5无菌检测操作规程x

5无菌检测操作规程 1、目的： 制定无菌检测操作规程，确保检验操作正确。 2、范围： 本 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 适用于本公司无菌检测操作。 3、依据： 《中国药典》2010年版二部附录《无菌检查法》。 4、责任者： 微生物检验人员，实验室主任。 5、程序 5.1 环境要求：无菌检测方法系用于检查医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的方法。该项检查应在环境洁净度万级背景下的局部百级的单向流区域内或隔离系统中进行。其全过程必须严格遵守无菌操作。防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出。操作环境洁净度按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子和沉降菌的测试方法》的现行国家标准每月检测一次，日常检验需对试验环境进行监控。 5.2 方法验证：进行该项检查前应按照《中国药典》附录《无菌检查法》中规定确认该方法的适用性。 5.3 人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术 培训 焊锡培训资料ppt免费下载焊接培训教程 ppt 下载特设培训下载班长管理培训下载培训时间表下载 。 5.4检验数量及检验量：最小检验量应符合《中国药典》附录《无菌检查法》和《微生物限度检查法》中要求。 5.5 细菌培养温度为30～35℃，真菌培养温度为23～28℃。 5.6 仪器用具：微生物限度检查仪、超净工作台、生物安全柜、恒温培养箱、试管及试管架、酒精灯、75％乙醇棉、灭菌刻度吸管(1ml)、灭菌平皿（9cm）、锥形瓶、三角烧瓶、灭菌剪刀、镊子等。 5.7 消毒剂配制： 5.7.1 75％乙醇溶液（配制酒精棉球用）。 5.7.2 0.2％新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）。 5.7.3 2％来苏尔溶液（配制消毒棉球用）。 5.8 试剂及培养基的配制： 5.8.1 0.1％蛋白胨水溶液：取蛋白胨1.0g，加水1000ml,微温使溶解，滤清，调节PH值至7.1±0.2，分装，灭菌。 5.8.2 pH7.0灭菌氯化钠－蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml微温溶解，滤清，分装，灭菌。 5.8.3 根据供试品特性，可选用其他经验证的适宜溶液作为稀释液、冲洗液。如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面活性剂或中和剂。 5.8.4 硫乙醇酸盐流体培养基：按商品说明称取培养基，配制，摇匀，分装，按培养基说明高压灭菌，保存备用。分装的容器应适当，其装量与容器高度比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却只限加热一次，并应防止被污染。 5.8.5 改良马丁培养基：取商品干燥培养基28.5g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟（若干燥培养基结块应勿使用）。 5.8.6 选择性培养基： 按上述硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适量的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法验证试验(附表1常见干扰物的中和剂或灭活方法见微生物限度检查法中）。 5.8.7 营养肉汤培养基：按商品说明称取培养基，配制，加热，溶解，分装，按培养基说明高压灭菌，保存备用。 5.8.8 营养琼脂培养基：取商品干燥培养基3.4g，加蒸馏水1000ml，加热溶解分装，121℃高压灭菌15分钟。 5.8.9 改良马丁琼脂培养基：取商品干燥培养基制备或按改良马丁培养基的处方及制法，加入14.0g琼脂，调节PH值使灭菌后PH值为6.4±0.2，分装，121℃高压灭菌15分钟。 5.8.10 培养基可按以上处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2～25℃，避光的环境中。培养基若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用。若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。 5.9 试验前的准备工作 5.9.1 用具的洗刷 5.9.1.1 玻璃器皿：如试管、量筒、移液管、刻度吸管、离心管、三角瓶、双碟等用清洁液浸泡，用流水洗涤，再用蒸馏水洗涤4～5次，倒置，晾干。试管、移液管、三角瓶等使用过后，应先消毒倒出内容物后，再清洗晾干。 5.9.1.2 注射器用水冲洗后，用洗涤剂冲洗，然后用水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗3次。 5.9.1.3 剪刀、镊子用水及去污粉洗涤，用水冲洗干净，再用蒸馏水洗涤3次。 5.9.1.4 多用薄膜过滤器，玻璃管等用饮用水及蒸馏水洗净、晾干。 5.9.1.5 洁净服、裤、帽子、口罩等用水洗涤洁净后，晾干。 5.9.2 用具的包扎及灭菌 5.9.2.1 移液管、刻度吸管在管口上端内，松松塞入少许脱脂药棉，然后每支管用白纸严密卷好，再用两层牛皮纸一起包扎。 