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首页 【doc】条件培养基对高传代人毛乳头细胞生长的影响

【doc】条件培养基对高传代人毛乳头细胞生长的影响.doc

【doc】条件培养基对高传代人毛乳头细胞生长的影响

鍑九娃娃
2017-12-09 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《【doc】条件培养基对高传代人毛乳头细胞生长的影响doc》,可适用于综合领域

【doc】条件培养基对高传代人毛乳头细胞生长的影响条件培养基对高传代人毛乳头细胞生长的影响中华廛登苤查生笙三卷第塑i』nmtolNgvembelVolNo条件培养基对高传代人毛乳头细胞生长的影响罗洋郝飞钟白玉麦跃姜晓勇【摘要】目的研究人毛乳头细胞条件培养基的生物学活性方法通过体外培养低传代人毛乳头细胞收集其基础培养基的上清液配制成条件培养基,用于培养高传代人毛乳头细胞,观察细胞形态及细胞生长曲线的变化同时观察高传代人毛乳头细胞与低传代人毛乳头细胞共培养情况结果低传代条件培养基使高传代人毛乳头细胞出现了凝集生长现象,其生长曲线显着优于基础培养基培养的高传代毛乳头细胞(P,O),其细胞的HTdR测定值亦显着升高(P)高传代人毛乳头细胞与低传代人毛乳头细胞共培养后出现凝集性生长趋势结论低传代人毛乳头细胞在培养状态下可分泌具有明确生物学活性的物质I关键词】毛囊培养基,条件性细胞培养TheBiologicalActivitiesofConditionedMediumDerivedfromHumanDermalPapillaCellsCulturednVitroLUOYang,HAFei,ZHONGBaiyu,MA,Yue,JIANGXiaoyongDepartmentofDermatology,SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversit)',Chongqing,China【Abstract】ObjectiveToinvestigatethebiologicalactivitiesofaconditionedmediumforhumandermalpapillaMethotisCulturemediumofthelowerpassagehumandermalpapillacellswascollectedastheconditionedmediumThegrowthpatternandthegrowthcurveofthehigherpassagehumandermalpapillacellsculturedwithconditionedmediumwereobservednvitroAndthemorphologyoftheCOcultureofthehigherpassagehumandermalpapillacellsandthelowerpassagehumandermalpapillacellswasobservedResultsThehigherpassagehumandermalpapillacellswhichwasculturedwithconditionedmediumfromthelowerpassagehumandermalpapillacells,showedaggregativegrowthpatternAndthegrowthCHrveofthehigherpassagehumandermalpapillacellswasmuchbetterthanthatinthecontrolgroups(P)andthevaluesofHTdRincorporationwerehigherthanthoseinthecontrolgroups(P)TheCOCUlture~higherpassagehumandermalpapillacellswithlowerpassagehumandermalpapillacellsshowedaggregativegrowthpatternConclusionTheseresultsshowthatthelowerpassagehumandermalpapillacellscuhuredinvitromightsecretesomechemotacticfactorsthathavesomebiologicalactivitiesonthehighpassagehumandermalpapillacells【Keywords】HairFollicleCulturemedia,conditionedCellculture一般认为,毛乳头细胞在毛囊的发育及周期性生长调控中起重要作用目前已经发现的一些信号分子,如成纤维细胞生长因子,骨形成蛋白,神经营养因子,血小板源性生长因子等:,虽然对毛囊形态学发生和周期性生长起一定的调节作用,但并未起关键作用,且多来自毛囊上皮细胞,非毛乳头细胞所特有因此,要阐明毛乳头细胞对毛囊发育和生长的调节机制,必须从毛乳头细胞自身分泌的生物活性成分着手,这也是今后毛囊研究的内容之一我们在建立毛乳头细胞体外培养模型基础上,应用低传代基金项目:国家自然科学基金资助项目()重庆市攻关课题()作者单位:重庆,第j军医大学西南医院皮肤科通信作者:郝飞Email:Haofeimai论着毛乳头细胞的培养上清液制成条件培养基,观察其对高传代毛乳头细胞生长状态的影响探讨不同生长状态下毛乳头细胞分泌生物活性成分的能力为进一步分析毛乳头细胞生长活性蛋白奠定基础材料与方法一,材料DMEM培养基(低糖)购自Sigma公司DHanks液,Hanks液,新生小牛血清购自Hyclone公司Hepes购自BoehringerMannheim公司胰蛋白酶购自华美生物工程公司基础培养基:lmLDMEM液中含新生小牛血清gHepes,g碳酸氢钠,gL一谷氨酰胺,过滤除菌分装一冻存备用条件培养基:基础培养基,培养主堡鏖杂声箜!鲞笙d的,,代毛乳头细胞的基础培养基(收集其上清液配制成条件培养基)HTdR工作液:将HTdR原液倍稀释,用时加入tzL(I~Ci)孑L板,孑L板,孑L板,m微孑L隔膜:购于Costar公司二,实验方法细胞培养与传代:人正常头皮毛囊的毛乳头细胞,培养方法参照本科建立的方法u收集培养d的,,代毛乳头细胞培养基,rmin离心,一保存细胞融合后用胰酶消化后按:传代,接种到mL培养瓶中培养细胞生长曲线:代毛乳头细胞用基础培养基培养,代毛乳头细胞分别用条件培养基和基础培养基培养隔日计数次,分别计数这组细胞个时相点根据细胞数绘制成细胞生长曲线图代和代毛乳头细胞共培养试验:试验共分组,孑L为组,分别是:代和代毛乳头细胞共培养组,代毛乳头细胞对照组和代毛乳头细胞对照组取一孑L板,将浓度为×smL的代毛乳头细胞悬液加入其中的孑L每孑LmL这孑L中每孑L再补加基础培养基至mL,在,含CO饱和水汽条件下培养d后,用吸管吸出其中孑L培养基,用基础培养基洗板次后分别插入个m微孑L隔膜,将代毛乳头细胞悬液加入微孑L隔膜中,每孑L内含代毛乳头细胞数为×,然后给个微孑L隔膜中分别补加基础培养基至mL已接种代毛乳头细胞悬液的另孑L为代毛乳头细胞对照孑L同时在孑L板中空余的孑L内加入l代毛乳头细胞悬液作为代毛乳头细胞对照孑L,每孑L内含代毛乳头细胞数为×孑L板在,含CO饱和水汽条件下培养,每天换次培养基,在细胞融合前观察每孑L细胞的生长状态代毛乳头细胞凝集性生长重现试验:取mL的代毛乳头细胞培养瓶,在细胞融合后弃去培养基,每瓶中加入胰酶mL消化min,倒出胰酶,加入Hanks液mL作用min后倒出,再加入mL基础培养基,用吸管吹散毛乳头细胞,:传代,其中瓶每瓶加入条件培养基mL:另瓶每瓶加入基础培养基mL所有培养细胞在,含CO饱和水汽条件下培养,每天换次培养基,在细胞融合前观察每孑L细胞的生长状态HTdR掺人试验:取基础培养基培养的毛乳头细胞(,,,,代)和条件培养基培养的毛乳头细胞(,代)各代瓶,待细胞融合后弃去培养基用胰酶消化后加入mL相应培养基,用吸管吹散毛乳头细胞使其成为悬液后接种于孑L板内,每孑L接种×毛乳头细胞,每一培养瓶平行孑L,每孑L用对应培养基补加至mL,在,含CO饱和水汽条件下培养h,最后