高效液相色谱法测定人体5—氟尿嘧啶血药浓度

高效液相色谱法测定人体5—氟尿嘧啶血药浓度 高效液相色谱法测定人体5—氟尿嘧啶血药 浓度 高效液相色谱法测定人体5一氟尿嘧啶血药浓度 邓斌.任斌,黎曙霞,唐蕾,彭惠霞2.洪晓丹(1.中山基科大学附属第一医院药学部,广州市 510080;2.深圳市宝安区妇幼保犍院.深圳市518000) 中图分类号:R97文献标识码:A文章鳊号:10010408(2002)06—0350O2 摘要:目的:以高娃液相色谱法训定人血浆中5氟尿嘧啶的浓度 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 :用硫酸铵作为蛋白沉淀 齐c,血浆样品用己醢己酯异丙醇 (85:15,V/V)提取,氯气吹干,残留物用流动相瘩解后进样=色谱柱为Diamonsi】C8柱 (4.6mm×150ram,n2).流动相为 0.Olmo]/[KH0(pH55),流速15ml,/min,紫外检测波长267nm,5溴尿嘧啶为内标.鲒果:本法最 低检测浓度为0.025pg/ n)J线性范围为O3—10”g/m],目内RS工_)?5.0%fn一5),目间RSD?115%(n一5):鲒论:本法 简便,灵敏,经济,可作曲5氟 尿嘧啶药代动力学研究时血药浓度的州定方法. 关键词:高嫂液相色谱法;5氟尿嘧嚏;血药浓度 DeterminationoftheConcentrationof5一FluorouraciljuHumanPlasmaWithHPLC I)ENGBin,RENBin,LlShuxia,TANGLei.HONGXiaodan(Dept.ofPharmacy,TheFirstAffiliatedHo s pital,SunYat—SenUniversityofMedicalSciences,Guangzhou510080) PENGHuixia(BaoanMaterna【andChildCareCentre,Shenzhen518000) ABSTRACT:OH『E(rIVE:_r0estabnshaHPLCmethodforthedeterminationof5一fiuorouraci【jnhumanp[as— lt]a.METHODS:ThepLasmasamp】eswereexttactedwithelhy【acetateisopropanol(85:15,V/V)fo[1ow】ngprecipitationof plasmaprotelaswith?onLun2sir】 fate..rhcsolvent,~e-asevaporatedtodrynessunderastre~n2oIn1trogenlhedryextractwas dj【redmm0bLkphaseandthen1njectedLnlotheDiamons)【Cco】 umn(150ram×46ram.5pro)and0.0lmol/LKH2PO4 (pH55)~~e-atakef1asmobilephase.Fhcflowtalc1.5m【/rain,UVdetectionwardengthwas267nm.Theinterna1standard 5_ht-o[3]<】uraci】RESULTs:_rhcthin1ma【detectabledrugcontentratLonnplasmawas0.02g/n1 【.Thecalibratoncurve linearoarangeft-olQ0.3fzg./m【to10~eg/rn】.TheintdayRSD?5.0%(n一 5)andthcLnterdayRSD-%_11.5%(n一 5).CONLUS[ON-Themethodcanbeusedforstudying1hepharmacokineticsandbLoavai】 abi[jtyof5fluorouraci】. KEYW0RDS:HPL【’;】lHOFOUI’aCL1:plasmaconcentFatLono】drug 5氟尿嘧啶(5f[uorouraeil,5Fu)于1957年由Hei— delberger合成,至今仍为临床最常用的抗代谢类抗癌药.5 Fu虽被广泛用于临床,但其在机体内的药代动力学变化个体 差异大因此有必要建立一种简便,易行,灵敏,精确的5Fu 血药浓度监测方法.使用药个体化.为合理用药提供依据 1材料和方法” 时血药浓度平均数值见表2 表2受试者口服两种环孢素制剂的血药浓度监测情况f咖I 2.3药代动力学参数 国产与进13环孢素胶丸药代动力学参数见表3. 表3进口与国产环孢素胶丸药动学参数I?.n=12) 350?Chi?aPharmacy2002Vo[13No6 1.1仪器 高教液相色谱仪(600型低压梯度泵,717型自动进样器, 486型紫外检测器,Millennium色谱工作站,Waters);XW 80A旋涡混合器(上海医科大学仪器厂);高速离心机(美国雅 培公司TDx仪附件);710ApH计(美国OR[ON) 1.2试药 2.4相对生物利用度 赛斯平与新山地明两种胶丸剂的生物利用度参数Auc, lrm…cn经方差分析,均无显着眭差异(P>0.05).上述3个参 数的生物等效性检驰.经对数转换后直接计算,以80%,125% 为等效 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 ,结果双向单侧t检验及95%的置信度证实,赛斯 平与新山地明两种胶丸剂等效(P<005),相对生物利用度为 (97.59?971)% 3讨论 研究结果表明,国产赛斯平胶丸剂与进13新山地明胶丸剂 的药代动力学参数除Ka值有差别外(分别为3.52/h,509/h), 其余参数基本一致(P>0.05).生物利用度的3项主要参数 AUC,1rn…,c|n也一致(P>0.05),且生物等效性P<0.05. 赛斯平完全可替代新山地明在临床应用. 受试期间.大部分受试者在lrn…前,后发生恶心,手心,脚 心发热,发麻,以及胃有烧灼感等不良反应,此时环孢素血药浓 度均在1.30-24O/,g/ml.