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新概念疫苗与基因免疫(可编辑).doc

新概念疫苗与基因免疫(可编辑)

没有任何借口的爱
2017-12-12 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《新概念疫苗与基因免疫(可编辑)doc》,可适用于高等教育领域

新概念疫苗与基因免疫(可编辑)新概念疫苗与基因免疫复合抗原表位的基因免疫多种抗原表位基因同时克隆在一个载体里面来进行DNA免疫研究最多的方式Thomoson等将流感病毒鼠巨细胞病毒腺病毒疟原虫等共个CTL表位串联表达于真核细胞表达质粒DNA中GenesencodingtheEpitopesNPPPLCMVExpresstheEpitopesCTLCOOHNH以免疫球蛋白基因为载体的表位基因免疫B细胞表位是天然的位于分子的表面或转折处为构象依赖性表位是抗原分子的三级结构T细胞表位是抗原提呈细胞加工提呈的抗原肽呈线性排列免疫球蛋白分子的互补决定区CDR具有外显性总是暴露在外随时准备与相应抗原决定簇结合空间限构限定的空间构型即其空间构型不会因为编码蛋白的后续修饰如糖基化而改变外源B细胞抗原表位直接克隆表达于CDR中利用CDR限定的空间构型保证表位的构型正确及免疫原性的稳定并利用CDR结构外显的特性使表位的可接近性accessibility好提高表位被吞噬及呈递的效率以免疫球蛋白基因为载体的表位基因免疫以免疫球蛋白基因为载体的表位基因免疫CDRBcellEpitopeVectorcontainingIggeneGeneencodingIgFabCDRBcellEpitopeCDRBcellEpitopeBcellBCR病原菌三表达文库基因免疫expressionlibraryimmunizationELIELI技术允许免疫系统自我选择ELI技术基本指导思想是将目的抗原的编码基因随机克隆于载体将含有成千上万个DNA片段的质粒DNA直接免疫动物再以相应的病原体感染这些动物观察是否有保护作用如有则可将这成千上万种混合的质粒DNA分组再免疫作保护性感染实验有保护后再分组直至选出单一保护性DNA片段病原体一个基因具有所有基因的文库常规基因免疫ELI病原体具有所有基因的文库YESNOYESNOYESNONONOELI特殊应用价值可从有效的表达文库中分离出有保护作用的组分制备成特异性基因疫苗或重组蛋白疫苗对于某些抗原成分不明确的病原体传统的蛋白免疫或基因免疫的应用受到限制可利用ELI使机体的免疫系统自行筛选有效的抗原基因产物工作量非常大但价值也大六基因免疫的免疫途径和方法肌肉免疫一免疫途径皮内免疫脾脏免疫其他胃肠外免疫基因疫苗可在体内合成与自然感染状态下表达的蛋白具有相同的构象和翻译加工方式的蛋白抗原内源合成的蛋白可有效地被MHCI类分子呈递模拟病原体繁殖后在体内表达抗原诱生CTL的过程转基因在体内细胞表达的产物可在细胞裂解或凋亡时被释放至细胞外或与凋亡细胞一同为APC摄取被MHCII分子呈递基因免疫的优势重组质粒DNA在宿主体内存在时间长产生持久免疫能刺激黏膜免疫诱导免疫记忆基因免疫采用的质粒DNA没有毒力回复的危险较活疫苗更为安全同一个质粒可通过患联或并联的方式克隆多个目的基因可实现一种疫苗预防多种疾病的目的DNA的制备贮存极为方便和廉价也更易进行基因水平上的操作和改造从而更有利于制备多抗原基因疫苗基因免疫可能在一些特殊领域里有常规疫苗所不具备的应用价值如新生儿免疫基因免疫的应用前景由于基因免疫操作上简便易行以及诱导免疫应答的相对高效性基因免疫已在抗感染免疫及非感染性疾病如肿瘤自身免疫性疾病中广泛应用二基因免疫可能的分子机制基因被注入肌肉组织或皮下后是如何被细胞摄取在细