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婴幼儿配方奶粉中水溶性维生素的检测方法研究

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婴幼儿配方奶粉中水溶性维生素的检测方法研究婴幼儿配方奶粉中水溶性维生素的检测方法研究 婴幼儿配方奶粉中水溶性维生素的检测方 法研究 《乳业科学与技术》2007年第2期(总第l23塑璺 婴幼儿配方奶粉中水溶性维生素的检测方法研究 雷涛t,张辉t,韩惠雯.,黄菲菲,何亚斌 (1上海市质量监督检验技术研究院,上海200233;2上海市乳品质量监督检验站) 摘要:对国内外婴幼儿配方奶粉中水溶性维生素的检测方法现状进行评述,重点介 绍微生物法,荧光 光度法,高效液相色谱法.对目前存在的问题和今后的分析发展方向提出建议,为 今后水溶性维生素的 分析提供...

婴幼儿配方奶粉中水溶性维生素的检测方法研究
婴幼儿配方奶粉中水溶性维生素的检测方法研究 婴幼儿配方奶粉中水溶性维生素的检测方 法研究 《乳业科学与技术》2007年第2期(总第l23塑璺 婴幼儿配方奶粉中水溶性维生素的检测方法研究 雷涛t,张辉t,韩惠雯.,黄菲菲,何亚斌 (1上海市质量监督检验技术研究院,上海200233;2上海市乳品质量监督检验站) 摘要:对国内外婴幼儿配方奶粉中水溶性维生素的检测方法现状进行评述,重点介 绍微生物法,荧光 光度法,高效液相色谱法.对目前存在的问题和今后的分析发展方向提出 建议 关于小区增设电动车充电建议给教师的建议PDF智慧城市建议书pdf给教师的36条建议下载税则修订调整建议表下载 ,为 今后水溶性维生素的 分析提供参考. 关键词:奶粉;水溶性维生素;检测方法 rOmJ~-:TS252.42文献标识码:B文章编号:1671—5187(2007)02-0081--03 MethodsforDeterminationofWater-solubilityVitamins inMilkPowderforInfant Leirao1.ZhangHui,HanHuiwen,HuangFeifei,HeYabin (1ShanghaiInstitute0fQuilitvInspectionandTechnicalResearch,Shanghai200233,P.R.China; 2TheDairyProductQuilitySuperintenceandInspectionCenterofShanghai) Abstract:Areviewofthepresentstatusofanalysisofmilkpowerforinfantandyoungchildrenwas Dresentedinthispaper,emphasiswasfocusedonmicroorganism,fluorescencespectrometry,high performanceliquidchromatography.Someadvicesweregiventoovercomethedifficultiesinanalysisand thedevelopingtrendofpresentmethodswerediscussed.Thissummarymayoffersomereferencesin theuseofdetectivemethodsfortheanalysisofwatersolubleVitamins. KeyWords:milkpowder;water-solubilityVitamins;anal}rsismethod 维生素是维持机体生命活动过程必不可少的 一 大类有机物质,虽然机体对这一类物质的需要 量相对较小,但却十分重要.婴幼儿配方奶粉中含 有丰富的水溶性维生素,其中一部分来源于这类食 品本身,存在形式十分复杂,多是呈结合态,但其含 量甚微,在热和氧的条件下极其敏感和不稳定,加 工和储存过程中也比较容易损失.