5.9.2.2 洗涤洁净的注射器及适配针头各部件与剪刀、镊子一并入垫有纱布的铝盒内，一层层放好，盖上纱布，将铝盒盖好，用牛皮纸包扎。 5.9.2.3 试管、三角瓶等在管（瓶）口塞上纱布棉纱用牛皮纸包装严密。 5.9.2.6 将洁净服、等用布口袋配套装入，扎紧口袋，用牛皮纸包扎好。 5.9.2.7 将以上包扎好的用具在121℃蒸汽灭菌20分钟。或采取适宜的灭菌方法。（适宜高温灭菌的器皿可采用160℃干热灭菌） 5.9.2.8 物品灭菌完毕，勿立即置冷处，以免急速冷却导致染菌，应置恒温培养箱中干燥。 5.9.3、洁净室的清洁与灭菌 5.9.3.1 洁净室及超净台，每周用臭氧或高锰酸钾加甲醛薰蒸灭菌。 5.9.3.2 在每次操作前，应作好清洁工作，并用0.2%新洁尔灭溶液或2%来苏尔或75％乙醇擦洗超净台工作台面及可能污染的死角，然后开启紫外线灯杀菌半小时，超净台空气过滤器自净半小时。操作完毕后，用上述消毒液，再次处理工作台面，开紫外光灯杀菌30分钟以上。 5.10 操作 5.10.1 开启传递窗外侧门，将物品置传递窗内，关闭窗门，开启紫外灯照射半小时。 5.10.2 操作人员按进入洁净室规定程序，洗手、更衣换工作鞋，换无菌衣、裤、口罩。进入洁净室内，开启内侧门，取出物品，关闭内侧门，再将用具放入超净台内。 5.10.3 培养基适用性检查：无菌检查用硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品检查前或与供试品检查同时进行。 5.10.3.1 无菌效果检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶）培养14天，应无菌生长。 5.10.3.2 灵敏度检查： 5.10.3.2.1 菌种及菌液制备： 5.10.3.2.1.1 检查用菌种包括： 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26 003] 铜绿假单胞菌（Pstudomonas aeruginosa）[CMCC(B)10 104] 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B)63 501] 生孢梭菌（Clostridium sporgenes）[CMCC(B)64 941] 白色念珠菌（Candida albicaus）[CMCC(F)98 001] 黑曲菌（Aspergillus niger）[CMCC(F)98 003] 5.10.3.2.1.2 菌液制备方法：按照《中国药典》2010年版二部附录《无菌检查法》规定进行。 5.10.3.2.2 培养基接种：取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100CFU的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另一支不接种，作为空白对照，培养3天；每管装量为9ml的改良马丁培养基5支分别接种小于100CFU的白色念珠菌、黑曲菌各2支，另一支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。 5.10.3.2.3 结果判断：空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判断该培养基灵敏度符合规定。 5.10.4 阳性对照试验： 5.10.4.1 应根据供试品特性选择阳性对照菌，无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品以生孢梭菌为对照品；抗真菌的供试品以白色念珠菌为对照品。 5.10.4.2 阳性对照试验的菌液制备同方法验证试验，加菌量小于 100cfu，供试品用量同供试品无菌检查每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养 48～72小时应生长良好。 5.10.5 阴性对照试验：取相应溶剂和稀释液、冲洗液同法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。 5.10.6 供试品检查： 5.10.6.1、供试品制备应无菌操作，供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与验证的方法相同。 5.10.6.2 供试品的制备：用对供试品容器表面进行彻底消毒，用灭菌镊子取出注射器，在火焰旁将针芯插入针管并安上针头，注射器针头应迅速通过火焰数次，用注射器以无菌操作直接吸取供试液。或抽至已灭菌玻璃容器中，用稀释剂稀释为供试液，如为可溶于水的固体供试品，应取规定量，加入适宜的灭菌稀释液溶解做为供试液，只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤法。。 5.10.6.3 直接接种法 5.10.6.3.1、直接接种法即取规定量供试品分别接种至各含硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基的容器中。除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的 10%，同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于 15ml，改良马丁培养基每管装量不少于 10ml。