白术提取液及成分对唾液淀粉酶活性的影响【文库论文】

白术提取液及成分对唾液淀粉酶活性的影响【文库论文】 白术提取液及成分对唾液淀粉酶活性的影响 ====================================================================== 【关键词】 白术;,,白术内酯?;,,白术内酯?;,,白术提取物;,,唾液淀 粉酶 摘要:目的研究白术提取液及成分对唾液淀粉酶活性的影响。方法采用淀 粉酶比色测量法，进行了白术的水煎液、醇提液、白术挥发油及白术内酯?、 对酶活性影响的实验。结果白术水煎液能明显增加酶的活性，白术白术内酯? 醇提液及白术内酯?对酶活性也有增强作用，而白术挥发油及白术内酯?却抑 制酶的活性。结论白术内酯?可以作为白术健脾运脾的效应成分之一。 关键词:白术; 白术内酯?; 白术内酯?; 白术提取物; 唾液淀 粉酶 Effects of Atractylodes macrocephala extracts and its Components on the Activities of Salivary Amylase Abstract:ObjectiveTo investigate the effects Atractylodes macrocephala extracts and its components on the activity of salivary amylase.Methods Amylase colorimetric method was used to determine the activities of salivary amylase affected by Atractylodes macrocephala water extract, alcohol extract, volatile oil, atractylenolide ?, and atractylenolide ?. ResultsThe activity of salivary amylase increased obviously by Atractylodes macrocephala extract, and it was also enhanced by ethanol extract and atractylenolied ?, whereas it was suppressed by volatile oil and atractylenolide ?. ConclusionAtractylenolide ? is one of the effective components on Atractylodes macrocephala invigorating the spleen. Key words:Atractylodes macrocephala; Atractylenolide ?; Atractylenolide ?; Extract; Salivary amylase 中药白术为菊科苍术属植物白术Atractylodes macrocephala Koidz的根 茎，具有健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎的功效;适用于脾虚气弱、运化失 常所致的食少便溏、脘腹胀满、倦怠无力以及痰饮水肿等症。白术的化学成分 主要为挥发油类成分(苍术酮、苍术醇等)、白术内酯类(白术内酯?，?， ?等)，还含有白术三醇的甲基丁酸酯、炔类化合物和白术多糖等。药理研究 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明:白术煎剂及挥发油(如杜松脑)能明显拮抗乙酰胆碱和氯化钡所致肠管 痉挛,1，2,;白术内酯?，?，?为抗炎有效成分,3,，白术挥发油和白术 内酯?有抗癌作用,4,，但有关白术健脾消食益气的活性成分研究较少。白术 为健脾益气、燥湿利水之要药，中医有“脾主涎”“涎为脾液”的论述。本文 采用酶学研究方法,5,，进行了白术提取液及白术化学成分对唾液淀粉酶活性 的影响实验研究，以期探讨白术健脾运脾的物质基础，为研究白术的活性部位和活性成分提供药理学依据。 1 材料 1.1 药材及药液 1.1.1 生白术购于浙江省磐安县医药公司，经我校中药鉴定室王春根教授鉴定，为Atractylodes macrocephala Koidz.的根，粉碎成40目粉末。 1.1.2 麸炒白术将蜜制麸皮撒入热锅内，待冒烟时，加入白术片，不断翻动，炒至白术呈深焦黄色，取出，筛去蜜制麸皮，放冷，得率90% ，粉碎成40目粉末。 1.1.3 生、炒白术水煎液取药材粉末以水煎煮后，离心，得上清液，用PBS缓冲液(pH=8.0)配成所需浓度。再用醋酸乙酯萃取3次，得到水煎液的煎脂部分和煎水部分。煎脂部分蒸干醋酸乙酯，用缓冲液配成所需浓度。煎水部分用缓冲液配成所需浓度。 