另外大部分来源 于加工过程中人工添加的营养强化剂.水溶性维生 素结构差异很大,有些是醇,脂,有些是胺,酸,有些 是酚,醛.为了评价食品标签上标注的成分的准确 性,美国FDA 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 在添加食品中的维生素含量必 须为标签上标注含量的100%或者更多,而原生维 生素产品中的维生素含量必须为标签上标注的 80%或更多,合理的超出部分通常认为是厂家在正 常生产过程中产生,可接受这种结果.我国国家标 准GB10767—1997对婴幼儿配方食品与奶粉中维 生素含量也有明确的规定.Eurol:,eanDirective 2002/46/EC制定了一系列法规,用于检测添加过维 生素的食品中标注的维生素含量.目前我国维生 素检测主要依据的 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 有GB/T5413—1997和GB/ T5009-2003中相关标准,涉及的方法有微生物 法,荧光分光光度法和高效液相色谱法. 收稿日期:2006-12—10 1微生物法 根据某种维生素是某种细菌生长所必需的原 理,以细菌繁殖程度或代谢产物定量该维生素含 量.适用于检测多种衍生物的总和(如总叶酸),是 经典方法.国家标准GB/T5413中维生素Bl2,烟酸 和烟酰胺,叶酸和泛酸测定第一法(仲裁法)均为 等同采用AOAC的方法,为微生物法.微生物方 法检测叶酸是国际官方机构唯一认可的方法. 尽管微生物法灵敏度高,但具有很多局限性. 如整个实验周期长,批次检测结果重复性差,检测 结果误差大.微生物法检测过程中偶然性因素很 多,如样品中含有抗生素或其它抑菌物质,样品中 维生素含量与预期的有所不同而选择了错误稀释 浓度,检测环境中没有达到严格无菌要求等都会 导致实验失败. 国外有些实验室采用试剂盒进行维生素测 定,利用包被有对应各种维生素的特异性微生物 微孔板,试验过程只需将培养基,维生素标准液和 稀释过的样品提取液加入微孔板中,培养后用酶 标仪测定.目前一些维生素检测试剂盒如R— BiopharmAG公司研制开发的VitaFast系列产品 已在国内销售,对水溶性维生素特别是叶酸,维生 素B:的检测具有重要的意义. 82雷涛等:婴幼儿配方奶粉中水溶性维生素的检测方法研究 2荧光分光光度法 利用维生素本身具有的荧光l生,或经过反应 (衍生)后产生荧光物质,在激发波长和发射波长条 件下检测.国家标准GBfI'5413规定了用荧光分光 光度法测定维生素B,B:(第一法)和维生素c. 婴幼儿配方奶粉中维生素C以还原型和氧 化型两种形式存在,且都具有生物效价,平常采用 的滴定法和HPLC法只能测定还原型的维生素 C.在活性炭存在下,可以将抗坏血酸氧化成脱氢 抗坏血酸,用荧光比色法测定的是维生素C的总 量.该方法重复陛好,准确度高. 荧光比色法测定维生素B检测过程烦琐,样 品需要通过已活化的人造沸石柱层析净化以除去 能引起干扰的化合物,然后进行测定.当样品中维 生素B:含量未知时,荧光比色法要经过多次试 验,才能使检测结果(Is—Ib)/(Iss—Is)值在0.66—1.5 之间.将荧光比色法与HPLC法检测结果作比较, 比色法的灵敏度差,准确度也稍差. 3高效液相色谱法 近年来,方法费时,专一性不强的微生物法及 化学法等逐渐被HPLC法所取代.HPLC法已成 为维生素测定分析的主流.HPLC法具有以下突 出特点:(1)操作简便,分离效果好,分析速度快,不 仅适合于多种组份,且可作同分异构体的分离;(2) 灵敏度高,特异性强,常用的检测器有荧光检测器 (FLD),紫外吸收检测器(U,,),检出限达ng水平. 3.1维生素B.,B2和B6 国家标准GB/T5413规定了维生素B,B2和 B6的HPLC测定方法.样品经提取和酶解后,维 生素B:和B可以直接测定.