长春周边地区猪PRRSV呼吸征病毒流行病学概述.doc

长春周边地区猪PRRSV呼吸征病毒流行病学概述.doc 长春周边地区猪PRRSV呼吸征病毒流行病学概述 -->前 言 PRRS从首次发现到现在已有23年，但尚未找到有效的决治疗方案，欧美国家通过直接扑杀的 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 来净化此病，中国自2006年出现 PRRS的变异毒株以来，给我国的养猪业造成了很大的影响，不分性别，不分日龄段的猪只均被感染，发病率达到100%，仔猪死亡率达到50%-80%，母猪流产率提高3成，而且存活下来的猪只愈后不良，生长缓慢，出栏时间延迟，抵抗力差容易继发其它病原体;PRRS隐性感染、持续感染和非典型化，增大了诊断难度。目前全国各地都分离到了HP- PRRS，表明HP- PRRS已经在全中国流行，更加大了HP- PRRS的预防与防控。 本文通过对长春市及其周边地区 PRRSV 的流行情况进行分时间、分地区的调查，并以检测该病毒在某段基因序列为切入点，着眼于病毒的遗传变异研究，将对病毒的流行规律和病毒的变异规律有更进一步的了解。进行了分子流行病学调查，研究病毒的变异规律、变异幅度和变异范围，能较全面反映长春市及其周边地区PRRSV 序列变异的情况，丰富我国 PRRSV 的分子流行病学资料，进而为长春市 PRRS的防制提供一定的理论依据。 第一部分 文献综述 1、 概述 猪繁殖与呼吸综合征 (PRRS)是一种严重危害养猪业的传染病。以妊娠母猪晚期流产、早产、产死胎、弱胎、木乃伊胎等繁殖障碍及仔猪与育肥猪的呼吸困难为特征的一种传染病繁殖与呼吸综合征，首次发现于上世纪八十年代末(Keffaber 等，1989)，死亡率可达 30,甚至 100%;因其临床上常以感染猪只的可视黏膜例如耳部、吻突处发绀为特点，所以俗称“蓝耳病”(Blue-ear Disease)。中国在 1995 年发现可疑 PRRS。在 2006 年大流行的猪高热病，根据调查结果显示，本病的病原是 PRRSV。引起该病的致病原为 PRRSV的变异毒株，以 JX-AI 株为代表，通过流行病学分析发现主要特征是PRRSV 的非结构蛋白 NSP2 不连续缺失 30 个氨基酸的变化(Li Y, 蛋白，GP5 蛋白、GP2 蛋白和 GP4 蛋白。RNA 基因组全长 15KB。 PRRSV 对氯仿、乙醚等脂溶剂敏感。在蔗糖和氯化铯密度梯度中，浮密度分别为 1.13-1.19g/cm3和 1.18- 1.23g/cm3。RRSV 对高温敏感，50?45min 和 37?48 小时可使病毒失去感染性，低温下-20?和-70?PRRSV 具有较好的稳定性;PRRSV 在 PH6.5-7.5 之间相对稳定，PH 值低于 5 或高于 7 时，感染力很快消失。PRRSV 对宿主的要求很严格，在原代和传代细胞上 PRRSV 生长都不良好。但 细胞上，生长良好，而且病毒的数量和病毒的感染性都很高(C)、单核细胞(PBM)和小胶质细胞的某些亚群有严格的限制性嗜性，这些细胞的分化和活化状态显著影响其易感性，其中肺泡巨噬细胞是首选的增殖系统。基于这一特性而建立的病毒分离方法是较可靠的诊断手段(Duan X，1997)。 2.2 病毒基因结构特点及编码蛋白 PRRSV 有 2 种基因型，即欧洲型(A 亚群)和美洲型(B 亚群)。Lelystad 病毒的是欧洲型的代表株，ATCC VR-2332 株为美洲型的代图 PRRSV 病毒粒子 Fig1. Electron micrographs of purified PRRSV particles表株。这 2 种基因型在抗原上有很大的不同点，但是欧洲型血清与美洲型的血清有一定的交互反应，但反过来是不成立的。PRRSV 基因和抗原在分型是差不多相同的(，N。开放阅读框 ORF2、ORF3、ORF24 和 ORF5 主要是编码病毒的糖基化蛋白，ORF6 编码 Membrane matrix protein，ORF7 编 码 核 衣 壳 蛋 白( Snijder,1995,Meulenberg et al, 1995;Dreeulenberg et al,1996;Wassenaar,1997;Dea, 2000b,Shen,2000;Wu,2001)。