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还原糖含量测定 DNS 还原糖含量测定.doc

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上传者: 吕神识 2017-10-16 评分 0 0 0 0 0 0 暂无简介 简介 举报

简介:本文档为《还原糖含量测定 DNS 还原糖含量测定doc》,可适用于综合领域,主题内容包含还原糖含量测定DNS还原糖含量测定还原糖含量测定(砷钼酸比色法)关键词:还原糖含量测定砷钼酸比色法一、目的植物体内的还原糖主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖符等。

还原糖含量测定DNS还原糖含量测定还原糖含量测定(砷钼酸比色法)关键词:还原糖含量测定砷钼酸比色法一、目的植物体内的还原糖主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。它们在植物体内的分布不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况而且也是合成其它成分碳架来源和呼吸作用的基质。此外水果、蔬菜中含糖量的多少也是鉴定其品质的重要指标。其它碳水化合物如淀粉、蔗糖等经水解也生成还原糖。因此测定还原糖的方法在研究植物体内生理生化变化和测定植物体内碳水化合物方面都是很重要的。二、原理还原糖是具有羰基(>C=O)的糖能将其它物质还原而其本身被氧化。()还原糖在碱性条件及有酒石酸钾钠存在下加热可以定量地还原二价铜离子为一价铜离子产生砖红色的氧化亚铜沉淀其本身被氧化。具体反应如下:()氧化亚铜在酸性条件下可将钼酸铵还原还原型的钼酸铵再与砷酸氢二钠起作用生成一种蓝色复合砷钼蓝其颜色深浅在一定范围内与还原糖的含量(即被还原的CuO量)成正比用标准葡萄糖与砷钼酸作用比色后做标准就可测得样品还原糖含量。三、实验材料、主要仪器和试剂实验材料、实验材料实验材料苹果、面粉等。主要仪器主要仪器()分光光度计()水浴锅()具塞刻度试管:mL()刻度吸管:mLmLmL()容量瓶:mL()漏斗()研钵试剂试剂()铜试剂:A、CuSOHO。B、称取g无水碳酸钠用mL水溶于大烧杯中加入g含分子结晶水的酒石酸钾钠待全溶(应加热)后加入碳酸氢钠g再加入g无水硫酸钠(加热)全溶及冷却后加水至mL沉淀d取上清液(要求严格时过滤)备用。使用前将A与B按混匀即可使用。()砷钼酸试剂:g钼酸铵(NH)MoOHO溶于mL蒸馏水中(加热溶解但温度接近时易分解)待冷却后再加入mL浓HSO混匀。另将g砷酸氢二钠(NaHAsOHO)溶解于mL蒸馏水中然后加到钼酸铵溶液中室温下放置于棕色瓶中可长期使用。()µgmL标准葡萄糖原液:准确称取分析纯葡萄糖mg溶解定容到mL。四、操作步骤标准曲线的制作:标准曲线的制作:标准曲线的制作在一系列刻度试管中分别加入µgmL标准葡萄糖、、、、、及mL再顺序加入蒸馏水、、、、、及mL配成浓度分别为、、、、、及µgmL的系列葡萄糖溶液。每试管加入铜试剂mL混匀后沸水浴中加热min立即冷却再加入mL砷钼酸试剂振荡两分钟后稀释到mL,用分光光度计在nm波长下比色测其光密度ODnm(做一式两份)。以糖浓度微克数为横坐标光密度ODnm为纵坐标绘制标准曲线。植物样品中还原糖的提取:植物样品中还原糖的提取:植物样品中还原糖的提取将样品洗净吸干其表面水分切碎混匀称取g放入研钵中加入约g石英砂磨成匀浆加水将样品由玻璃漏斗冲入mL容量瓶中加水达mL摇匀后置于恒温水浴上浸提h。待上述样品冷却后沉淀蛋白质加入硫酸锌mL再慢慢滴入molLBa(OH)mL以沉淀蛋白质。振荡后静置至上层出现清液后再加一滴Ba(OH),直至无白色沉淀时向容量瓶加水至刻度。还原糖含量的测定:还原糖含量的测定:还原糖含量的测定过滤上述已定容的样品液取mL滤液再定容到mL(此步视样品的含糖量而定)。取已稀释的溶液mL与标准葡萄糖显色法相同:加铜试剂mL煮沸min加砷钼酸试剂mL振荡mL定容到mlnm波长下比色记下光密度ODnm(至少重复两次)。五结果计算式中:G从标准曲线上查得含糖量(µg)W样品重(g)百度搜索“就爱阅读”,专业资料,生活学习,尽在就爱阅读网tocom,您的在线图书馆

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