维生素B需要衍生 方可测定.HPLC法可以用紫外检测器,采用相同 的色谱条件同时测定三种维生素,但灵敏度低,对 维生素B,B:和B的不同结构分离效果差.而荧光 检测器分离效果好,灵敏度高,适用于微量测定. 样品中维生素B按GB/T5413.13用热水提 取效果欠佳,可用稀盐酸和维生素B,B:同时提 取,回收率可达90%一102%.稀盐酸高温水解的温 度可以为95—130oC,时间为l5—60rain,温度越 高,时间越短.经高温水解后,样品中淀粉被酸水 解的同时,样品中原生的维生素B,B:和的磷 酸盐大部分转化成非磷酸盐的形式,在pH4.5条 件下,JJ~A.Taka淀粉酶可以将样品中仍以磷酸盐 形式存在的维生素全部转化成非磷酸盐形式(转 化效果见图1,图2). 色谱分离条件均可采用ODSC18柱作为固 Min~$ 图1未使用Taka淀粉酶的婴幼儿配方食品 ?1n'lIes 图2使用Taka淀粉酶的婴幼儿配方食品 定相.硫胺素测定可用甲醇一0.05mol/L乙酸钠溶 液(pH4.5)(45:55)作流动相,荧光检测的激发波 长365nm,发射波长435nm.核黄素测定可用 甲醇一0.05mol/L乙酸钠溶液(pH4.5)(35:65)作流 动相,荧光检测的激发波长440nm,发射波长 520rim.维生素B6测定可用甲醇_0.20~41oo mL辛烷磺酸钠,体积分数为0.25%的三乙胺水溶 液(用乙酸调pH=3.oo)(5:95)作流动相,荧光检测 的激发波长290nm,发射波长395nm. 维生素B经提取和酶解后,也可采用柱后衍 生法测定.固定相采用SupelcoLC一18一DB柱 (250mm×4.6mm,5m),以甲醇一9.0mmol/L KH2PO4(含lg,LC8H20NCl和5.0mmol/L C,H5NaOS)溶液(35:65)作流动相,流速1.0mlJ min.用铁氰化钾的NaOH溶液作柱后衍生剂,流 速0.3mL/min,荧光检测的激发波长368nm,发 射波长440rim. 婴幼儿配方奶粉中天然的维生素B多以吡 哆醛和吡哆胺及它们的磷酸化结合形式存在,作 为营养强化剂使用的维生素B物质一般为盐酸 吡哆醇,三者可以相互转化.维生素B在稀溶液 中对光敏感,样品提取液中相对含量较少的吡哆 醛和吡哆胺分解速度极快,给检测带来一定的麻 烦.如果将样品经盐酸提取后,用Fe:作催化剂, 用乙醛酸将吡哆胺转化成吡哆醛,再用NaBH4将 吡哆醛转化成吡哆醇,然后用HPLC法进行测定, 可以避免吡哆醛和吡哆胺在检测过程中的损失和 复杂的结果计算,且用盐酸吡哆醇一种标准物质, 就可以准确测定样品中维生素B的总量(见图 3,图4). 3.2烟酸,烟酰胺和泛酸 婴幼儿配方奶粉中烟酸含量很低,含有丰富 《乳业科学与技术》2007年第2期(总第123期)83 图3直接测定的婴儿奶粉样品 图4转化后测定的婴儿奶粉样品 (同图3比,色谱条件有调整) 的烟酰胺.烟酰胺易溶于热水,可用热水萃取,利 用烟酰胺对酸碱稳定的性质,可用稀酸在蒸气压 力锅中提取.样品经萃取,沉淀蛋白质后以C18 色谱柱分离,用紫外检测器定量.烟酸,烟酰胺测 定可用0.10g/100mL辛烷磺酸钠,体积分数为 2.0%的异丙醇水溶液(用高氯酸调pH=2.0)一甲醇 (93:7)作流动相,检测波长261rim.泛酸测定可 用0.05mol/LKH2PO(用盐酸调pH=3.0)一乙腈 (90:10)作流动相,检测波长2o0rim. 3.3叶酸 叶酸又称维生素B…是一组化学结构相似, 生化特性相近的化合物统称,是由喋啶,对氨基苯 甲酸和一个或多个谷氨酸结合而成.目前国内外 发表的论文中叶酸的HPLC检测以紫外为主,波 长范围在250—310rim之间,其中固定波长254 rim的紫外检测使用很少,而280rim最普遍. 1991年Hahn等提出了对本身无荧光的叶酸在强 氧化剂如二硫酸钾等的作用下产生荧光物质,从 而可用荧光检测器进行检测.样品前处理常用 60%高氯酸脱脂和去蛋白质.叶酸的二氢或四氢 形式很容易氧化,通常加入维生素C作为抗氧化 剂,样品处理过程应避光进行.