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赤潮藻类营养盐限制方程的非线性动力学研究

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赤潮藻类营养盐限制方程的非线性动力学研究赤潮藻类营养盐限制方程的非线性动力学研究 第 38 卷 第 6 期卫 生 研 究Vol . 38 No . JOURNAL OF HYGIENE RESEARCH Nov. 2009 2009 年 11 月 () 〃论文章编号 :100028020 20090620653204 赤潮藻溶血活性测定标准的建立 1 2 彭颖慧 刘洁生 李宏业 黄展超 李秀琴杨维东 暨南大学生命科学技术学院 , 广州 510632 摘要 :目的 探讨溶血毒素活性测定的标准化 。方法 以溶血毒素产生藻 ———海洋卡盾藻为材料 ,在...

赤潮藻类营养盐限制方程的非线性动力学研究
赤潮藻类营养盐限制方程的非线性动力学研究 第 38 卷 第 6 期卫 生 研 究Vol . 38 No . JOURNAL OF HYGIENE RESEARCH Nov. 2009 2009 年 11 月 () 〃论文章编号 :100028020 20090620653204 赤潮藻溶血活性测定 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 的建立 1 2 彭颖慧 刘洁生 李宏业 黄展超 李秀琴杨维东 暨南大学生命科学技术学院 , 广州 510632 摘要 :目的 探讨溶血毒素活性测定的标准化 。 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 以溶血毒素产生藻 ———海洋卡盾藻为材料 ,在系 统分析和考查超声波细胞破碎法和液氮研磨法 、不同减压蒸馏温度 、不同来源红细胞及样品保存时间和温度 等对溶血毒素活性影响的基础上 ,提出海洋卡盾藻溶血毒素及活性的提取 、测定最优化方法 。结果 超声波 细胞破碎法和液氮研磨法得到的溶血活性分别为 288123 和 94189HUΠL ; 超声时间分别为 5 、10 、20 和 30min 时 ,测得溶血活性分别为 80157 、157145 、288123 和 279117HUΠL ;减压蒸馏温度分别为 40 、60 和 80 ?时 ,溶血活 性为 288123 、124197 和 120168HUΠL 。分别选择兔 、昆明鼠 、花身 和人的红细胞作为底物 ,测定等量毒素的溶 血活性 ,测得溶血活性分别为 244198 、288123 、266135 和 195147HUΠL ;将离心后的藻细胞分别于 0 、20 和 - 20 ? 保存 1 、3 和 7 天 ,藻 细 胞 的 溶 血 活 性 随 时 间 延 长 逐 渐 降 低 。结 论 超 声 波 为 最 佳 藻 细 胞 破 碎 法 ; 功 率 为 200W 时 ,超声时间以 20min 为宜 ;蒸馏温度应保持在 40 ?左右 ; 兔红细胞对溶血毒素最为敏感 。实际测定 时 ,最好选择 5 %兔血红细胞 ;藻类样品在 0 ?下最多可保存 3 天 。 关键词 :海洋卡盾藻 溶血毒素 测定标准 中图分类号 : R99416 Q94912 文献标识码 :B Studies on perf ormance standard f or hemolytic toxins in harmf ul bloom algae PENG Yinghui , L IU Jiesheng , L I Hongye , HUANG Zhanchao , L I Xiuqin , YANG Weidong School of Life Science and Technology , Jinan University , Guangzhou 510632 , China Abstract : Objective To explore a performance standard for hemolytic toxins in harmful bloom algae . Methods Using Chattonella marina as hemolytic substances producing organism , methods and conditions