蜜蜂花粉多糖提取条件研究

!"#$%&’ "( )** !!"#$%&’"2005年第8期 蜜蜂杂志 (月刊) 收稿日期：2005-05-08 摘 要：以蜜蜂采集的茶花粉为实验材料，采用正交实验法 研究了多糖水提取条件，得出的最佳提取条件为：加水比1! 9， 提取温度为100"，提取时间为l h。并用高压液相色谱法测定 提取的茶花粉多糖的性质与 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 样品 ! -环糊精性质相似。 关键词：蜜蜂；花粉多糖；提取条件 中图分类号：S896.4文献标识码：A 文章编号:1003-9139 (2005)08-0000-02 +,-./01 23 *4,567,/23 823./,/231 29 :2;<1677=65/.0 952> )00 :2;;03 &?1,567,@ This experiment was carried out based on camellia pollen, using orthogonal experimental design to study the water extraction conditions of polysaccharide frombeepollen. Results showed that extraction with a 1:9 ratio at 100" for 1 hour gave the best result. Then the character of the polysaccharide extracted was determined using HPLC (high performance liquid chromatography), whichisveryclosetothesampleB-cyclodextrin. A0< B25.1@ honeybee; pollen polysaccharide; ex- tractionconditions 1实验材料 1.1材料 花粉为蜜蜂采集的茶花花粉，由浙江省江山市养 蜂产业化协会提供。 1.2仪器 721分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)、 TU-1800紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有 限公司)、冰箱(西门子家用电器，中国博西家用电器 销售有限公司)、电子天平(上海精密科学仪器有限公 司)、烘箱(上海跃进医疗器械厂)、电热恒温水浴锅(江 苏金坛市医疗仪器厂)、Water1525高压液相色谱仪。 1.3试剂 浓硫酸：分析纯，95.5#。 6#苯酚：6g苯酚加94mL水使之溶解，可置冰 箱中避光长期储存。 标准葡萄糖溶液：准确称取葡萄糖 20 mg，于 500mL容量瓶中，加水至刻度。 2实验 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 2.1花粉预处理 称取蜜蜂采集的茶花粉300g，粉碎机粉碎过筛， 加入 300 g倍蒸馏水，胶体磨进一步磨碎，搅拌均 匀，然后分别精确称取50g花粉磨碎液于9个烧杯 中，冷冻12h后取出。 2.2花粉中的多糖提取条件的选择 影响从花粉中提取多糖的条件主要包括固液比、 温度、提取时间三个方面。为此，本研究选择固液 比、温度、提取时间三个因素，应用L9(34)的正交试 验表 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 试验，见表1和表2。 磨碎花粉液冷冻 12 h后，取出装有花粉液的 9 个烧杯，按表2的固液比加入沸水，搅拌均匀。又按 表2水浴温度和提取时间进行实验，过滤收集滤液。 然后把滤渣按以上条件再浸提一次，二次滤液合并进 行抽滤，真空浓缩滤液，之后加入食用乙醇进行醇 析，取醇析物加热水溶解，抽滤除去沉淀的蛋白质， 又加入食用乙醇进行醇析并离心，真空干燥沉淀物得 蜂花粉多糖，并计算蜂花粉多糖的粗提取量(!1)。 2.3花粉多糖的实际含量测定(! 2) 原理：苯酚-硫酸试剂可与游离的寡糖、多糖 中己糖、糖醛酸(或甲苯衍生物)起显色反应，己糖在 490 nm处(戊糖及糖醛酸在 480 nm处)有最大吸收， 吸收值与糖含量呈线性关系。 制作标准曲线：准确称取葡聚糖（或葡萄糖） 20mg，于500mL容量瓶中，加水至刻度，分别吸取 0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6及1.8mL，各用水 补至 2.0 mL；然后加 6#苯酚 1.0 mL及浓硫酸 5.0 mL，静置 10 min，摇匀，室温放置 20 min以后于 490nm处测光密度，以2.0mL水按同样显色操作为 空白，横坐标为多糖体积数，纵坐标为光密度值，得 标准曲线。 花粉多糖的定量分析：精确量取粗多糖溶液0.6mL， 0.8mL，1.0mL至比色管中，各用水补至2.0mL。向 每支比色管中加入 6#苯酚 1.0 mL及浓硫酸 5.0 mL 静置10min，摇匀，室温放置20min。