加入tzCiHTdR工作液培养h后在BeckmancoulterLSMultipurposescintillationcounter上测定cmin值三,统计方法SPSS分析软件细胞生长曲线用多因素试验与方差分析(重复测量试验的方差分析),HTdR掺人试验用t检验(配对样本的f检验)结果一,细胞生长曲线根据两代细胞在不同培养基中测得的各时相细胞数,绘成生长曲线图(图)可见代毛乳头细胞条件培养基组细胞生长明显优于代毛乳头细胞基础培养基组(F=P),但比代毛乳头细胞基础培养基组差(F=:P)用SPSS重复测量试验的方差分析处理后组数据差异有显着性(F=P)二,代和代毛乳头细胞共培养代和代毛乳头细胞共培养后,可见代毛乳头细胞有凝集性生长趋势(图),而代毛乳头细胞对照组未出现这种现象说明低传代毛乳头细胞分泌的活性蛋白可有效诱导高传代毛乳头细胞向低传代生长状态转化三,条件培养基作用于代细胞,,代毛乳头细胞加入基础培养基在细胞融合前可明显见到凝集性生长现象,而当毛乳头细胞传代至代时凝集性生长现象消失,用条件培养基作用于代毛乳头细胞,可见代毛乳头细胞旦×螽匪图毛乳头细胞生长曲线罔~'dfLmLd卅"II的凝蜒K现象()【而代t乳,圳包』】求J禹继{I:rIl蒙H"辘(纠qH一H捧凡试验J{坫till}lii:荐琏Jf'l:诈"hrlft,乳细叶乜n【lrI{删tIo代的一min删芷仉i仆圳IIJI{IIlIII行到J砌持【眦埘棹fI"J{t救I多iIIdl{Ilfl『噬渐降nt址』e足lmft乳,【【胞降低曲北IJ川条Jff非liEJ,~}释高传代ELftif啦iI}f)Jll,In'HTIt删定ini"删定nr『舒圳灯OlIIjI川儿厅yl川rf'IlIii定瞢r时jcfuI(…)IInfJ=Pc】】)ll前对,乳细l世l均刊究啦现一此性坦l眨i眦子刈E瞧的fl:响删n川』frr~J已乳细乜J矗IJ【艟nJ是训眦台I盯lf多『化I:T"Y细幢lql!J』昕I艇集什们特什'然,砖毛乳~:flJ胞忖K的机殳物'#特口j倚缺:Eft研酋,卜lilJ!{J的研究,我lrE乳细旰乜Jfol,艇皋,kK:岳l,的物功能明媸J凝壤『K,,『辕的西导毛鞋形u能JIT茼次肚川^,『芷凝集阡,l状卷构E乳iE是flrlJ~川r移成jr讣化成的毛丧一缃提乳胞凝啦iKkS下rq~q丧垃种席导巴唆牛K的龋IIfll舡非:lk志这种特城躺肫覃消世就足溉,乳,,自r氍P'I{KIAt态l叮能』嗍,C逝生K『能有曝情联泵骶f引E:iL川胞}【:(,襁iJli~,J,Jl北川晴本地怔传f巨乳,fill恤n蚺球Lr戍祭f葬U"J于qfE乳圳胞吐JIlK『IIif'~llJl优JJ~dliL纠芹l,J川』雌传代,乳胞商ffE乳,圳】c!!养艟l苛悖代胞…rfJfrr,他f…f似帕艇啦:Ki戈忿Jfl艄泄秆…脱,Ik末说i】LIf代E乳,钏』乜旁'M计I川【再导f々f巴乳儿钏J地iI}尚E第l:北州{址寮别蚺捧肫fl:JiqJ鞋华fKfB乳'~fill他II』,u代亡乳钏JJ也!土I}JEIJi'l~jq,lKMTillEligV,代E乳圳JI能圩渺此ll物rJI』~Cffj}lljL』条fj芥F:fiJIIrrf已乳~fll地帑ttIIidl"ill俺懂Il【优J刈"H绀l范叫祭什持柞l』仃f世心II乇门n川J'扶挺nI传fE于L川胞讣r'IlL,j物学参考文献}MliwIlkIt|IliiUlllJII"HIlfiLriv~…ltII…lJIiIT【'tIIll~rl'IJl…d|Il"j:l}日Jf…啮ffrI,lLl'…世I牛r,IlkGJfh"扑fI,J,g儿I,:~L,州fl,IIII:~t"F}圳禁!I…KIIil{I……IImIh}IIiiII"】I』一ff:圳【|JJfl'tE【…llb"n'}l#ILl鼻IuHnJ【'【ry刈nliL'LIfll}I'J:止"【』杠瑚E刚IJ,JIJfillIIJf'j儿I一(^,Iillt恤鞋…tJ】ii}N),{【IiifIiJ"{iI

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