但4h后,即血药浓度低于1Ogg./ mj,全部受试者均未发生不良反应. 参考文献: 【1】桂常青.郑青山,孙卫民,等.生物利用度等效性检验的对 数值直接计算法【J】.中国临床药理学与治疗杂志,1998, 3(3):203. (收稿日期:20020201 中国药房2002年第l3卷第6期 5一h【纯度>99%.批号:$85894012)和内标5溴尿嘧 啶(5bromouracil.5一Bu.纯度>98%.批号:$23617743)均 由德国默克公司提供;水为重蒸馏水;其余化学试剂均为分析 纯 1.3色谱条件 色谱柱:Diamons[1C柱(4.6ram×150ram.5”Il1);流动 相:001mol/LKHaPO|缓冲液(pH55);流速:15ml/rain;柱 温:25?;检测波长:267nm;进样鼍:lI. 1.4标准溶液的配制 标准储备液:精密称取5Fu标准品50mg.加蒸馏水溶 解成lmg/ml标准储备液. 内标溶液:精密称取5Bul00mg,用少量二甲亚砜 (I)MSO)溶液使其溶解.加蒸馏水稀释成401*g/ml内标溶液 1.5血液样品预处理 取血样2m1.2500r/mln离心10rain.取上层血浆0.25m1 置于15ml具塞离心管中.加入25~,1内标溶液(40Fg/m1),旋 涡混匀30s.加150rag硫酸铵固体,旋涡混匀lmin.1080Or/ rain离心5rain后加入900>1乙酸乙酯异丙醇(85:15,V/ v),旋涡混匀3min,10800r/min离心15min,取上层有机层于 另一离心管中,常温下氮气欢干.残留物加入100>1流动相,旋 涡混匀lmin使其溶解,10800r/min离心J0min后取上清液l【 进样 2结果 2.1色谱行为 血浆中的内源性杂质在上述色谱条件下对5,Fu与内标 物的测定无干扰,5一Fu与内标物能达到基线分离,其保留时 间分别为3.7rain和10.3min,色谱分离在15min内完成,色谱 图见图1. l l010.0020.001010002000 A:空白血浆H:血浆样品l:5一Fu峰2:内标峰 图15一FuHPLc色谱图 2.2标准曲线的绘制及线性范围 分别精密量取5一Fu标准储备液(1mg/m[)适量,置于1Oml 容量瓶中,加蒸馏水至刻度.得7.,125,25,5O,125,250#g/ m1系列溶液. 取空白人血浆0.25ml加入101.[5Fu系列溶液,旋涡混 匀30s,使5Fu的血药浓度分别为0.3,05,1,25,10>g/ m【.血液样品预处理后,按色谱条件进样 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 色谱图,5Fu 峰面积(As)与内标峰面积(Ai)=以峰面积比(R,R—As/Ai) 为横坐标,药物血药浓度(C)为纵坐标进行回归.得回归方程 中国药房2002年第l卷第6期 C:3.1569R一0.0444.r一0.9999(fl:6).结果表明,5 Fu在0.3,10ttg/tTd的浓度范嗣内线性关系良好一本法最低检 测限为0025(S/\一:),,g/’inI31 2.3回收率与精密度 在().25ml空白血浆中分别加Al研f低,中,高浓度的5 Fu标准溶液,旋涡混匀30s使5Fu浓度分别为0.5,2, 10/,g/ml的血浆样品按血样提取和测定的方法计算血药浓 度.删定值与加入值之比计算回收率.隔13同法测定.汁算日 内与日间(5d)精密度,结果见表1 表1回收率与精密度实验结果{n=6 3讨论 3.1流动相与pH的选择 色谱法试验了多种比例的甲醇一KH0溶液系统(比例 分别为2:98,8:92,5:95,3070.V/v)作为流动相.但分 离效果均不理想.在单独使用浓度分别为0.01和0.05tool/1, 的KH0时,色谱峰形得以改善.且两种浓度的溶液对色谱 峰影响无明显差别.但浓度大的磷酸盐易析出结晶堵塞色谱 柱,故选用00lrnol/LKHPO作为流动相. 本实验考察了pH值分别为30,40,5.5和7.0的001tool/ LKH~PO溶液对药物和内标峰形的影响,结果显示.pH55 时的峰形最佳一 3.2色谱柱的选择 本实验试用了SpherisorbODS_l,Diamonsi[CmNa eleos[1100一SGHypcrsi[BDSCmHypersilODSI1等型号 的色谱柱,结果是使用Diamonsi[C柱时杂质对5Fu和内 标影响最小.5Fu和内标峰均为单峰且拖尾不明显.故选用 该色谱柱测定. 3.3稳定性考察 血浆样品预处理中多次使用高速离一机离心样品取患者 血样分别在常温高速离心机和高速冷冻离心机条件下操作,同 法测定:结果,峰面积比无显着性差异.说明常温离心条件不影 响5一Fu的稳定眭.5一Fu标准储备液置冰箱中(2?,8?)冷 藏,3too中连续使用多次5一Fu的峰面积无明显差异,说明 5一Fu的稳定性好. 参考文献: 【1】EGameIin,MBoisdronCelle.Rapidandsensilivehigh performanceliquidchromatographicanalysisofhaloge- nopyrimidinesinplasma[J】.journalofChromatography B,1997,695:409. f2】MJouIiaFPinguet,PYGrosse,eta1.Determinationof 5一f[uorouraci【anditsmai13metabobiitesinplasmaby high—performanceliquidchromatography:Appllcation toapharamacokineticstudy[J】JournalofChromatog raphyB,1997,692:427. (收稿日期;2001—1029修回日期:20(I卜1}18) ChinaPharmacy2002Vo[13No6351