以后于490nm 蜜蜂花粉多糖提取条件研究 蜂花粉功能因子提取与开发课题组 表1花粉多糖提取因素水平表 因素 A B C 水平 固液比（质量、体积比） 温度/" 提取时间/h 1 1! 3 60 2 2 1! 6 80 4 3 1! 9 100 6 表2 正交试验方案 试验号 A B C D 固液比（质量、体积比） 温度/" 提取时间/h 空列 1 1 2 2 3 3 4 3 5 1 6 2 7 2 8 3 9 1 1 1! 3 1 1! 3 1 1! 3 2 1! 6 2 1! 6 2 1! 6 3 1! 9 3 1! 9 3 1! 9 1 60 2 80 3 100 1 60 2 80 3 100 1 60 2 80 3 100 1 2 2 4 3 6 2 4 3 6 1 2 3 6 1 2 2 4 ●实验研究 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 !" 蜜蜂杂志 (月刊) !"#$%&’ "( )** !!"#$%&’" %"+, ())* +,-. 处测光密度，以标准曲线计算多糖含量。 计算花粉多糖提取率： 花粉多糖提取率/!=（!1" !2）" 100# !3 式中：!3———花粉样品的重量 2.4花粉多糖性质定性测定 0.05g/mL多糖溶液配制：称2.5g蜂花粉多糖， 溶于少量的沸水中，再用蒸馏水定容至50mL溶液。 多糖与蒽酮反应：先取20mg蒽酮溶于10mL体 积分数为80!的浓硫酸中，供定性反应使用。再取 0.05g/mL花粉多糖溶液lmL，加入蒽酮浓硫酸溶液2mL， 后观察结果。 多糖与间苯二酚反应：先溶 50 mg间苯二酚于 100mL盐酸中(水与盐酸体积比为2$ 1)。再取0.05g/mL 花粉多糖溶液 1 mL，加间苯二酚盐酸溶液 2滴， 100%水浴2min，观察结果。 2.5花粉多糖色谱图扫描 用蒸馏水将花粉多糖配制成 0.1 mg/mL溶液， 同时用蒸馏水将已知分子量的 ! -环糊精配制成 0.1mg/mL溶液作为对照，先用TU-1800紫外可见分 光光度计扫描，以确定吸收波长，用 Water 1525高 压液相色谱仪分别扫描 !-环糊精和提取的茶花粉多 糖的色谱图。 3结果 3.1蜂花粉多糖提取条件的正交试验结果 蜂花粉多糖定量分析的标准曲线图1，正交试验 结果见表3。 表 4可知，B因素差异极显著，A因素差异显 著，C因素差异不显著。这 说明 关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书 B和A是影响花粉 多糖提取的主要因素，C因素是非主要因素。结合表 3中的花粉多糖提取率，我们可确定花粉多糖提取最 佳条件是：A3B3C1。即固液比是 1$ 9，温度是 100%，时间是1h。 3.2蜂花粉多糖定性检验结果 提取的蜂花粉多糖能与蒽酮反应形成深绿色，说 明有糖存在。 提取的蜂花粉多糖能与间苯二酚反应形成深红 色，说明有多糖存在。 因此，从蜂花粉多糖定性检验结果看能初步证 明，我们提取得到的复合物是多糖类物质。 3.3蜂花粉多糖色谱图扫描结果 从图2和图3可见，标准样品 !-环糊精保留时 间为3.480min，而实验提取的花粉多糖保留时间为 3.483min，两者的保留时间非常相近，加上前面我们 已从定性和定量实验确认提取物为多糖，由此可以推 断本研究提取的茶花粉蜂多糖的性质与标准样品 !- 环糊精性质相似。另外从图3还可知，整个图形只有 1个主体吸收峰，这说明提取的花粉多糖比较纯。 *本项目由浙江省科技厅“蜂花粉功能因子提取与开 发”(2002c32007)课题组协作完成。课题组成员：汪礼 国、曾志将、颜伟玉、柳 刚、邬向东、苏松坤、丁 向英、陆水明、谢国秀、樊兆斌、杨 明、饶 波。 表4正交试验方差分析表 变异来源 平方和 自由度 均方 " + 0.070 2 0.035 70* B 0.470 2 0.237 474** C 0.005 2 0.003 5* 误差 0.001 2 0.001 总和 注：*表示差异显著；**表示差异极显著 0.554 8 表3 花粉多糖提取正交试验结果 试验 号 A B C D 花粉多糖 提取率/%固液比(质量、体积比)温度/% 提取时间/h空列 1 1 0.362 2 2 0.478 3 3 0.843 4 3 0.436 5 1 0.635 6 2 0.995 7 2 0.468 1 1$ 3 1 1$ 3 1 1$ 3 2 1$ 6 2 1$ 6 2 1$ 6 3 1$ 9 1 60 2 80 3 100 1 60 2 80 3 100 1 60 1 2 2 4 3 6 2 4 3 6 1 2 3 6 8 2 0.765 9 3 1.096 #1 1.266 $2 1.878 $3 2.934 %1 0.422 %2 0.626 1.683 2.066 2.329 0.561 0.689 80 1 100 2 2.122 2.010 1.946 0.707 0.670 2 3 4 1 2.093 1.941 2.044 %3 & 0.978 0.556 0.776 0.215 0.648 0.059 3 1$ 9 3 1$ 9 !"