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针刺对大鼠痛域以及血清SOD、MDA的影响.doc

针刺对大鼠痛域以及血清SOD、MDA的影响

zeng祥军
2019-05-31 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《针刺对大鼠痛域以及血清SOD、MDA的影响doc》,可适用于医药卫生领域

目前,关于针刺镇痛机制的研究多集中在对神经结构、神经递质、内分泌、免疫等方面,而对氧代谢相关物质和氧自由基与针刺镇痛之间的关系则未见报道。笔者通过观察电针对大鼠痛阈和大鼠血清中氧代谢相关指标(SOD、mDA)的影响,试从氧代谢、自由基的角度探讨针刺镇痛的作用机制。材料与方法实验动物健康SD大鼠(华中科技大学同济医学院实验动物中心提供,清洁级)只,雌雄各半,体重,所有动物均在通风及温度、湿度适宜的条件下饲养,正常进食它gTg。适应性喂养一周。主要试荆、设备超氧化物歧化酶(SoD)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所),丙二醛(MDA)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所),分析纯冰醋酸、乙醇。SW一光热尾痛测试仪(成都泰盟科技有限公司),C,一II型电针治疗仪(上海医疗器械厂),分光光度计(上海第三分析仪器厂)。实验方法动物分组只SD大鼠按随机分组原则分成正常对照组、电针非经非穴组、电针穴位组。()正常对照组:不作任何针刺处理,先测定其基础痛阈:SOD、MDA,min后再测其痛阈、sD、MDA。()电针非经非穴组:电针前测基础痛阈、SOD、MDA,电针左侧“足三里”下mm旁开mm,左侧“昆仑”上mm旁开mm,持续min,电针结束后再检测其痛阈、SOD、MDA。()电针穴位组:电针前测其基础痛阈、SOD、MDA。电针左侧“足三里”与“昆仑”穴,持续rain,电针结束后再检测其痛阈、SOD、MDA。电针方法电针穴位组取大鼠左侧“足三里”与“昆仑”穴,取穴标准及针刺深度按照中国针灸学会实验针灸研究会华兴邦等制定的(g用动物腧穴图谱》标准而定。。足三里”,膝关节后外侧,在腓骨小头下约mm处,直刺mm“昆仑”,后肢外踝与跟腱之间的凹陷中,直刺mm。采用×mm不锈钢无菌针进行针刺,接C,一Ⅱ型电针治疗仪,疏密波,频率Hz,强度<lmA。以针柄颤动、大鼠后肢肌肉轻微抖动而不嘶叫,保持安静为度,持续rain。电针非经非穴组针刺部位为“足三里”下mm旁开mm,“昆仑”上mm旁开mm,其他参数同电针穴位组。标本采集将清醒鼠装入深颜色的布袋中,将鼠身裹紧,露出尾巴,用酒精涂擦或用温水浸泡使血管扩张。剪断尾尖后,用手轻轻地从尾根部向尾尖挤捏,并将肝素抗凝管置于尾尖下部,盛装血液。取血后,用棉球压迫尾尖止血。指标检测痛阈测定以大鼠对伤害性刺激所引起的甩尾反应时间作为痛阈指标。原理是利用聚光灯发出的辐射热刺激大鼠尾巴,引起大鼠甩尾。甩尾反应时间缩短代表痛阈降低,甩尾反应时间增加代表痛阈升高。将准备实验的老鼠装入固定筒内,尾部暴露于外,实验前先用乙醇擦净鼠尾,墨汁涂于尾部的下处作为光刺激点的标志将鼠尾放入导槽内,使光刺激点标志正对发光处,待动物安静后即可进行实验。打开光热尾痛测试仪的电源开关,进入操作界面。调整并选定光照强度为的旋钮。确认老鼠尾巴放置到位后,即可按“起停”按钮开始实验。此时出光口有耀眼灯光射出。老鼠一旦甩尾后,光热尾痛测试仪状态显示“停止”。表明实验结束,记录“反应时间”。隔分钟后再测一次,取两次的平均值作为大鼠此时段的痛阕。