玉米营养成分的测定

粗脂肪含量（索氏提取法） 一、实验目的 1. 掌握索氏提取法测定食品中脂肪含量的方法和原理。 2. 熟悉索氏提取器的操作方法。 二、实验原理 索氏提取法的原理是将粉碎或经前处理而分散的试样，放入圆筒滤纸内，将滤纸筒置于索氏提取管中，利用乙醚在水浴中加热回流，提取试样中的脂类于接受烧瓶中，经蒸发去除乙醚，再称出烧瓶中残留物质量，即为试样中脂肪含量。 三、实验材料 （一）试剂  无水乙醚 （二）器材  索氏提取器、电热恒温水浴 、电热恒温烘箱、 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 天平 四、方法与步骤 1. 样品制备  粉碎样品，准确称取2～5g试样于滤纸筒内，封好上口。 2. 索氏提取器的准备  索氏提取器是由回流冷凝管、提脂管、提脂烧瓶三部分所组成，抽提脂肪之前应将各部分洗涤干净并干燥，提脂烧瓶需烘干并称至恒量。 3. 抽提  将滤纸筒放入脂肪提取器的抽提筒内，连接已干燥至恒量的接受瓶，由抽提器冷凝管上端加入无水乙醚至瓶内容积的2/3处，于水浴（约40℃）上加热，使乙醚或石油醚不断回流提取，约6个小时，至抽提完全为止。 4. 称量  取下接受瓶，回收乙醚，待接受瓶内乙醚剩1～2mL时在水浴上蒸干，再于40℃干燥至恒重。 五、计算 脂肪（％)=   ×100 式中： m——样品的质量，g； m1——接受瓶的瓶质量，g； m2——接受瓶与样品的质量，g。 可溶性总糖的测定（蒽酮比色法） 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理 强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620 nm 处有最大吸收，在10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、试剂 （1) 葡萄糖标准液： l00ug/ml (2）浓硫酸 (3) 蒽酮试剂:0.2g蒽酮，1g硫脲，置于烧杯中，在搅拌状态下，缓慢加入100 ml 浓H2SO4        中，当日配制使用。 四、操作步骤 1 .葡萄糖标准曲线的制作 取 7 支大试管，按下 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ ml ） 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ ml ） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（ ug ） 0 10 20 30 40 60 80                 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1 ，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0min取出，用流水冷却，室温放置10min，在 620 nm 波长下比色。以标准葡萄糖含量（ug) 作横坐标，以吸光值作纵坐标，作出标准曲线。 2 .样品中可溶性糖的提取 将玉米磨碎至2mm以下，准确称取1g, 放入50m1三角瓶中，加沸水25m1，在水浴中加盖煮沸10min，冷却后过滤，滤液收集在50m1容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液2m1 ，置另一50m1容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀测定。 3 .测定 吸取lml已稀释的提取液于大试管中，加入4ml蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。比色波长620nm ，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ug）。查表所得糖含量（ug）×稀释倍数 五、结果处理 还原糖的测定（直接滴定法） 一、目的要求 1、理解直接滴定法测定还原糖的原理及操作要点； 二、实验原理 试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝作指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液），还原糖将溶液中的二价铜还原成氧化亚铜。以后稍过量的还原糖使次甲蓝指示剂褪色，表示终点到达。 三、实验试剂 1、盐酸。 2、碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜 ( CuSO4?5H2O) 及0.05g次甲基蓝，溶入水中并稀释至1000mL。 3、碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。 4、乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。 5、亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。 6、葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经过96℃±2℃干燥2h的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mL盐酸，并以水稀释至1000mL。此溶液每mL相当于1.0mg葡萄糖。 四、操作步骤 （一）试样处理 称取约2.50g-5.00g试样，置于250mL容量瓶中，加200mL水，在45℃水浴中加热一小时，并时时摇匀。冷后加水至刻度，混匀，静置，沉淀。