【doc】LHRH和三种LHRH—A对人早孕黄体分泌孕酮的体外作用
LHRH和三种LHRH—A对人早孕黄体分
泌孕酮的体外作用
上海医科大学17卷
度为1:25000;1,2,67一日_-孕酮中科院上海生化所提供;L]~RH和三种LHRH-A由 中科院有机所提供:HPL~纯结构式见
表
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1;haG上海生化制药厂产品. 人早孕黄体细胞悬液的割备及培养根据印er等方法略加改变.人早孕黄体 (6—8周)由上海国际妇婴保健院提供取自非园分泌系统疾病而行子宫切除病人的早孕
黄体.手术取出的黄体立即贮于oN4.a的RPMI?1640培养液中于1h内用Hanks 液洗去血块,在解剖镜下分离去除周臣结缔组织和血管,用眼科剪刀剪碎(0.1N0.3 ram)加入5—1O倍体积的胶原酶和DNA酶的混台酶液(2mg/ml的胶原酶:25~g/ml 的DlqA.酶为1-I)消化1每隔10—15min用玻璃吸管反复抽吸吹打1m扭以促进细
胞分散.消化结束,用尼龙网过滤以除去未被消化的残存组织碎片.细胞悬液经l50Or/
mi?离心lOmi~,小心弃去上清液加入5~10m/RPMI?1640培养液(不含小牛血清) 充分悬浮细胞,再次1500r/ram离心10nxin.弃去上清液.加入37.a预温的RPMI?1640
培养液,用吸管充分悬浮细胞显微镜下计数,调节细胞浓度为10./ml细胞悬液.用苔盼
蓝染色排除法计数成活细胞率.每次成活率在7O%以上.将稀释好的细胞悬液加到预
先已加有一定量的hOG和LHRH-A的试管中,于37.a6茄O培养箱中培养5h.培 养结束3000r/mi】1离心~Omm取上清液贮于一30.O冰箱中保存.用放射免疫法 (RZA)测定上清液中孕酮的含量.
孕酮的mA测定所用抗体最终稀释度为1:25000,标准曲线线性范围为126— 40001~g',批间变异系数为8—1O,每蒎测定的批内变异系数为1.1N2.6.
结果与讨论
hGG对孕酮分泌的兴奋作ffl如表2所示体外培养的早孕黄体细胞在外源性的 hCG作用下可分泌孕酮孕酮分泌的量随着外源性hCG的量的增加面增加.这
说明
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用本
实验室改良的酶解法所制备的黄体细胞悬液在体外作短期培养对成活情况良好. 表2hcG对再孕妇早孕黄悻细胞分鞋孕酮曲拦奋作用
每个浓度为5个复管培养
LHRH-A对两种不同浓度hOG诱导孕酮分泌的影响如表34所示.当以IU/ na]的hCO为孕酮分泌的兴奋剂结果发现10一mo]/L的LHRH和三种LHR]~一A对
孕酮的分泌有一定的抑制作用,其中LHRH—A(3)的抑制作用为最强.对孕酮分泌的抑
制率为19-19弼.P一0.O5(表3).当以5o2u/m]的hCO作用孕酮分泌的刺激剂当加
1期LHRH和三种LI:tRt:t-A.对人早孕黄体分泌孕酮的体外作用13 '与对照比较-经{幢验P-O.05.
表4LHRH耷LHRH?A对高浓度hCG蒋导孕吾i舟瓣的影响
入10md/L的LHRH和三种LHRH-A后,对孕酮分泌的抑制作用较hOG为1IU/ml 时大为减弱(表4).
文献报道,在黄体早期或中期经鼻内或皮下给予LHRH-A后,可以产生溶黄体作 用,表现为血孕酮和雌二醇水平降低,黄体期缩短,但对其溶黄体作用的机理不清. Cer等用妇女月经周期中黄体早期和中期的黄体细胞作短期(4h)和长斯(144h)体外
培养实验,发现LHRH和LHRH-A对人黄体细胞无作用.与这个发现较一致的是认 为人的卵巢组织中缺乏LHRH-A的特异性受体.但也有少数作者的结论与其相反认为
LHRH-A对人黄体有很弱的直接作用,黄体组织中有低亲和力的L?R?受体.本文用
对离体培养的大鼠黄体细胞分泌孕酮有较强抑制作用的三种LHRH-A及L?RH,
首次
观察了它们对人早孕黄体细胞bc5G诱导孕酮分泌的影响.结果显示,L?R?—A对人早
孕黄体细胞分泌孕酮,有一个微弱的直接抑制作用,此作用可被大剂量的hoG所部分拮
抗.临床上也有报道,在月经黄体期使用大剂量的LHRH或LHR?一A后所致的血浆孕
酮水平降低,黄体期缩短及溶黄体作用,均可被外源性的haG所拮抗. 目前普遍认为,LHRH和LHR?一A对大鼠黄体细胞的直接作用,是通过黄体细胞 膜上的LHRH特异性受体所介导的但LHRH和LHRtt-A对人早孕黄体细胞的微 弱直接作用,是否也是通过LHRH受体所介导,难作推论.根据我们的韧步实验,结合其
他作者的报道,我们认为不论LHRH-A对人早孕黄体细胞的作用与其对大鼠黄体细
胞的直接作用有无相似之处,LHRH和LHRH-A在早孕妇女引起血浆孕酮水平的改
变,可能有其他作用途径面远非垂体外直接作甩予早孕黄体的结果.这可能与LHRH
和LHRH—A对大鼠抗生育作用的机理有所不同.
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参考文馘
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(收稿日期:1989年5月l0日)
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