were compared and optimized including cell breakage , distillation temperature , blood origin and storage of algal pellets in extraction and activity determination of hemolytic toxins. Results The hemolytic activity of C. marina broken by supersonic method was () 288123 HUΠL , higher than that by freezing - thawing method 94189 HUΠL, suggesting that supersonic method could be more optimal to break microalgal cells. When the supersonic treatment times were 5 , 10 , 20 and 30min , the hemolytic activities were 80157 , 157145 , 288123 and 279117HUΠL , respectively , indicating that 20min of supersonic treatment was suitable. When the distillation temperature were 40 , 60 and 80 ?, the hemolytic activities were 288123 , 124197 and 120168HUΠL , respectively , meaning that high distillation temperature in extraction of hemolytic substances lowed the hemolytic activities of samples. Bloods from various animals such as human , fish , rat and rabbit exhibited different sensitivity to the hemolytic toxins , of which rabbit erythrocyte was the most sensitive . The hemolytic activities to human , fish , rat and rabbit were 244198 , 288123 , 266135 and 195147HUΠL , respectively. The storage of algal pellets for 3 days at the temperature of 0 ? did not reveal a significant loss in hemolytic activity , while significant losses were observed at the temperature of 20 ?or - 20 ?only after one day. Conclusion Supersonic method could be more optimal to break cell in comparison with freeze2thaw method. Optimal conditions for broken algal cells by supersonic method were 200 W for 20min at the temperature of 4 ?. The distillation temperature in extraction of hemolytic substances should be maintained under the temperature of 40 ?. The rabbit erythrocyte could be the most optimal blood to detect hemolytic activity due to its high sensitivity. The algal pellets could be kept at the temperature of 0 ?for 3 days before determination of activity. Key words : Chattonella marina , hemolytic toxin , performance standard () ()基金项目 :国家自然科学基金2广东省联合基金重点项目 No . U0733006;国家自然科学基金 No . 