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蛋白质含量测定.doc

蛋白质含量测定

liu建东
2017-10-25 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《蛋白质含量测定doc》,可适用于综合领域

蛋白质含量测定一原理具有两个或两个以上队键的化合物皆有双缩服反应。在碱性溶液中双缩脉与铜离子结合会形成复杂的紫红色复合物。蛋白质及多肤的脓键与双缩腮的结构类似,也能与cu’形成紫红色络合物(见图),其最大光吸收在nm处,其颜色深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质的分子量和氨基酸的组成无关,该法测定蛋白质的浓度范围为一mg,mL。双编腮法常用于蛋白质的快速测定,也可用于蛋白质水解过程中水解程度的检测。三、试剂与仪器,双缩脉试剂取,g硫酸铜(CuSOH)和,og的泅石胶钾钠(NaKCHOH)溶于mL蒸馏水中,边搅拌边加入mll,的NaOH溶液(可另加lgKI以防止价Cu离子自动还原成价cu离子,生成CUO沉淀),用水稀释至lmL。此试剂可长期保存。如果有黑色沉淀产生应重配。,标准蛋白质溶液浓度为mg,mL的结晶牛血清白蛋白溶液成相同浓度的酪蛋白溶液(用,m,L的氢氧化钠溶液配制,配制过程中可适当加热助溶或放置过夜)。作为标准用的蛋白质要预先用微量凯氏定氮法测定蛋白质含量,确定纯度,根据纯度和体积称取相应质量配制成标准溶液。,待测蛋白质溶液可选用人血清(稀释倍)或其他血清样品等稀释,使稀释后的浓度在标准曲线测试范围内。(二)仪器试管(mL)、试管架、刻度吸量管、恒温水浴锅、可见光分光光度计四、操作方法,标准曲线的制作取支试管分成两组,按下表平行操作取两组测定的A的平均值,以A为纵坐标,蛋白质质量为横坐标,绘制标准曲线。,样品测定取文试管分成两组,按下表平行操作。五、结果取两组样品测定的平均值计算注意:()须于显色后min内比色测定,且各管由显色到比色的时间应尽可能一致,即先显色的管先测定A值。min后可有雾状沉淀产生。()样品中如果有大量脂肪性物质同时存在,会产生浑浊的反应混合物,这时可用石油醚使溶液澄清后离心,取上清液测定。测定固体样品蛋白质含量时,样品经溶解、稀释后,应离心取上清液测定。

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