在上面的那些非结构蛋白当中，在阅读框 ORF1a 中的 NSP2 区最容易发生一些突变的(Allende,1999;Grebennikova,2004)，PRRSV 毒株长度与 NSP2中的氨基酸缺失是有很大关系的，表现在分离的不同毒株上。这 2 个基因组全长能占到八成(整个基因组为 15KB)，我国在 07 年发现的高致病性毒株就是由于 NSP2 的突变造成的毒力增强，后来研究表明是氨基酸缺失(宁宜宝等,2007) ........... -->r />第二部分 研究内容...........23 第一章 长春市及其周边地区 PRRS 流行病学调查.........23 1 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 ......... 23 2 方法........ 26 3 结果......... 27 4 讨论........ 32 5 小结........ 34 第二章 长春市及其周边地区 HP-PRRS 分子流行病学调查 ...35 1 材料........ 35 2 方法.......... 36 3 结果与分析........ 41 3.1 NSP2 部分基因扩增结果 ........ 41 3.2 基因序列分析........ 41 4 小结......... 46 讨论 2006 年，PRRS 变异株的出现，导致全国大部分省份爆发了HP-PRRS，其传染率和病死率特别高，造成了很大的经济损失，本次我们在长春市及其周边地区共计 193 头病死猪样品进行了流行病学调查，具有持续性和广范围性，填补吉林省这块空白，了解长春市及周边地区的流行状态;我们发现传播的主因是已经感染 PRRS 的猪只必须进行焚烧或者深埋，减少病毒四处传播;还有猪场外购猪只或者引种，把病毒带进了猪场，感染了健康猪群，从我们调查来看，这种因素导致疾病的传播能占到了 70%。另一方面，对运输车辆必须进行彻底消毒处理，减少猪场之间病毒的流通传播，从而能保护健康猪群;还有须消灭蚊蝇等吸血昆虫，因为蚊蝇直接接触了已经感染 PRRSV的猪只，当到达另一个猪场，蚊蝇便飞进此猪场，在吸取血液的过程中，把携带的病毒传播到健康猪只身上，导致其感染并传播。 猪场日常管理和卫生条件的不完善，人员的四处流动，也为传播病毒提供了条件。不同地区 PRRSV 感染情况 本实验从 2009 年 6 月到 2010 年 12 月长春、吉林、松原、四平、白山、辽源、白城、延边共 8 个地区疑似 PRRS 病死猪和死胎，共计193 头份，进行了 RT-PCR 反应检验，发现长春市及周边地区都感染了 PRRS，最严重的地区为松原，被检测样品阳性率达到了 70.59%，其次为长春和四平这 2 个地区，均超过了一半的感染率，表明这 3 个地区已经成流行性了，净化难度很大。这 193 份样品中，综合检出率为 48.70%，接近一半，长春市及周边地区的猪场已经有一半感染了PRRS，说明病毒的传染率十分高，这对我们的防控提出了严峻的挑战。从进化树看出，本试验测得的毒株与国内变异代表株 JAX1 同源性很高，如JX5、JLYS、SD7、HQ6 等都有很高的同源性，表明它们遗传关系都很近，有共同的属源。同我国 PRRS 经典代表株 CH-1a 属于同一分支;与美洲代表株 VR2332属于同一分支，表明测得的毒株与 VR2332 株为一个亚群。与毒株 LV 和 HB2差异性还是比较远的。从整体上看，我国大部分 HP-PRRSV 毒株和我们测得的毒株都属于一个亚群，表明地域性差异性不是很大，在长春市及周边地区中测得的 HP-PRRSV 毒株差异性也是有的，但是不是很大，可能与当地与其他省份频繁交易有关。 ...... 结 论 本课题在 2009 年 6 月到 2010 年 12 月期间对长春及周边地区 193 头份病死猪进行了流行病学调查，填补了长春及周边地区 PRRS 流行病学调查的空白，并得出以下结论: 1、长春及周边地区 PRRS 感染已经普遍存在，以 HP-PRRSV 感染为主，辅以少量经典 PRRSV 感染; 2、在这被调查的 19 个月中，以春秋感染最为严重;不过 HP-PRRS 与经典型 PRRS 感染率均呈下降趋势; 3、通过对 NSP2 蛋白序列分析，被调查地区没有明确的地域性，但存在一定的差异性，并非源自同一种，说明长春市及周边地区流行的 HP-PRRS 广泛。