30970502 1 近年来 ,随着近海富营养化问 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 的加剧 ,有害赤潮发生的,分别采用液氮研磨和超声波两种方法破碎藻细胞 。细胞 2( 频率和规模呈现明显增加趋势 。有害赤潮的危害形式 主 要 11411 超声波破碎法 加入氯仿?甲醇?水 体积比 13?7? ) 有 :产生贝类毒素通过食物链使其它动物和人类中毒甚至死 5的混 合 溶 液 于 收 集 的 藻 细 胞 中 , 用 超 声 波 细 胞 破 碎 仪 于 亡 ,危害人类健康 ;赤潮鱼毒素对养殖生物造成直接危害导致200W、4 ?破碎 5 、10 、20 或 30min ,静臵 ,待完全分层后取下层 其死亡 ,引起海产养殖业直接的经济损失 ;对生态系统造成严 ( 溶液 ,用旋转蒸发仪去除溶剂后溶于 1ml 甲醇中 甲醇与培养 ) 重破坏 。在这些危害中 ,对海产养殖破坏最大 、造成直接经济 基的比为 1Π100。 损失最多是鱼毒性赤潮 。 11412 液氮研磨法 将收集的藻细胞直接倒入液氮中研磨 , 鱼毒性赤潮赤潮导致鱼类死亡的原因很多 ,其中溶血毒 再加上述混合溶液 ,提取溶血毒素 。2素被认为是导致鱼类大范围死亡的重要原因 。溶血毒素可能 115 溶血活性的测定 作用于鱼类的鳃组织 ,导致鳃组织损伤引起氧气交换不顺畅( ) μ 以洋地黄皂甙 digitonin为标准物质 ,将其配臵成 10gΠml1 ,2 而引起死亡 。因此 ,溶血毒素的测定对于正确评价鱼毒性 的母液保存于 4 ?冰箱 ,分别量取 011 、0115 、0120 、0125 、0130 、 赤潮的危害具有重要意义 ,建立溶血毒素提取与活性测定标 0135 ml 洋地黄皂甙母液 ,依次加入上述 6 支离心管中 ,再依 准非常必要 。目前 ,红细胞测定法是国际上通用的测定溶血( 次加入等渗的柠檬酸缓冲液 73mmolΠL NaCl ,142mmolΠL 柠檬 3 ,5 毒素的方法 ,不论其溶血毒素是何种物质 ,脂肪酸 、多肽 ) 酸酸钠 ,114mmolΠL 葡萄糖使每个样品管中的量为 014ml ,再 或是蛋白质 ,红细胞测定法都可快速检出 ,因此得到广 泛 应 μ量取 116ml 柠檬酸缓冲液 ,其中向另外两支试管中加入 100l 用 。但目前不同实验室 、不同部门测定时的具体步骤 、方法并 Trixon2100 作为全溶血对照 ,在 37 ?条件下反应 30min 。离心不完全一致 ,缺乏统一的标准 ,导致不同实验室 、不同部门对 取上清液 ,用紫外分光光度计测定在波长 540nm 处的吸光度 同一种藻类毒性的评价差异很大 ,极大地影响到对鱼毒性赤 值 A , 阴 性 对 照 为 A, 全 溶 血 为 A , 再 以 溶 血 百 分 数 i 0 c 潮危害的准确认识和评估 ,也严重影响到鱼毒性赤潮生物致A - A i 0×100 为纵坐标 ,洋地黄皂甙的浓度为横坐标绘制 毒机制的研究和分析 。因此 ,建立 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 统一的毒素操作规范 A c ( ) 十分必要 。海洋 卡 盾 藻 Chattonella marina是 一 种 鱼 毒 性 赤 标准曲线 。再取毒素溶液 011ml 于离心管中 ,加入柠檬酸盐 潮藻 。自 1991 年在广东大亚湾海区首次爆发该藻引起的赤 缓冲液 013ml ,再加入 116ml 01 5 %的红细胞溶液 ,在相同波长潮以来 ,海洋卡盾藻赤潮相继在我国其他海区频繁发生 ,已成 下测定吸光度值 A和 A ,其中 A 为空白对照的吸光度值 。 w b b 6 ,9 为我国重要的鱼毒性赤潮原因生物 。本文以海洋卡盾藻 每组实验设 3 个平行 。 