吸取200mL上清液于另一250mL容量瓶中，慢慢加入5mL乙酸锌溶液，混匀放置片刻，加5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，沉淀、静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。 （二）标定碱性酒石酸铜溶液 吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于250mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9mL葡萄糖，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同时平行操作三份，取其平均值，计算每10mL （甲、乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量或其他还原糖的质量 （mg）。 A = C?V 式中：A—10mL （甲、乙液各5mL） 碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量(mg)； C—葡萄糖标准溶液的浓度，mg/ mL； V—标定时消耗葡萄糖标准溶液的体积，mL。 （三）试样溶液预测 吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加试样溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积。当样液中还原糖浓度过高时应适当稀释，再进行正式测定，使每次滴定消耗样液的体积控制在与标定碱性酒石酸铜溶液时消耗的还原糖标准溶液的体积相近，约在10mL左右。 （四）试样溶液测定 吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加比预测体积少1mL的试样溶液至锥形瓶中，使在2min内加热至沸，趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积。 五、数据记录与计算 （一）数据记录   1 2 3 平均值 标定时葡萄糖用量，mL         10mL碱性酒石酸铜相当于葡萄糖的量，mg   测定时消耗试样溶液的量，mL         称取试样质量，g             （二）结果计算 试样中还原糖(以葡萄糖计)的含量为： 式中： X—试样中还原糖(以葡萄糖计)含量，g/100g； A—10 mL碱性酒石酸铜溶液 (甲、乙液各5 mL) 相当于葡萄糖的质量，mg； m—试样质量，g； V—测定时平均消耗试样溶液体积，mL； V0—试样液总体积，mL； 总淀粉含量的测定（酸水解法） 1.原理 样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用酸水解成具有还原性的单糖，然后按还原糖测定，折算成淀粉。 2.试剂 （1） 乙醚。 （2） 85%乙醇溶液。 （3） 6mol/L盐酸溶液。 （4） 10mol/L氢氧化钠溶液。（40%） （5） 2.5mol/L氢氧化钠溶液。（10%） （6） 甲基红指示液：0.2 %乙醇溶液。 （7） 精密pH试纸。 （8） 20 % 乙酸铅溶液， （9） 10 % 硫酸钠溶液。 （10） 其余试剂同还原糖的测定。 3.操作方法 3.1样品处理 粮食、豆类、糕点、饼干等较干燥的样品：称取2.0～5.0 g磨碎过40目筛的样品，置于放有慢速滤纸的漏斗中，用30 ml乙醚分三次洗去样品中脂肪，弃去乙醚。再用150 ml 85 %乙醇溶液分数次洗涤残渣，除去可溶性糖类物质。并滤干乙醇溶液，以100 ml水洗涤漏斗中残渣并转移至250ml锥形瓶中，加入30 ml 6 mol/L盐酸，接好冷凝管，置沸水浴中回流2 h。回流完毕后，立即置流水中冷却。待样品水解冷却后，加入2滴甲基红指示剂，先以40 %氢氧化钠溶液调至黄色，再以6 mol/L盐酸校正至水解液刚变红色为宜。若水解液颜色较深，可用精密pH试纸测试，使样品水解液的pH约为7。然后加20 ml 20 %乙酸铅溶液，摇匀，放置10 min。再加20 ml 10 %硫酸钠溶液，以除去过量的铅。摇匀后将全部溶液及残渣转入500 ml容量瓶中，用水洗涤锥形瓶，洗液合并于容量瓶中，加水稀释至刻度。过滤，弃去初滤液20 ml，滤液供测定用。 3.2 测定 按还原糖的测定步骤操作。 4 计算 式中： F--10ml碱性酒石酸铜相当的葡萄糖量，mg V--滴定时样品水解液消耗量mg； V0--测滴定时空白液消耗量，mg； m--称取样品质量，g； 500--样品液总体积，ml； 0.9--还原糖（以葡萄糖计）换算成淀粉的换算系数； 粗蛋白含量测定（凯式定氮法） 1 原理 蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。 2 试剂 所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。 硫酸铜 硫酸钾  硫酸  4或2%硼酸溶液 混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合，也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合 40%氢氧化钠溶液 0.05N盐酸标准溶液 3操作方法 样品处理：精密称取0.2～2.0g固体样品或2～5g半固体样品或吸取10～20ml液体样品(约相当氮30～40mg)，移入干燥的 100ml或500ml定氮瓶中，加入0.5g硫酸铜，3g硫酸钾及10ml硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，5至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5h。