1.1.4 生、炒白术醇提液取药材粉末用70,乙醇液冷浸过夜，回收乙醇液，用缓冲液稀释至所需浓度。按文献方法,6,从浙江产白术分离得到对照品,经UV，IR，NMR，MS等波谱鉴定为白术内酯 ?(atractylenolide ?)、白术内 酯? (atractylenolide ?)。取对照品适量，以1,二甲亚砜的PBS缓冲液配成所需浓度，供实验用。 1.2 试液 1.2.1 1,15 mol/LPBS缓冲液(pH=8.0)称取磷酸二氢钠约8.0 g，加生理盐水稀释至1 L，用10,氢氧化钠调pH值为8.0。 1.2.2 0.04%可溶性淀粉溶液烧杯内放入可溶性淀粉0.2 g，加蒸馏水5 ml，摇匀成混悬液。另称取无水磷酸氢二钠13.3 g及苯甲酸4.3 g，加蒸馏水250 ml，煮沸后，加入淀粉溶液，继续煮沸1 min，冷却后，加蒸馏水稀释至500 ml。 1.2.3 0.1 mol/L碘贮备液精密称取碘酸钾3.567及碘化钾45 g，置于1 L容量瓶中，加蒸馏水约800 ml，然后缓缓加入浓盐酸9 ml，摇匀，再加蒸馏水定容，置冰箱中备用。 1.2.4 0.01 mol/L碘应用液取0.1 mol/L碘贮备液50 ml,加蒸馏水稀释至0.01 mol/L。盛于棕色瓶中置冰箱内备用。 1.2.5 淀粉酶液淀粉酶贮备液5 ml，加PBS缓冲液稀释至500 ml，备用。 2 方法 2.1 取50 ml刻度试管2只，一只作对照管，另一只作测定管。两管内各加0.04%可溶性淀粉溶液5 ml。 2.2 将测定管置于37?水浴内预温5 min后加入待测样品液0.1 ml及唾液淀粉酶溶液(1?1000)0.5 ml混匀，再置于37?水浴内15 min后取出。 2.3 于对照管、测定管中各加入0.01 mol/L碘应用液5 ml，并用蒸馏水稀释至50 ml刻度。 2.4 立即混匀，在570 nm处进行比色测定，以PBS缓冲液校正光密度到零点，读取各管光密度值。比较各种溶液对酶活性的影响。光密度值(O.D)减小，则酶活性增强;光密度值增大，则酶活性变弱。 3 结果 3.1 最适唾液淀粉酶浓度的确定固定底物(淀粉)浓度为0.04%，加入不同浓度(0.10%，0.025%，0.05%，0.1%，0.15%，0.25%，0.5%)的唾液淀粉酶，按上法操作，结果表明，当唾液淀粉酶的浓度为0.1%(即1?1000)时，酶活性较稳定，故最适酶浓度选择为1?1000。结果见表1、图1。 表1 最适唾液淀粉酶浓度的选择(略) 图1 最适唾液淀粉酶浓度的选择(略) 3.2 生、炒白术各部分对唾液淀粉酶活性的影响随时间的变化固定底物浓度和酶浓度，现测生、炒白术的水煎液、醇提液的测量值随时间的变化。结果见图2。由图2可见，在0,10 min内酶的活性较弱，而在10 min以后酶活性较强，为缩短分析时间，故选择酶活性测定时间15 min为佳。 图2 生、炒白术提取液对酶活性的影响随时间的变化(略) 3.3 不同浓度生、炒白术各部分对唾液淀粉酶活性的影响在底物浓度为0.04%，酶浓度为0.1%(1?1000)，酶响应时间15 min的条件下，观测不同浓度生、炒白术各部分对酶活性的影响 ，结果见图3，图4。与PBS缓冲液对照，白术水煎液部分及醇提液部分的光密度值均小于对照值，表明均有不同程度增强酶活性的作用;而白术挥发油测得的光密度值大于对照值，表明对酶活性起一定的抑制作用。 图3 不同浓度生白术提取液对酶活性的影响(略) 图4 不同浓度炒白术提取液对酶活性的影响(略) 3.4 不同溶度白术成分对唾液淀粉酶活性的影响在与上述相同的条件下，测定了不同浓度白术内酯?及白术酯?对酶活性的影响。结果见图5。表明白术内酯?能增强酶活性，而白术内酯?对酶活性有一定的抑制作用。 图5 不同浓度白术成分对酶活性的影响(略) 4 讨论 ”“涎为脾液”的论 白术为健脾益气、燥湿利水之要药。中医有“脾主涎 述。本文采用酶学研究方法，测定了白术提取液及白术成分对唾液淀粉酶活性的影响。实验表明，白术水煎液及醇提液对酶活性有增强作用，其中的白术内酯?也具有相同的增强作用。结果提示，白术用以健脾运脾时，以热醇提取法制备制剂是合理的;白术内酯?可以作为白术健脾运脾的效应成分之一，为研究白术的活性部位和活性成分提供了药理学的验证。 参考文献: ,1, 傅定中.白术化学成分的分离及其对家兔离体小肠运动影响的研究 ,.中药材，1988，11(6):38. ,J ,2, 马允慰，吴坤平，胡小鹰，等.白术对家兔离体肠管活动的影响,J,.中成药研究，1982,(12):26. ,3, Endo K.et al, Chem Pharm Bull,J,，1979,27,2954. ,4, 汤德芳，郝玉珩，刘佐雅，等.平江白术根茎挥发油的成分及其抑瘤作用研究,J,.药学通报，1984,19(9):43. ,5, 李仪奎.中药药理实验方法学，第1版,M,.上海:上海科学技术出版社，1991:245. ,6, 黄宝山，孙建枢，陈仲良，等.白术内酯?的分离鉴定,J,.植物学报，1992,31(8):614