2为实验材料 ,对赤潮藻溶血毒素的提取过程 、毒素活性测定方 116 蒸馏温度对溶血毒素活力影响 法进行研究 ,以实现赤潮藻类溶血毒素提取与活性测定的标 提取过程中减压蒸馏的温度设定为 : 40 、60 和 80 ?。每 准化 ,为海洋卡盾藻等鱼毒性赤潮危害的准确评估提供可靠 组实验设 3 个平行 。 11 的方法 ,促进相关研究的开展 。 117 不同血红细胞对溶血毒素的敏感性测定 分别取 015 %兔 、昆明鼠 、花身 和人的红细胞液进行溶 1 材料和方法 血活性测定 。每组实验设 3 个平行 。 111 材料 118 兔血使用天数对溶血活性影响 ( ) 海洋卡盾藻 Chattonella marina由暨南大学赤潮与 水 环 抽取 健 康 兔 血 15ml , 存 放 4 ?, 每 天 抽 取 2ml 配 制 成12 境研究中心提供 ,采自广东大亚湾海域 ; 白兔 、昆明鼠购自暨 015 %的红细胞溶液 , 溶血活性测定步 骤 同 上 。每 组 实 验 ( ) 南大学实验动物场 ;花身 Terapon jarbua购自菜市场 ,人血 设 3 个平行 。 采自暨南大学附属第一医院 ,由健康志愿者提供 。 119 藻细胞的保存对海洋卡盾藻溶血毒素活性影响 112 仪器与试剂离心收集藻 细 胞 , 将 藻 细 胞 分 别 保 存 于 20 、0 和 - 20 ? 12 ( ) LRH22502GS 人工光照气候箱 广东省医疗器械厂, Gold中 ,以新鲜藻样品溶血毒素为对照 ,测定保存 1 、3 和 7 天时 () Spectrumlab 53Π54 紫外分光光度计 上海凌光技术有限公司, 的溶血活性 。每组实验设 3 个平行 。(13J Y922 ?型超声波细胞粉碎机 宁波新芝生物科技股份有限公 1110 滤液中溶血毒素的提取与活性测定) () 司,CKX41 型倒臵显微镜 OL YMPUS, SHB2 ?循环水式多用 μ收集藻细胞离心后上清3 000ml ,于 0122m 滤膜过滤 ,确 () (真空泵 郑州长城科工贸有限公司,旋转蒸发器 上海亚荣生 保无藻细胞残留 。向滤液中加入 NaOH ,边加边搅拌 ,产生白 ) () 化仪器厂,电热恒温水浴锅 上海跃进医疗器械厂。天然海 色絮状沉淀 ,调节 p H 值至 10 ,静臵 30min 后离心 ,去上清 ,将 ( ) 水取自广东省大亚湾海区 ,洋地黄皂甙 Sigma 公司、维生素 沉 淀 溶 解 于 100ml , 1molΠL HCl 中 , 将 溶 液 臵 于 透 析 袋 ( ) VB、维生素 VB和 生 物 素 上 海 伯 奥 生 物 科 技 有 限 公 司。 1 12 () MSCW1000中 ,于 100mmolΠL 的 HCl 中透析 3 天 ,将透析袋内 其他未注明试剂均为国产分析纯 。(的溶液冷冻干燥 ,最后产物溶解于甲醇 甲醇体积为培养液的 113 藻种培养) 1Π3 000中 ,存放于 - 18 ?备用 。每组设实验 3 个平行 。 采用天然海水 ,按照 fΠ2 培养液改良 配方 学校职工宿舍分配方案某公司股权分配方案中药治疗痤疮学校教师宿舍分配方案医生绩效二次分配方案 配制培养基 ,经 1111 溶血毒素溶血活性计算μ0122m 过滤除菌 ,臵锥形瓶中备用 。接种对数生长期海洋卡 () 依据洋地黄皂苷标准曲线公式 : y = ax + b 1,可以得出 盾藻于培养基中 ,臵于人工气候箱中培养 ,设定温度 23 ?、光 以下计算公式 : 10照强度3 000lx 、光暗循环 L?D = 12h?12h 。 A- A w bb ×100 - 114 藻细胞的破碎与溶血毒素的提取 A c()2 HU = ×20 a × EC 取对数末期海洋卡盾藻在1800 ×g 下离心 10min ,收集藻50 第 6 期彭颖慧 ,等 . 赤潮藻溶血活性测定标准的建立 ( ) HU :溶血活性 ,单位为 HUΠL; A: 样品溶血后所测得的 ,不同来源的红细胞对溶血性比较 。从表中可以看出 w 吸光值 ; A :空白对照的吸光值 ; A 全溶血的吸光值 ; EC:方 b c 50 敏感性不同 ,因此 ,测定溶血毒素时的实验动物应保持 () 程 1中 ,当 y = 50 时的 x 值 ,即当溶血百分比为 50 %时的洋 以便比较 。考虑到兔血红细胞敏感性最强 ,采样又方便 () ( ) 地黄皂甙浓度 ; a : 方程 1中拟合直线的斜率 ; b : 方程 1中 实际测定时以兔红细胞为宜 。 