色谱柱采用ODS Cl8柱(4.6mmx250mm),柱温4OclC.乙腈_0.O5 mol/LKH2PO4(12:88)作流动相,流速1.0mIJmin. 用0.5%过二硫酸钾溶液作柱后衍生剂,流速0.3 mUmin,反应器温度4O?,荧光检测的激发波长 365rim,发射波长450rim. 3.4维生素Bl2 维生素B.:的化学分析目前还是一个难题, 维生素B-z有3个特征波长,但样品在不经处理 的情况下很难检测.在溶液中钻胺素很容易出现 氰钴胺素,甲钴胺素,羟钴胺素等几种形式共存的 现象.目前国内外维生素B.:的HPLC检测仅限 于基质比较简单的原料,饮料等. 曾有文献报道可以利用液一液分配和使用季 铵盐除去部分干扰物质后,再用固相萃取法(可用 0asisHLB3CC)进一步去除样品中的干扰杂质 并对保健食品中的维生素B.:进行富集后采用紫 外检测器检测,色谱柱采用Shim—PackCLC-ODS (6.0mmx150mm),柱温3O?.乙腈一0.05mol/L KH2PO(13:87)作流动相,流速1.0mUmin.紫外检 测器波长361rim.但由于婴幼儿配方奶粉富含 蛋白质,糖类,脂肪等复杂基质,还没有找到一种 理想的前处理方法.对样品的检测,国际上使用较 多的是微生物原理的试剂盒检测,HPLC法则更 多的使用在对原料的控制过程中. 4展望 简便,快速,准确的分析方法是历来分析工作 者所致力追求的目标.我们现在对水溶性维生素 存在的不同形式和不同生物活性认识的进步,简 单测定总的含量已不能满足需要.婴幼儿配方奶 粉中原生和添加的叶酸,氰钴胺的提取,净化以及 富集方法等样品前处理技术仍是许多国内外实验 室研究的热点.另外,在目前现有的多组分分析技 术的基础上,创建新的流动相体系,解决色谱多组 分分析技术从而实现分析过程快速化是维生素检 测技术的一个发展方向.近几年才有报道的其他 多种方法诸如ELISA,LCMS,毛细管电泳等水溶 性维生素检测方法相信将为维生素的不同组分的 快速分析开拓一条新途径. 参考文献 【1】GB/T5413—1997,婴幼儿配方食品与乳粉通用检验方法. 【2】陈家华,等.现代食品分析新技术【M].北京:化学工业出版社, 2005:169—185. 【3】王绪卿,吴永宁,等.色谱在食品安全分析中的应用【M】.北京: 化学工业出版社.2005:290—293. 【4】高增荣雏生素B6制剂中吡哆醛检测方法的研制们.药物分 析杂志,1989,9(5):287. 【5]岛津扁效液相色谱法冰溶性维生素的分析 培训 焊锡培训资料ppt免费下载焊接培训教程 ppt 下载特设培训下载班长管理培训下载培训时间表下载 教材. 【6】杨大进,等.进口保健食品中维生素检测方法现状及展望们. 中国卫生杂志,2004,16(1):62. 【71吴淑君.预混合饲料及多维中维生素B,B的HPLC检测方 法研究【J】.广东饲料,2002,11(1):38 【8】EN14122,Foodstuffs—DeterminationofviaminB1bvHPLC. 【9】EN14152,Foodstuffs—DeterminationofviaminB2byHPLC. 【10】DDENV14164:2002.Foodstuffs—Determinati0nofviaIllin B6byHPLC. 【11】AOACOfficialMethodsofAnalysis(1984).MICROBIOLOGICAL METHODS,VitaminAssays. 【12】J.M.ROMERAeta1.DeterminationofPant0thenicAcidin infantMilkFormulasbyHighPerformanceLiquid Chromatography[J].JDairySci.,1996,179:523—526.
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