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-反相高效液相色谱法测定吸入用异丙托溴铵溶液的含量
作者:卢来春,张蓉,刘同华,蒋学文
目的: 采用反相高效液相色谱法测定吸入用异丙托溴铵溶液的含量。
方法: 色谱柱为 phenomenexC8 (4.6 mm×250 mm, 5 μm0.25%庚烷磺酸钠溶液(29?71)用磷酸调pH值至3.2;检测波长为210 nm;流速为1.0 mL/min;进样量20 μL。结果:异丙托溴铵在12.8~256 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9995,日间、日内RSD均小于1.5%。结论:本方法准确可靠,可用于吸入用异丙托溴铵溶液的质量
控制
异丙托溴铵;含量测定;高效液相色谱法 异丙托溴铵是一种具有抗胆碱能特性的四价铵化合物,可竞争性抑制乙酰胆碱对
气道平滑肌的收缩作用。通过抑制细胞内cGMP生成,减少cAMP降解,降低细胞内钙离子浓度,使气道平滑肌松弛,肥大细胞释放炎性介质下降,终止气道扩张,
呼吸阻力减小。吸入异丙托溴铵后,作用只限于肺部扩张支气管,而不作用于全
身,主要采用气雾吸入给药[1]。吸入用异丙托溴铵溶液在临床上应用较广泛,
主要采用压缩雾化吸入或超声雾化吸入给药,常用于预防和治疗儿童支气管哮喘。
本文考察了异丙托溴铵含量的HPLC测定方法,为制剂的质量控制提供了方法学
依据。
1 仪器与材料
LC10ATvp高效液相色谱仪(日本岛津公司);异丙托溴铵对照品(购自
浙江优联医药化工有限公司,经精制后色谱峰为单峰);吸入用异丙托溴铵溶液
(爱全乐)购自德国勃林格殷格翰国际公司(批号638066,规格为含异丙托溴铵2 mL?500 μg);庚烷磺酸钠为离子对色谱试剂,纯度?99%,购自上海亿日化工科技有限公司;乙腈为色谱纯;其它试剂为分析纯。
2 含量测定
2.1 色谱条件
参照文献[24],选定试验条件为:C8色谱柱(phenomenexC8 5 μm,4.6 mm×250 mm0.25%庚烷磺酸钠溶液(29?71)用磷酸调pH至3.2;检测波长为210 nm;流速为1.0 mL/min;进样量20 μL。
2.2 对照品贮备液的制备
精密称取在五氧化二磷干燥器中减压干燥24 h的异丙托溴铵对照品12.80 mg,精密称定,置10.0 mL量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,制成浓
度为1.28 mg/mL的异丙托溴铵对照品液,备用。
2.3 供试品溶液的制备
取本品15瓶,合并内容物,混匀,精密量取10 mL,置50 mL量瓶中,加0.001 mol/L1?1)稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。
2.4 系统适应性试验
取溴化钾适量,用流动相溶液溶解制成溴化钾溶液。精密吸取溴化钾溶液、
“2.2”、“2.3”项下溶液适量,分别按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录
色谱图,详见图1。由图1可知,与异丙托溴铵对照品比较,供试品异丙托溴铵
色谱峰分离良好,符合高效液相色谱法的
要求
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,且溴离子不影响本品含量测定。
异丙托溴铵的出峰时间约在22 min。
2.5 最低检测限和最低定量限
取异丙托溴铵对照品适量,精密称定,加溶剂溶解并稀释制成供试液,按上
述色谱条件取10 μL进样。经试验,当进样浓度为0.3 μg/mL时,信噪比为3?1,即最低检测限为0.3 μg/mL×10 μL=3 ng;当进样浓度为1.1 μg/mL时,信噪比为10?1,即最低检测限为1.1 μg/mL×10 μL=11 ng。
2.6 线性范围考察
取对照品储备液,分别精密吸取0.1、0.2、0.4、0.8、2.0 mL,置10 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,得浓度依次为12.8、25.6、51.2、102.4、256 μg/mL的系列标准溶液。照上述色谱条件,进样20 μL,以样品浓度C为横坐标,峰面积A为纵坐标,绘制标准曲线,计算得回归方程为:
A=5900.864C+16415,r=0.9995,线性范围为12.8~
256 μg/mL。
2.7 精密度试验
分别取12.8、51.2、2560 μg/mL三种浓度的对照品溶液,于1 d内分别进样5次及5 d内分别进样5次,分别计算日内、日间RSD。结果见表1。表1 精密度试验结果(略)
2.8 样品溶液稳定性试验
取批号为638066的样品,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,在12 h内每隔3 h进样测定1次,测得RSD为1.30%,表明在12 h内样品溶液稳定性较好。
2.9 重复性试验
取批号为638066的样品,按“2.3”项下方法平行制备5份供试品溶液,分别进样,测得RSD为1.03%,表明该法重复性较好。
2.10 回收率试验
取异丙托溴铵对照品约16 mg、20 mg和24 mg各三份,精密称定,按处方
比例加入空白辅料适量,按“2.1”项下色谱条件进样测定含量,计算回收率,
结果见表2。表2 回收率试验结果(略)
2.11 样品含量测定
取批号为638066样品,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,依法测定,样
品含量测定结果为98.8%。
3 讨论
异丙托溴铵为溴化季铵盐,在溶液状态下,其溴以离子形式存在[3],在210 nm处有一定紫外吸收。为验证该测定方法溴离子的存在不影响异丙托溴铵
的含量测定,故选定溴化钾进行了试验。试验表明,采用该测定方法,溴离子不
干扰异丙托溴铵的含量测定。流动相采用等度洗脱系统,用二极管阵列检测器测
定异丙托溴铵对照品的峰纯度大于99.8%,表明主峰为单一峰,在210~400 nm波长扫描,未漏检杂质峰。异丙托溴铵浓度在12.8~256.0 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。
本方法灵敏度高,方法准确,重复性好,且操作简单,可用于吸入用异丙托
溴铵溶液的质量控制。
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