拟合直线的截距 ;20 :测定溶血毒素的反应体系为 2ml ,每个样 表 4 不同红细胞对溶血活性的影响品所提取毒素的总体积为 1ml 的甲醇溶液 ,因反应体系只取 Ta ble 4 Sensitivity of different erythrocytes to 4 其中 011ml 毒素 ,所以要乘以 10。 the haemolytic substances from C1 ma ri na ( ?x ?s ) 溶血活性 不同红细胞种类 ( )HUΠL 2 结果 244198 ?29115 人 211 不同藻细胞破碎方法对溶血毒素活力的影响 兔 昆288123 ?10114 明鼠 花266135 ?10114表 1 为利用超声波细胞破碎法和液氮研磨法得到的海洋 身 195147 ?19125卡盾藻的溶血活性 。比较可以发现 ,超声波破碎法得到的溶 血活性值显著高于液氮研磨法 。显然 ,超声波细胞破碎法破 215 兔血红细胞的保存天数对溶血活力的影响 碎细胞更为理想 。 表 5 为兔血细胞 保 存 时 间 与 溶 血 活 性 的 关 系 。兔 表 1 不同藻细胞破碎方法对溶血毒素活力的影响4 ?条件下 ,保存 1,4 天 ,溶血活性测定值并无明显变 Ta ble 1 Hemolytic activity detected by different methods ) > 0105。故兔血红细胞在 4 ?可保存 4 天用于检测 。 to brea k cells ( x ?s ) ? 表 5 兔血红细胞的保存天数对溶血活力的影响溶血活性 细胞破碎方法 Ta ble 5 Sensitivity of ra bbit erythrocyte after holding f or ( ) HUΠL different days to haemolytic substances( ?x ?s ) 288123 ?10114 超声波细胞破碎法 液氮研磨法94189 ?10173保存天数 溶血活性 ( )( ) d HUΠL 123 ?10114 1 288212 超声波破碎时间对溶血活性的影响 2 283108 ? 7158为进一步寻找最佳破碎条件 ,观察了超声波不同破碎时 3 284143 ?13187( ) 间下溶血活性的大小 见表 2。可以看出 ,随超声时间的延 4 284143 ?17175 长 ,藻细胞溶血活性测定值明显增加 。超过 20min 时 ,活性维 持稳定 。因此 ,选择超声时间以 20min 为佳 。 216 滤液中溶血毒素的提取 表 2 超声波破碎时间对溶血活性的影响滤液中溶血活性未能检出 ,而藻细胞内提取的溶 Ta ble 2 Hemolytic activity by supersonic 活力值却很高 ,说明海洋卡盾藻细胞分泌的溶血毒素 treatment f or different time( ?x ?s ) 胞内毒素 。 超声时间 溶血活性 217 微藻样品的保存对溶血活性的影响()( ) min HUΠL 表 6 为海洋卡盾藻的溶血活性 与 保 存 时 间 和 温 度 5 80157 ?11157 系 。从表中可以看出 ,随着保存时间的延长 ,藻样品中 157145 ?5214410 性下降 。保存于 20 ?中溶血活性下降最快 ,在 0 ?中可 288123 ?1011420 存 3 天并维持较高的溶血活性 ,而在其他温度下只能 117 ? 7130 30 279 天 。因此 ,藻样品最好在 0 ?下保存 ,不要超过 3 天 。 表 6 微藻样品的保存对溶血活性的影响213 蒸馏温度对溶血活性的影响 Ta ble 6 Hemolytic activity of storage C1 ma ri na under 表 3 为 40 、60 和 80 ?下减压蒸馏温度时的溶血活性 。可 different conservation conditions( ?x ?s ) 以看出 ,三种温度下溶血活性测定值逐渐降低 ,温度为 60 和 保存温度 保存天数 溶血活性 ( ) 80 ?时溶血活性极显著低于 40 ?时的情况 P < 0101。表明 ( ) ( ) ( ) ?dHUΠL 蒸馏温度过高会影响溶血毒素的活性 ,很可能高温下溶血毒 0 1 287128 ? 0179 素会发生分解 。因此 ,蒸馏温度选择 40 ?为宜 。 