 检测器:紫外或二极管矩阵检测器，使用波长:多种维生素联检为280 nm，单检维生素B:为 267 nm , 保留时间:约10 min, 4.5-2.2 定f 测定 按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数。向色谱柱注人维生素B,标准工作液((4. 5. 8-2)及试 样溶液((4.5.1)，得到色谱峰面积的响应值，取标准溶液峰面积平均值定量计算。 标准工作液应在分析始末分别进样，在样品多时，分析中间应擂人标准工作液校正出峰时间。 46 结果计算 4.6.1 试样中维生素B:的含量按式(2)计算: 。=P; X1二xc;xv=, P.,; x m x艺 式中 : 叭— 试样中维生素B:的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); m— 试样质量，单位为克(g) ; V;— 试样溶液进样体积，单位为微升(川); 尸— 试样溶液峰面积值; ··。，.，’··· ·，· ⋯ (2 ) GB/T 14701-2002 q— 标准溶液浓度，单位为微克每毫升如g/mL) ; V?,— 标准溶液进样体积，单位为微升(pL); P?— 标准溶液峰面积平均值。 4.6.2 平行测定结果用算术平均值表示，保留有效数字3位。 4.7 ，复性 同一分析者对同一试样同时两次平均测定结果的相对偏差: 维生素B2含量//(mg/kg) 相对偏差/(%) > 1.0oxiol ( 士5. 0 l o-t no x l o3 毛 士10.0