取下放冷，小心加20ml 水。放冷后，移入100ml 容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白试验。 装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。 向接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示液1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化稀释液由小玻杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻杯的棒状玻塞。将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，并加水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min。移动接受瓶，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.05N硫酸或0.05N盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。 4 计算 式中：X——样品中蛋白质的含量，%； V1——样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml； V2——试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml； N——盐酸标准溶液的当量浓度； 0.014——盐酸标准溶液1ml相当于氮克数； m——样品的质量(体积)，g(ml)； F——氮换算为蛋白质的系数。 蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵为 5.30。 赖氨酸含量测定（茚三酮比色法） 一.  目的 了解赖氨酸总含量的测定方法。 掌握用比色法测定谷物类样品中赖氨酸含量。 二.  原理 蛋白质中的赖氨酸残基上具有一个游离的e-NH2，它与茚三酮起颜色反应呈蓝紫色，在波长570nm处其颜色的深浅在一定范围内与赖氨酸残基的含量成线性关系。 亮氨酸与赖氨酸的碳原子数目相同，它仅有的一个氨基（a-NH2）相当于蛋白质中赖氨酸残基上的e-NH2，因而可以用亮氨酸标准液制作标准曲线来测定蛋白质中赖氨酸的含量。但计算浓度时必须乘上两种氨基酸的分子量之比（赖氨酸与亮氨酸分子量之比为1.11:1）。 式中  W：样品质量 C ：样品中游离氨基酸的量，各种作物种子中游离氨基酸的含量大约是：玉米：0.01%，高粱：0.04%，水稻：0.01%，小麦：0.05% X ：从标准曲线查得的赖氨酸的质量 三.  实验材料及设备 1.  材料 玉米粉 2.  仪器 分光光度计  分析天平  恒温水浴 3.  器材 刻度试管： 25mL×11 移 液 管： 1mL×1  2mL×2  20mL×1  烧    杯： 250mL×2  50mL×1 滴    管： 2 洗 耳 球： 2 滤    纸： f11cm 研钵、漏斗、洗瓶、试管架、移液管架、玻棒：各1 四.  试剂的配制 1. 柠檬酸缓冲液（0.2mol/L，pH5.6） 2. 茚三酮试剂 称3g茚三酮溶于100mL 95%乙醇中，溶解后加入160mg二氯化锡，搅拌溶解后加入100mL柠檬酸缓冲液中，搅匀备用。 3. 亮氨酸标准液（50mg/mL） 准确称取5mg亮氨酸，用蒸馏水稀释定容到100mL，则得浓度为50mg/mL的标准液。 五. 操作步骤 1.  样品液的制备 (1) 取材：称取烘干、粉碎（过80目筛）的玉米粉0.3g（油料种子须经脱脂处理）。 (2) 提取：将称取的样品放入试管，准确加入20mL蒸馏水，摇匀。读取样品悬液的总        体积20mL，置于80℃恒温水浴中提取20min。（可间歇摇动） (3) 定容：冷却后，用蒸馏水将试管中悬液定容至（2）中悬液总体积刻度20mL,，即最终样品液总定容体积仍为20mL，摇匀。 (4) 过滤：将提取液用滤纸过滤，收集滤液作为待测样(滤纸不能用蒸馏水湿润)。 2.  标准曲线制作及样品测定 取9支刻度试管，按下表所示顺序操作。 六. 结果处理 1. 由0～6号管的数据，以亮氨酸含量(mg)为横坐标，A570为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线； 2. 求样品管A570的平均值570； 3. 由530从标准曲线中求样品管中赖氨酸的含量(mg)； 4. 计算你所取生物材料中赖氨酸的含量（单位用mg/mg样重）。 支链和直链淀粉含量测定(简易碘比色法) 准确称取试验样品0.1g置于100ml容量瓶中，加入1.0ml95％乙醇，轻摇容量瓶，使样品湿润分散，再加入9ml（1mol/L）NaOH溶液，使碱液沿颈壁缓慢流下，旋转容量瓶，使碱液冲洗粘附于瓶壁上的样品，置于沸水浴中糊化10min，取出冷却后加蒸馏水定容。吸取5ml样品溶液加入已盛有半瓶蒸馏水的100ml容量瓶中，再在这容量瓶中加入1ml（1mol/L）乙酸溶液，使样品酸化，再加入1ml碘液，充分摇匀，用蒸馏水定容，静置20min显色。用5ml的0.09mol/L的氢氧化钠溶液代替样品配置空白溶液，用空白溶液于分光光度计620nm处调节零点并测出有色样品的吸光值。 标准曲线绘制取已知直链淀粉含量的标准样品各0.1g用上述简易的碘比色法进行测定，以标样的直链淀粉为纵坐标，以相应的吸光度值为横坐标，绘制标准曲线，求出样品直链淀粉含量。 食品中水分及干物质含量的测定 105℃恒重法