3 281171 ?18103 表 3 蒸馏温度对溶血活性的影响 7 98109 ?13181Ta ble 3 Effect of distillate temperature in extraction of 1 20 273164 ? 3131 haemolytic substances on hemolytic activity( ?x ?s ) 3 83114 ? 7156 减压蒸馏温度 溶血活性 7 73137 ? 0159( ) ( )HUΠL ? - 20 1 267129 ? 317240 288123 ?10114 3 152183 ? 1136 60 124197 ?221417 139179 ?47156 288123 ?10114空白对照 80 120168 ?44138 11 海洋中含有溶血活性物质的生物有很多 ,在不知其溶 ,表明大量藻细胞破裂 。这可能是造成样品现明显的弥散状 血活性物质的具体成分时 ,采用红细胞破裂法测定其溶血活 溶血活性测定值下降的原因 。因此 ,不同的藻细胞应采用不 12 性是一项非常简便而且灵敏的方法 。以洋地黄皂甙为标 同的保存方法 ,建议最好在 3d 内测定完毕 。 13 值得注意的是 ,实验中我们采用 ARIV 等 的方法提取准物 ,建立标准曲线 。然后测定样品 A值 ,计算得出溶血百 540 ( ) 分数 。按照溶血单位 HUΠL 的定义 : 标准体系中 , 溶解红细 无细胞滤液中的溶血毒素 。结果发现 ,滤液中不含溶血物质 , 11 ( μ胞百分数为 50 %的溶血毒素的量 相当于 113g 的洋地黄皂 这与 URODA等的研究结果一致 。表明海洋卡盾藻的溶血 4 ) 甙,得出溶血活性值 。然而 ,但不同实验室 、不同部门测定 毒素应该位于细胞内某个位臵 ,在其正常生长的状况下不会 的具体方法又有所不同 ,缺乏一个统一的标准 。为便于比较 , 分泌出来 。因此 ,实际测定中不必再进行滤液中溶血活性的 对溶血毒素的提取及活性测定方法进行细化 ,掌握细胞破碎 测定 。方法 、提取温度 、红细胞来源及样品保存时间等对溶血活性的 影响 ,从而实现对溶血毒素提取与活性测定的标准化 ,是非常 必要的 。 参考文献 比较发现 ,采用不同方法破碎 细 胞 , 其 溶 血 活 性 明 显 不 1 尹伊伟 ,王朝晖 ,江天久 ,等. 海洋赤潮毒素对鱼类的毒害J . 海 同 。超声波破碎法明显优于液氮研磨法 。超声波破碎法条件 () 洋环境科学 , 2000 , 19 4: 62265 .容易控制 ,实验结果的重现性好 ,同时能使藻细胞中溶血毒素 2 彭喜春 ,杨维东 ,刘洁生 ,等. 实验室培养球形棕囊藻溶血毒素的 13 维持较高活性 。液氮研磨法人为因素多 ,可控性差 , 活性 提取 、分离 及 其 生 成 特 征 J . 热 带 亚 热 带 植 物 学 报 , 2005 , 13 容易受操作者自身因素的影响 ,活性往往偏低 。进一步比较 () 1: 25228 . 发现 ,海洋卡盾藻细胞破裂的最佳条件为 200W 超声 20min , 6 3 郭瑾 ,杨维东 ,刘洁生 ,等. 温度 、盐度和光照对球形棕囊藻生长 这与张文等的研究结果有一定差异 ,可能与样品的用量有 () 和产毒的影响研究J . 环境科学学报 , 2007 , 27 8: 134121346 . 关 。超声波的功率与时间与待破碎藻样品的量有关 。一般说 何家菀 ,陈明惠 ,何振荣. 小定鞭藻毒素的分离与鉴定 J . 水生 4 来 ,样品量越多 ,超声波的功率要求越高 。本实验选用的藻量 () 生物学报 , 1996 , 20 1: 41248 . 是张文等的十分之一 ,所以超声功率比较小 。因此 ,实际测定 5 刘洁生 ,彭喜春 ,杨维东. 球形棕囊藻溶血毒素对兔红细胞作用 时应根据样品的实际用量确定超声波的功率 ,最好能用镜检 2 () 的办法确定藻细胞破碎情况 。由于海洋卡盾藻无细胞壁 , 的 AFM 观察J . 热带海洋学报 , 2007 , 26 2:55258 . 离心后藻细胞都板结在一起 ,无法重悬 ,因此本实验未能采用 ( ) 6 张文 ,江天久 ,王锐. 海洋卡盾藻 香港株溶血毒素的提取和分 镜检确定藻细胞破碎情况 ,而只能通过测定其溶血活性来确 () 离J . 生态科学 , 2008 , 27 6: 4752462 . 7 定细胞的破碎效率 。 7 齐雨藻 ,黄长江. 南海大鹏湾海洋卡 盾 藻 赤 潮 发 生 的 环 境 背 景海洋卡盾藻溶血毒素的成分尚不十分清楚 。