胞内表达的蛋白是如何递呈的微量抗原pgg至ngg怎样诱导出宿主的免疫应答一质粒DNA直接转染体细胞肌细胞结构特点多核细胞肌织网T小管系统细胞外液并能伸到细胞内部伸入到细胞内部的肌膜为浆膜小体caveolae在电镜下是肌膜凹陷形成的小泡状结构外源基因的内化是由浆膜小体介导的胞饮过程DNA被摄入肌细胞过程DNA受体蛋白经由糖基磷脂酰肌醇GPI固定在浆膜小体表面并聚集成丛DNA与受体结合后浆膜小体在开口处闭合并脱离肌膜DNA与受体在浆膜小体内分离沿浓度梯度经浆膜小体到达胞浆通过XX载体二基因免疫中抗原呈递的分子机制专职APC巨噬细胞树突状细胞B细胞MHCII类应答的机制质粒DNA在转染的靶细胞中表达的蛋白抗原通过细胞分泌或细胞裂解的途径释放为APC所摄取并与MHCII类分子在晚期内体内结合被呈递于APC表面激活Th细胞ThILIFNr参与CMIThILIL辅助HIMHCII类应答IngestionSecretionLysedrelease输入淋巴管生发中心ThThAPCThBThAntigenicpeptideExpressingMHCIImoleculeSpecificantibodyMHCI类应答的机制MuscleinjectionEndogenousProteinantigen内源性途径CTLCDMHCIBCRCTLCDMHCICDMHCIITh外源性途径EndogenouspeptideExdogenousprotein三基因疫苗的载体结构多克隆位点multiplecloningsiteMCS如BamHIGGATCCCCTAGGMCS中的酶切位点必须是唯一的选择的标记基因Amp抗性基因用Amp筛选EcoliNeomycin抗性基因用G等筛选稳定转染细胞株启动原核和真核的复制转录及表达的元件复制起始点forif噬菌体复制起始点pUCori来自pBR质粒的复制起始位点Ecoli复制SVoriSV病毒复制起始点真核细胞中复制启动原核和真核的复制转录及表达的元件启动子增强子T噬菌体启动子启动原核表达Amp抗性CMV巨细胞病毒启动子启动真核表达目的基因neomycin抗性启动原核和真核的复制转录及表达的元件多聚腺苷polyA加尾终止信号polyA复制终止信号BGHpA牛生长激素polyASVpA即SV病毒polyA四CpG的免疫佐剂效应在基因免疫中的作用细菌DNA可激活B细胞NK细胞单核细胞等分泌细胞因子而哺乳动物DNA则无此作用细菌DNA中包含许多以高频率出现的非甲基化CpG寡核苷酸序列由嘌呤嘌呤CG嘧啶嘧啶如AACGCTCGACC寡核苷酸CpG具有免疫佐剂作用可激活多种细胞分泌细胞因子CpG在细菌基因组和质粒中的频率为而脊椎动物为甲基化原核甲基化不足真核甲基化达CpG具有免疫佐剂作用刺激分泌细胞因子必须与抗原共同注射于相同的部位才表现出免疫辅助作用CpG序列ISS序列胞嘧啶核苷磷酸鸟苷ImmunostimulatorysequencesISS五基因免疫中目的基因的来源一完整抗原编码基因的基因免疫二以抗原表位为基础的基因免疫三表达文库expressionlibrary基因免疫一完整抗原编码基因的基因免疫已知的病原微生物中抗原性较强的蛋白抗原均可作为基因免疫的靶抗原例如流感病毒血凝素HA神经氨酸酶NPHIV包膜蛋白gp结核杆菌的AgB等抗原编码基因已知的病原微生物中抗原性较强的蛋白抗原PCRencoded完整抗原基因免疫后在体内可有效地模拟活疫苗的作用与重组疫苗或亚单位疫苗显著不同的是转基因在宿主细胞中可合成与天然抗原有类似空间构象及糖基化方式的蛋白并与细胞内MHCI和II类分子结合呈递于APC表面从而诱生有效的细胞免疫应答和可识别构象依

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