SOD、MDA检测严格按照试剂盒说明书步骤操作,以黄嘌呤氧化酶法检测SOD,硫代巴比妥酸法检测MDA。以分光光度计检测两者的吸光值,并依据配置试剂浓度按公式计算出SOD活力、MDA浓度。统计方法计量资料均采用均数标准差(is)表示,数据运用SPSSl统计软件进行处理,组问比较采用单因素方差分析。结果各组针刺前后痛闲、SOD、MDA的比较(见表)表各组针刺前后痛嗣、SOD、MDA的比较(iB)表显示:①各组间的基础痛阈、SOD、MDA等指标均无显著性差异(P>)②电针穴位组:经电针诱导rain后,其痛阈、SOD等指标均较电针前显著升高,MDA显著降低,经统计学处理,均有极显著性差异(P<O)③电针非经非穴组:经电针诱导rain后,SOD较电针前升高,有显著性差异(P<),MDA、痛阈较电针前无显著性差异(P>O)④正常对照组:痛阈、SOD、MDA等指标min前后检测无显著性差异(P>)。电针后各组大鼠痛阚及血清SOD、MDA含量的比较(见表)裹电针后各组大鼠痛阐及血清SOD、MDA含量的比较(i)表显示:①电针穴位组经电针刺激后,大鼠痛阈、血清SOD含量明显升高、MDA含量明显降低,与正常对照组相比,均有极显著性差异(P<)②电针非经非穴组SOD含量亦有升高,与正常对照组相比,有显著性差异(P<)③电针后,电针穴位组痛阈、SOD升高和MDA降低与电针非经非穴组比较均有显著差异(P<)。讨论现代生理学认为,氧代谢是人体内最基本、最重要的生命现象和过程,体内任何系统的生理活动都离不开氧代谢,反之,疾病的发生也与氧代谢异常密切相关。没有了氧代谢,生命就无法延续。生理情况下,机体内可产生少量的氧自由基,其发挥生理作用(参与前列腺素及凝血酶原的合成、抗炎)后能够被体内抗氧化酶迅速消除,保护机体免受损伤。过剩的氧自由基则攻击生物膜中的不饱和脂肪酸,引起脂质过氧化作用,并由此形成脂质过氧化物MDA。其含量可以反映机体细胞受自由基攻击的严重程度,SOD的活性可反映机体清除氧自由基的能力。大量研究显示:氧代谢过程中产生的氧自由基在体内表达的上调可能是产生疼痛的原因之一,反之疼痛可以进一步导致氧自由基代谢紊乱,使血清SOD、MDA含量失去动态平衡。,Haquec¨发现慢性原发性头面痛时氧自由基(OFR)生成增多,他们测定受试者体内·OH的标志物一,一二羟苯甲酸),结果发现头面痛患者血浆及尿中均有高水平的DHB,推测可能是由于心理紧张造成体内氧化量增加,引发OFR,尤其是·OH增加,·OH再通过攻击组织引发疼痛。Pascu等报道十二指肠溃疡痛与OFR的关系,他们采用强效自由基清除剂如SOD,经内窥镜对名十二指肠溃疡痛患者作环溃疡注射后,疾病均消失,说明OFR参与了十二指肠溃疡痛。宋氏等在OFR致痛方面作了探索,发现OFR在外周和脊髓均有致痛作用,而氧自由基清除剂如SOD、维生紊E则可拮抗此致痛作用。樊氏㈨等在研究细辛对小鼠组织氧自由基代谢的影响中发现,细辛能够降低氧自由基的含量,减轻对组织的损伤。通过本实验观察到,电针穴位组经电针刺激min后,痛阈较针刺前显著升高,经统计学处理,有极显著性差异(P<)血清组织中SOD含量明显升高,MDA含量明显降低,均有极显著性差异(P<),表明电针穴位提高大鼠痛阈的同时对OD、MDA含量具有显著的调节作用。本实验结果表明,电针大鼠“足三里”、。昆仑”等穴具有显著的镇痛作用同时也观察到SOD、MDA与针刺镇痛效应有着密切的联系,电针能提高血清组织SOD的含量、降低MDA的含量。提示:针灸对氧代谢自由基的调节可能为针刺镇痛效应的机制之一,我们正在继续深入这方面的研究。

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