URODA 等 () J . 海洋与湖沼 , 1997 , 28 4: 3372342 .认为 ,海洋卡盾藻溶血毒素至少含有 4 种组分 ,其中一种为色 ( 8 袁美玲 ,王朝晖 , 李友富. N 、P 营养盐对海洋卡盾藻 Chattonella 11 () 素类衍生物 。张文等发现 ,海洋卡盾藻 香港株分泌的溶 ) () marina生长的影响J . 生态学报 , 2008 , 28 1:4302435 . 血毒素可能含有 4 种物质 :其中一种为脂类 ,另外三种为糖脂 9 李涛 ,刘胜 ,黄良民 ,等. 大亚湾一次赤潮生消期间浮游植物群落 6 类物质 ,这些脂类物质可能与红细胞膜上的某个位点结合 () 变化研究J . 热带海洋学报 , 2005 , 24 3: 18224 . 14 而发生溶血现象 。本实验研究了提取温度对毒素溶血活 10 NEEL Y T , CAMPBELL L . A modified assay to determine hemolytic toxin 性的影响 。结果发现 ,温度超过 40 ?时 ,溶血活性显著降低 , variability among Karenia clones isolated from the Gulf of Mexico J . 表明温度可显著影响卡盾藻溶血毒素的毒力 。推测温度过高 Harmful Algae , 2006 , 5 : 5922598 . 有可能导致毒素与红细胞膜结合中心的改变 ; 也可能造成部 11 URODA A , NAKASHIMA T , YAMGUCHI K , et al . Isolation and 分溶血毒素成分的分解 。 characterization of light2dependent hemolytic cytotoxin from harmful red SCHBACH 等将十几种离心后的藻颗粒加入到混合溶液tide phytoplankton Chattonella marina J . Comp Biochem Physiol , ( 150mmolΠL NaCl , 312mmolΠL KCl , 1125mmolΠL MgSO, 4 2005 , 141 : 2972305 . ) 3175mmolΠL CaCl, 1212mmolΠL Tris base , p H 为 714中 ,将其保 2 12 SCHBACH E , SCHARSACK J P , JOHN U , et al . Improved erythrocyte 存于 - 20 ?下 3 个月 。结果发现 ,藻样品中的溶血活性基本 12 lysis assay in microtitre plates for sensitive detection and efficient 保持不变 。不过 ,研究中所选用的藻均有细胞壁 , 细胞壁 measurement of haemolytic compounds from ichthyotoxic algae J . J Appl 对于藻细胞形态的维持具有很大作用 。本实验中 ,我们选用 Toxicol , 2001 , 21 : 513 2519 . 的海洋卡盾藻无细胞壁 , 所以保存难度 大 。本 实 验 中 发 现 , 13 ARIV J , HESTRIN S. Toxicity of the extracellular phase of Prymnesium 20 ?条件下样品保存 3d 后 ,溶血活力值降低 ,观测其样品出parvum culturesJ . J Gen Microbiol , 1961 , 24 : 165 2175 . 14 GARASHI T , ARITAKE S , YASUMOTO T , et al . Biological activities of prymn2esin22 isolated from a red tide alga Prymnesium parvum J . Nat Toxins , 1998 , 6 : 35241 . 收稿日期 :2009205208
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分类:生活休闲
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