培养基的用量和高度同方法验证试验。 5.10.6.3.2 接种规则 5.10.6.3.2.1 敷料供试品 ：取规定数量，以无菌操作拆开每个包装，于不同部位剪取约 100mg或 1cm×3cm的供试品，接种于足以浸没供试品的适量培养基中。 5.10.6.3.2.2 肠线、缝合线等供试品：肠线、缝合线及其它一次性使用的医用材料按规定量取最小包装，无菌拆开包装，接种于各管足以浸没供试品的适量培养基中。 5.10.6.3.2.3 灭菌医用器具供试品：取规定量，必要时应将其拆散或切成小碎段，接种于足以浸没供试品的适量培养基中。 5.10.6.4 薄膜过滤法 5.10.6.4.1 薄膜过滤法应优先采用封闭式薄膜过滤器，也可使用一般薄膜过滤器。无菌检查用的滤膜孔径应不大于 0.45μm。直径约为 50mm。根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。 5.10.6.4.2 水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量一般为 100ml，总冲洗量不得超过 1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。 5.10.6.4.3 水溶液供试品 ， 取规定量，直接过滤，或混合至含适量稀释液的无菌容器内，混匀，立即过滤。如供试品具有抑菌作用或含防腐剂，须用冲洗液冲洗滤膜，冲洗次数一般不少于三次，所用的冲洗量、冲洗方法同方法验证试验。冲洗后，如用封闭式薄膜过滤器，分别将100ml硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基加入相应的滤筒内。如采用一般薄膜过滤器，取出滤膜，将其分成 3等份，分别置于含 50ml硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基容器中，其中一份做阳性对照用。 5.10.6.4.4 非水溶性制剂供试品,取规定量，直接过滤；或混合溶于含聚山梨酯 80或其他适宜乳化剂的稀释液中，充分混合，立即过滤。用含 0.1～1%聚山梨酯80的冲洗液冲洗滤膜至少 3次。滤膜于含或不含聚山梨酯 80的培养基中培养。接种培养基照水溶液供试方法操作。 5.10.6.5 硫乙醇酸盐流体培养基在30～35℃培养14天，改良马丁培养基在23～28℃培养14天。培养期间应逐日检查是否有菌生长，并填写无菌检查记录。如供试品管出现浑浊或沉淀，经培养后不能从外观判断时，可取该培养液接种在另一支相同新鲜培养基中，细菌培养2天，真菌培养3天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。 5.10.7 结果判断：阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。 若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定;若供试品管中任何显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 实验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。当符合下列至少一个条件时，方可判试验结果无效： （1） 无菌检查试验所用设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查要求； （2）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素； （3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所使用的物品和（或） 无菌操作技术不当引起的。试验若经确认无效，应重试。重试时，重新取同量供试品，依法检查，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符合规定。 6、记录 培养基、稀释液等试剂配制和使用，菌种购置传代和使用，均得在《试验室工作记录》中记录，并及时填制《试验记录》，需要时签发《监视和测量 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 》。 附表 固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量 供试品装量 M/支或瓶 每支供试品接入每种培养基的最少量 供试品最少检验数量(瓶或支 ) M <50mg 全量 10 ① 50mg≤M<300mg 半量 10 300mg≤M<5g 150 mg 10 M≥5g 500 mg 10 ② 外科用敷料棉花及纱布 取 100 mg 或1cm×3cm 10 缝合线、一次性医用材料 整个材料 ③ 10 ① 带导管的一次性医疗器具（如输液袋） 10 其它医疗器具 整个器具 ③（切碎或拆散开） 10 ① 注：① 若供试品每个容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最少检验数量加倍。 ② .抗生素粉针剂（≥5克）及抗生素原料药（≥5克）的最少检验数量为6瓶（或支）。桶装固体原料的最少检验数量为 4个包装。 ③ 如果医用器械体积过大，培养基用量可在 2000ml以上，将其完全浸没。 编制：魏小鑫 审核： 批准： 4