菌种复活传代保藏销毁
操作规程
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文件名称 菌种复活、传代、保藏、销毁操作规程 文件编号
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1.目的
规范
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菌种复活、传代、保藏、销毁
标准
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操作。
2.范围
适用于本公司检定菌的复活、传代、保藏、销毁。
3.职责
质量部生化检验员按本规程进行操作。
4.程序
4.1 冷冻菌种的复活
清洁安瓿(可用75%乙醇)后，用砂轮在安瓿上部划线，将安瓿掰开。用一无菌吸管吸取1,2ml适量的液体培养基(生孢梭菌用液体硫乙醇酸盐培养基;金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌用营养肉汤;白色念珠菌、黑曲霉菌用液体真菌培养基)滴加到安瓿中，轻轻旋转安瓿使冻干菌种和液体培养基充分混合并完全溶解，再将安瓿内的菌液转移至相应的培养基试管中，根据菌种类型采用适宜的培养条件(细菌培养温度32.5??2.5?，18,24h;真菌培养温度25.5?2.5?，3,5d)下培养，观察培养基是否浑浊，浑浊说明菌种复活生长(如不浑浊，细菌应延长培养时间至7d以上，真菌应延长培养时间至14d以上，仍不浑浊，按相关
规定
关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定
灭菌处理，并且丢弃之前应灭菌处理并详细记录)。
4.2 菌种确认
用无菌接种环取上述培养物，在相应的培养基平板(营养琼脂、大豆胰蛋白胨琼脂)上或相应的细菌鉴别平板(如伊红亚甲蓝、麦康凯、十六烷基三甲胺、甘露醇高盐)上划线分离单个菌落，置适宜条件下培养(若该类微生物为厌氧菌，则培养条件应为厌氧条件)。以同样方法取真菌和酵母菌至SDA(萨布罗培养基)平板上或玫瑰红钠培养基平板上，23,28?下培养7d;培养后观察是否具有典型的菌落状态，然后挑取单一纯菌落，进行革兰染色、镜检，观察其染色特征及菌体形态以确定菌种。
4.3 污染处理
假如在该平板上发现有其他菌落生长，则说明操作有污染或菌种不纯。要将该污染培养物做灭菌处理，寻找原因，重新分离挑选纯菌落。
4.4菌种的传代
4.4.1试验用菌种每月传代一次，在阳性室内进行传代。
4.4.2先点燃酒精灯，在火焰旁的上部空间操作。烧灼接种环。
4.4.3再将原有的菌种斜面培养基(简称菌种管)与待种的新鲜斜面培养基(简称接种管)，持在左手拇指、食指及中指之间，要注意能清楚地观察到斜面，菌种管在前，接种管在后。应斜持试管呈45?角，使试管内斜面向上，两试管口平齐，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。 4.4.4首先，以右手在火焰旁转动两管的棉塞，以便接种时易于拔取。再以右手持接种环的柄端，垂直或稍斜地把接种环在火焰上烧灼。顶端的环必须烧红，以彻底灭菌。环以上凡接种时可进入试管
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的部分，也应通过火焰烧灼。烧灼时，应把环置于酒精灯的外焰上，因外焰的温度比内焰高，容易烧红。
4.4.5使用右手的小指和手掌之间以及无名指与小指之间，在火焰旁分别拔出两支试管的棉塞，持住。再将试管口在火焰上通过，以杀灭管口可能沾污的细菌，但勿烧烫。
4.4.6先将烧灼过的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，如有熔印则表明接种环未冷却，能烫死细菌。一定待冷后，再从斜面上挑取菌苔少许。取出时接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管，在斜面上轻轻划线接种。划线时一般先由下而上划一直线后，再由下而上划曲线。操作过程应迅速，勿使菌苔沾至管壁或管口。
4.4.7当接种完毕，立即将管口通过火焰灭菌，右手到火焰旁塞上棉塞，不要将管口离开火焰旁去迎接右手的棉塞。最后将接种环烧灼灭菌放置原处，再把可能未塞紧的棉塞塞紧，即可进行培养。 4.4.8操作过程中，如因不慎使棉塞触及火焰而着火，切勿用口吹，须在刚刚着火时迅速塞入试管，因管内氧气不足会很快熄灭。若棉塞外端着火,可用手捏熄。若棉塞烧坏不宜再用，可另取末接种斜面培养基上的灭菌棉塞，代替塞上。
4.4.9应记好传代记录。
菌种的保藏 4.5
4.5.1将试管斜面菌种放入冰箱中4,6?冷藏保存。
4.5.2将传代并经过培养后的菌种放入冰箱中4,6?保存。
每支保存菌种需标明菌名、标准编号、传次、传代日期。
4.6 菌种的销毁
4.6.1菌种使用后或超过贮存期的应进行销毁。
4.6.2需销毁的菌种，应用高压蒸汽(121?)灭菌20分钟。
4.6.3灭菌后，再进行清洗和处理。
4.6.4销毁的菌种应做好记录。销毁时由化验负责人监督销毁，保管人员负责销毁。 5.相关记录
无
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浙公网安备 33021202002483